杨斌
- 作品数：24 被引量：78H指数：6
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- 小鼠造血干细胞体外衰老模型的构建及其相关生物学被引量：4
- 2010年
- 目的建立造血干细胞(HSCs)体外衰老模型,探讨其衰老的相关生物学调控机制,为寻找延缓HSC衰老方法奠定基础。方法用免疫磁性分选法分离、纯化小鼠Sca-1+HSCs,用流式细胞术鉴定分选细胞纯度,免疫荧光检测分选细胞Sca-1+表达。用三丁基过氧化氢(t-BHP)100μmol/L诱导Sca-1+HSCs 6h,建立HSCs衰老体外模型。采用造血祖细胞集落培养,细胞周期分析和衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色观察衰老HSCs的生物学特点。DNA印迹法(Southern blotting)与TRAP-PCR SYBR Green染色法检测HSCs端粒长度和端粒酶活性。RT-PCR法检测衰老相关基因p16Ink4a、p19Arf、p53、p21Cip1/Waf1 mRNA的表达水平。结果免疫磁性分选法分离、纯化的Sca-1+HSCs纯度可达(87.33±1.25)%。100μmol/L的t-BHP作用Sca-1+HSCs 6h,其体外培养形成造血祖细胞集落能力,自我更新及多向分化潜能显著低于对照组,处于G1期细胞比例增加,SA-β-gal染色阳性细胞数增加。衰老Sca-1+HSCs的端粒缩短,端粒酶活性下降,p16Ink4a、p19Arf、p53、p21Cip1/Waf1mRNA的表达水平明显增高。结论用t-BHP能建立Sca-1+HSCs体外细胞衰老模型,提示p16Ink4a-Rb通路和p19Arf-Mdm2-p53-p21Cip1/Waf1通路在t-BHP诱导Sca-1+HSCs衰老过程中发挥重要作用。
- 周玥杨斌姚欣王亚平
- 关键词：造血干细胞体外模型端粒端粒酶反转录-聚合酶链反应小鼠
- 造血干细胞体内衰老模型的构建及相关生物学研究
- 目的：
生、老、病、死是生命的自然规律。衰老是机体发育成熟以后伴随着时间的推移体内各种细胞、组织与器官逐渐发生结构和功能不可逆转的、全面的衰退过程。最新研究认为：生物体的衰老实际上是其体内干细胞的衰老，所有的衰老现...
- 杨斌
- 关键词：造血干细胞衰老模型老年性疾病
- 文献传递
- 造血干细胞衰老模型的建立及其评价被引量：1
- 2009年
- 造血干细胞衰老模型的建立是研究造血干细胞衰老机理与延缓其衰老的重要途径,目前可通过体内和体外两种途径实现。体内衰老模型可通过供体造血干细胞在受体内连续性移植建立,体外衰老模型可通过白消安、三丁基过氧化氢等致衰老药物和电离辐射等方法建立。造血干细胞衰老模型建立后,可通过其自我更新和多向分化能力检测、细胞周期分析、β-半乳糖苷酶染色等方法检测和评价造血干细胞的衰老变化,并应用Southern bloting,Western bloting,RT-PCR等方法检测造血干细胞衰老相关基因和蛋白变化。本文就造血干细胞衰老模型的建立以及评价方法综述如下。
- 杨斌周玥王亚平
- 关键词：造血干细胞细胞周期分析衰老相关基因衰老机理
- Sca-1^+造血干/祖细胞重建致死剂量辐射小鼠造血功能的作用被引量：10
- 2010年
- 背景:近年来,造血干细胞移植在国内外已广泛开展,移植的造血干细胞能否有效重建造血成为造血干细胞移植领域的研究热点问题之一。目的:观察Sca-1+造血干/祖细胞(hematopoietic stem/progenitor cell,Sca-1+HSC/HPC)对造血衰竭小鼠造血功能重建的作用。方法:雌性C57BL/6受体鼠给予致死剂量60Coγ射线照射后分2组,对照组:输注无菌PBS;移植组:移植免疫磁性分选法分离纯化的同系雄性C57BL/6小鼠Sca-1+HSC/HPC;检测受体鼠生存时间;外周血白细胞、红细胞比容、血小板的变化;脾湿质量及脾集落数;PCR检测Y染色体(Sry基因)表达确定受体小鼠重建造血的细胞来源。结果与结论:移植组受体鼠30d存活率、白细胞、红细胞比容、血小板、脾湿质量及脾集落数均明显高于对照组(P<0.05);Y染色体PCR分析,证实雌性受体小鼠重建造血的细胞来源于雄性供体。提示Sca-1+HSC/HPC移植后能重建造血衰竭小鼠造血功能。
- 周玥杨斌姚欣王亚平
- 关键词：造血功能重建造血小鼠
- 造血干细胞体内衰老模型的建立及相关生物学研究
- 杨斌周玥姜蓉姚欣王亚平
- 人参皂苷Rg1延缓造血干细胞衰老过程中端粒长度和端粒酶活性的变化被引量：14
- 2011年
- 目的:探讨端粒长度和端粒酶活性在人参皂苷Rg1延缓造血干细胞(HSC)衰老中的作用。方法:免疫磁性分选法分离纯化小鼠Sca-1+HSC后分5组:对照组,衰老模型组,Rg1组,Rg1治疗衰老组,Rg1延缓衰老组。衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色、流式细胞术细胞周期测定和造血祖细胞混合集落(CFU-Mix)培养分析Rg1调控Sca-1+HSC衰老的生物学作用;Southern blotting与TRAP-PCR SYBR Green法检测端粒长度和端粒酶活性。结果:与衰老模型组相比,Rg1治疗组和Rg1延缓衰老组Sca-1+HSC的SA-β-Gal染色阳性细胞百分比降低,G1期细胞比例下降,生成CFU-Mix数相对增加,端粒长度缩短明显减少,端粒酶活性增强;Rg1延缓衰老组各检测指标变化均较Rg1治疗组明显。结论:Rg1可能通过激活端粒酶活性和减少端粒长度缩短发挥延缓和治疗Sca-1+HSC衰老的作用。
- 周玥姜蓉杨斌姚欣王萍刘典锋王亚平
- 关键词：人参皂苷RG1造血干细胞衰老端粒端粒酶
- 人参皂苷Rg1延缓造血干/祖细胞衰老的实验研究
- 本课采用供体造血干/祖细胞(HSC/HPC)连续体内移植和HSC/HPC体外衰老模型复制方法,从体内和体外两条途径系统深入地探讨人参皂苷单体Rg1延缓HSC/HPC衰老调控作用。旨在为寻找延缓造血干细胞衰老的方法提供理论...
- 周玥姜蓉杨斌王亚平
- 人参皂苷Rg_1在造血干/祖细胞连续移植中抗细胞衰老的作用机制被引量：6
- 2013年
- 目的探讨人参皂苷Rg1在造血干/祖细胞(HSC/HPC)连续移植中抗细胞衰老的作用机制。方法免疫磁性分选法分离纯化的雄性供体小鼠Sca-1+HSC/HPC连续移植3代构建HSC/HPC衰老体内模型。经60Coγ射线致死剂量辐射的雌性受体小鼠分成4组:对照组、模型组、人参皂苷Rg1(20 mg/kg)治疗给药组、人参皂苷Rg1(20 mg/kg)预防给药组,每天给药1次,连续给药30 d。荧光定量PCR法检测各组小鼠Sca-1+HSC/HPC p16INK4a、p19Arf、p53、p21Cip1/Waf1基因的表达,Western blotting法检测p16INK4a、p21Cip1/Waf1、CDK4、CDK2、CyclinD1、Cyclin E蛋白的表达。结果与模型组比较,各代移植Sca-1+HSC/HPC雌性小鼠中,人参皂苷Rg1治疗给药组及预防给药组小鼠Sca-1+HSC/HPC p16INK4a、p19Arf、p53、p21Cip1/Waf1基因及p16INK4a、p21Cip1/Waf1、CyclinD1蛋白表达下调;CDK4、CDK2、CyclinE蛋白表达上调。人参皂苷Rg1预防给药组小鼠各项检测指标的改善均优于其治疗给药组。结论人参皂苷Rg1可能通过调控p16INK4a-Rb和p19Arf-p53-p21Cip1/Waf1信号转导通路,对Sca-1+HSC/HPC连续移植衰老模型发挥拮抗作用。
- 周玥姜蓉姚欣杨斌蔡世忠刘俊刘典锋王亚平
- 关键词：人参皂苷RG1造血干祖细胞信号转导通路
- 人参皂苷Rg_1延缓造血干细胞衰老与p16^(INK4a)表达关系的研究被引量：16
- 2011年
- 目的:探讨人参皂苷单体Rg1延缓造血干细胞(HSC)衰老与p16INK4a的表达调控关系,为寻找延缓HSC衰老途径提供理论和实验依据。方法:免疫磁性分选法分离纯化Sca-1+HSC后分组。对照组常规培养;衰老组运用三丁基过氧化氢(t-BHP)复制衰老模型;Rg1组在对照组基础上加入10μmol.L-1 Rg1共培养;Rg1延缓衰老组给予10μmol.L-1 Rg1预处理后,复制衰老模型;Rg1治疗衰老组,衰老模型复制后,给予10μmol.L-1Rg1抗衰老处理。衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)细胞化学染色、流式细胞术分析细胞周期和造血祖细胞混合集落(CFU-Mix)培养确定Rg1延缓或治疗Sca-1+HSC衰老生物学作用。RT-PCR及Western blotting检测衰老相关基因p16INK4a mRNA及蛋白的表达。结果:Rg1延缓衰老组,Rg1治疗衰老组与衰老组相比,SA-β-gal染色阳性细胞百分比降低,G1期细胞比例下降,生成造血祖细胞混合集落数增加,p16INK4a mRNA及蛋白的表达下降;Rg1延缓衰老组的SA-β-gal染色阳性细胞百分比、G1期比例、p16INK4a mRNA及蛋白的表达均低于Rg1治疗衰老组,形成造血祖细胞混合集落数高于Rg1治疗衰老组。结论:Rg1具有延缓和治疗Sca-1+HSC衰老的作用,Rg1延缓衰老比治疗衰老效果更好。Rg1可能通过调控p16INK4a的表达发挥其对抗t-BHP诱导的Sca-1+HSC衰老的作用。
- 周玥杨斌姚欣王亚平
- 关键词：人参皂苷RG1P16INK4A
- 三丁基过氧化氢通过调控细胞周期诱导Sca-1^+造血干/祖细胞衰老被引量：1
- 2011年
- 目的探讨三丁基过氧化氢(t-BHP)诱导Sca-1+造血干/祖细胞(HSC/HPC)衰老的细胞周期调控机制。方法免疫磁性分选法分离纯化小鼠Sca-1+HSC/HPC后分为对照组(常规培养细胞),衰老模型组(用t-BHP复制细胞体外衰老模型)。通过衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色、细胞周期测定和造血祖细胞混合集落(CFU-Mix)培养观察t-BHP诱导Sca-1+HSC/HPC衰老的生物学作用;RT-PCR检测衰老相关基因p16INK4a、p19Arf、p53、p21Cip1/Waf1 mRNA的表达。Western blot检测细胞周期调控蛋白P16INK4a、P21Cip1/Waf1、CyclinD1、Cyclin E、CDK4、CDK2的表达。结果免疫磁性分选法分离纯化的Sca-1+HSC/HPC纯度可达(87.33±1.25)%。衰老组细胞SA-β-Gal染色阳性率为(57.9±4.2)%,高于对照组[(9.1±2.4)%,P<0.05],G0/G1期细胞比例为(87.53±4.03)%,高于对照组[(72.26±3.40)%,P<0.05],生成造血祖细胞混合集落(CFU-Mix)数为(1.5±1.2)/104,低于对照组[(9.8±2.1)/104,P<0.05]。与对照组比较,衰老组细胞p16INK4a、p19Arf、p53、p21Cip1/Waf1 mRNA及P16INK4a、P21Cip1/Waf1、CyclinD1蛋白表达上调(P<0.05),Cyclin E、CDK4、CDK2蛋白表达下调(P<0.05)。结论 t-BHP能有效诱导Sca-1+HSC/HPC衰老,其机制可能与调控细胞周期调控分子的表达有关。
- 周玥姜蓉王萍杨斌姚欣刘典锋王亚平
- 关键词：衰老
