杨欣
- 作品数：9 被引量：38H指数：3
- 供职机构：上海交通大学医学院附属瑞金医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金吉林大学研究生创新基金资助更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 低糖性脑白质损伤病理机制研究
- 目的:探讨低糖环境下脑白质损伤和可能的病理机制,为临床低血糖脑病治疗提供确实的理论依据和更为合理的治疗方向.方法:本研究采用了目前国际公认研究脑白质损伤的体外模型:小鼠视神经(MON)的复合动作电位(CAP)实时动态监测...
- 杨欣陈生弟
- 稳定融合表达拮抗Aβ1-42肽细胞内毒性的适配子策略及其作用机制的研究
- 随着生命科学理论发展和方法学的进步,蛋白质的许多具有特殊生物学活性的结构如短肽的研究也取得了可喜进展。在浩瀚的科技文献中,每天都有关于生物活性肽生物学功能和意义的新发现。尽管如此,但由于生物性肽体内半衰期短,水溶液稳定性...
- 杨欣祝捷
- 分泌表达神经保护短肽重组慢病毒对SK-N-SH细胞的保护作用被引量：2
- 2007年
- 目的构建分泌表达神经保护短肽NAP的重组慢病毒载体,观察重组慢病毒对APPsw转基因人神经母细胞瘤细胞(SK-N-SH)的保护作用。方法采用PCR方法克隆融合基因NT4-NAP cDNA;磷酸钙沉淀法包装重组慢病毒Lent/NT4-NAP;平行包装含有报告基因EGFP的报告病毒;SK-N-SH细胞分为正常对照组、单纯APPsw转基因组、空慢病毒载体+APPsw转基因组和NT4-NAP慢病毒+APPsw转基因组,在倒置相差显微镜下观察形态学改变;MTT检测细胞增殖活力;AnnexinV/PI法流式细胞术检测各组细胞凋亡和坏死情况。结果基因测序证明克隆的NT4-NAP cDNA与实验设计完全一致;FACS检测重组病毒滴度为2×106U/L;单纯APPsw转基因组,大量细胞出现凋亡及坏死(与正常对照组比较P<0.01);NT4-NAP慢病毒+APPsw转基因组的细胞数量和活力明显较单纯APPsw转基因细胞改善(P<0.01);FACS检测无论凋亡还是坏死细胞的比率保护组都明显低于加害组(P<0.01)。结论成功构建了能够分泌表达NAP的重组慢病毒载体;重组病毒能够高效转染人神经母细胞瘤细胞;重组病毒表达的蛋白能对AD细胞模型起到很好的保护作用。
- 杨宇吴江杨欣孙欣吴昊王全颖杨广笑
- 关键词：NAP慢病毒人神经母细胞瘤细胞
- 携强绿色荧光蛋白重组慢病毒的构建及其在原代培养SD大鼠皮层神经细胞中的表达被引量：7
- 2007年
- 目的:构建携带强绿色荧光蛋白的重组慢病毒(Lent/EGFP),感染原代培养SD大鼠皮层神经细胞,观察其感染能力及报告基因的表达水平。方法:采用PCR方法克隆EGFP cDNA;将EGFP基因片段亚克隆到慢病毒穿梭质粒多克隆位点内;用4质粒共转染系统在293ET细胞中包装出携带EGFP基因的重组慢病毒Lent/EGFP;重组病毒感染NIH 3T3细胞,FACS检测重组病毒滴度;Lent/EGFP感染体外培养的原代SD大鼠皮层神经细胞,共聚焦荧光纤维镜观察原代神经细胞内绿色荧光蛋白的表达情况。结果:基因测序证明克隆的EGFP cDNA与GenBank提供的序列完全一致;琼脂糖凝胶电泳结果证实EGFP正确插入pLenti6/V5TOPO;FACS检测病毒滴度为2×106;在体外分离培养的原代SD大鼠皮层神经细胞中,重组病毒感染72 h后可见较强的绿色荧光蛋白表达。结论:采用改良的4质粒共转染方法成功构建了携EGFP的重组慢病毒载体;Lent/EGFP对非分裂的神经细胞具有较强的感染能力,且携带的EGFP基因可以在神经细胞内有效表达。
- 杨宇吴江杨欣孙欣吴昊王全颖杨广笑
- 关键词：慢病毒属
- 可分泌表达Aβ阻断肽融合基因原核表达载体的构建
- 2010年
- 目的构建神经营养素3(NT3)信号肽、Aβ1-42阻断肽ABAD-DP、溶源肽HA2及穿膜肽TAT融合基因的原核表达载体pBV220/NAHT,为将Aβ1-42阻断肽ABAD-DP用于AD基因治疗提供实验基础。方法采用非对称互补引物/模板法,分别制备两端含有酶切位点的ABAD-DP和HA2-TAT的cDNA,将其连接到NT3的信号肽3′端,组成融合基因NT3-ABAD-DP-HA2-TAT(NAHT),再将该融合基因亚克隆于原核表达载体pBV220,构建原核表达载体pBV220/NAHT。结果经DNA测序证实成功克隆ABAD-DP和HA2-TATcDNA;经限制性内切酶酶切证实成功将ABAD-DP和HA2-TAT基因重组到NT3信号肽的3′端,并将融合基因亚克隆于pBV220载体内。结论成功构建了表达NT3信号肽、阻断肽ABAD-DP、融源肽HA2及穿膜肽TAT融合基因的原核表达载体pBV220/NAHT。
- 杨宇杨欣孙欣吴昊吴江
- 关键词：神经营养素3基因治疗原核表达载体
- NT4-NAP融合基因原核表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达被引量：20
- 2004年
- 杨宇吴江杨欣胡林森
- 关键词：原核表达载体大肠杆菌
- 可分泌表达神经保护肽的重组慢病毒对闭合性脑损伤小鼠的神经保护作用
- 2010年
- 目的:通过滴鼻给药途径,给予闭合性脑损伤小鼠可分泌表达神经保护肽NAP的重组慢病毒,观察该重组病毒经鼻-脑通路对中枢神经系统的保护作用,为携带可分泌表达NAP的重组慢病毒治疗神经系统退行性疾病提供理论依据。方法:选用8～12周成年雄性昆明小鼠54只,随机分为4组:空白对照组10只(Control组)、重锤加害组20只(CHI组)、重组慢病毒rLent/NT4-NAP保护组20只(rLent组)和重组慢病毒rLent/GFP组4只(GFP组)。观察各组小鼠的死亡率、神经功能损伤(NSS)评分、脑水肿含量和病理改变情况。应用共聚焦显微镜观测GFP组小鼠鼻黏膜、嗅神经和脑组织内绿色荧光表达情况。结果:rLent组小鼠死亡率(15%)明显低于CHI组小鼠(55%);rLent组小鼠NSS评分在创伤后1、3、5和7d均显著低于CHI组(P<0.01);rLent组小鼠创伤后24h的脑水肿含量明显低于CHI组(P<0.01);HE染色显示rLent组小鼠病理改变明显轻于CHI组;GFP组仅在鼻黏膜处可见呈条索样的绿色荧光,而在嗅神经及大脑则未发现绿色荧光。结论:分泌表达NAP的重组慢病毒可感染鼻黏膜细胞,分泌表达的短肽NAP能够改善闭合性脑损伤小鼠的神经功能;未加装分泌表达元件的重组病毒rLent/GFP仅能感染鼻黏膜细胞,不能通过血脑屏障进入中枢神经系统。
- 杨宇杨欣孙欣吴昊王全颖杨广笑吴江
- 关键词：慢病毒闭合性脑损伤
- 我国北方地区多发性硬化164例的临床特点被引量：12
- 2005年
- 目的通过分析总结我国北方地区164例多发性硬化(MS)的临床资料,探寻MS的临床特点。方法从临床表现和影像学等多方面对164例MS病例进行回顾性分析。结果164例MS病例中,男48例,女116例;发病年龄4．5个月-66岁,平均29．2s岁;<15岁的早发型占9．8％,发病高峰在20-40岁;39％的患者有明确诱因;主要以急性或亚急性起病(73．1％);首发症状以肢体无力(36．6％)、肢体感觉障碍(25．6％)和视力减退(22．6％)最常见;复发缓解型占58．5％。本组头部MRI阳性率为93．5％,脊髓MRI阳性率为87．5％,以半卵圆中心、脑室周围、基底节和脑干等处多见。结论本组MS患者的临床特点表现为发病早,起病急,病程短,视神经易受侵犯,小脑较少受累。MRI对于发现MS病灶有很高的敏感性。
- 杨欣周春奎吴江张昱
- 关键词：炎性脱髓鞘病多发性硬化磁共振成像
- 稳定融合表达拮抗Aβ<sub>1-42</sub>肽细胞内毒性的适配子策略及其作用机制的研究
- 随着生命科学理论发展和方法学的不断进步,蛋白质的许多具有特殊生物学活性的结构如短肽研究也取得了可喜的进展。在浩瀚的科技文献中,每天都有关于生物活性肽生物学功能和意义的新发现。尽管如此,但由于生物性肽体内半衰期短,水溶液稳...
- 杨欣
- 关键词：活性氧簇适配子慢病毒
