杨恒
- 作品数：7 被引量：21H指数：3
- 供职机构：江苏大学基础医学与医学技术学院检验医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省高校自然科学研究项目江苏省卫生厅面上基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- TLR7/8激动剂及其在肿瘤免疫治疗中的研究进展被引量：3
- 2011年
- 0引言TLRs在固有免疫系统中是宿主对抗入侵病原体的第一道屏障。TLRs不但在免疫细胞上有表达,近年来发现,其在肿瘤细胞上也有不同组合的表达。肿瘤细胞上表达的TLRs对肿瘤的发展起着十分重要的作用。
- 杨恒许化溪王胜军
- 关键词：肿瘤免疫疗法
- T-bet对肺癌细胞系(Lewis细胞)致瘤作用的体内干预研究
- 2011年
- 目的:探讨T-bet质粒局部应用对小鼠肺癌细胞皮下移植瘤的干预作用。方法:将传代培养的Lewis肺癌细胞接种于小鼠右肩部皮下,制备荷瘤小鼠模型;瘤内分别注射PIRES-eGFP/mT-bet(m指小鼠)、PIRES-eGFP质粒和PBS,观察各组小鼠存活时间,肿瘤体积的变化;HE染色观察肿瘤组织的病理变化;Western blot检测肿瘤组织T-bet的表达,QRT-PCR检测肿瘤组织T-bet和IFN-γ的mRNA水平。结果:瘤内注射T-bet质粒载体后Western blot检测发现,肿瘤组织T-bet蛋白表达显著高于对照组;QRT-PCR结果显示,肿瘤组织T-bet和IFN-γ的mRNA水平呈上升趋势,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。T-bet质粒干预组小鼠肿瘤生长明显缓慢,存活期延长。HE染色组织病理观察可见mT-bet干预组小鼠局部组织淋巴细胞大量浸润。结论:T-bet基因局部注射可延缓小鼠肺癌Lewis皮下移植瘤的生长,提高机体的抗肿瘤免疫应答能力,增强对已发肿瘤的生长限制作用,为T-bet应用于肿瘤治疗积累试验数据。
- 赵银霞王楷文杨恒郑东苏兆亮仝佳王胜军许化溪
- 关键词：肺癌细胞系质粒小鼠
- 类风湿关节炎患者外周血高迁移率族蛋白1RORγ／t和白细胞介素-17表达水平的检测及临床意义被引量：3
- 2010年
- 目的检测类风湿关节炎（RA）患者外周血高迁移率族蛋白1（HMGB1）及Th17细胞特异性转录因子、相关细胞因子的表达水平，同时分析其与C反应蛋白（CRP）、红细胞沉降率（ESR）和类风湿因子（RF）的关系，初步探讨RA患者HMGB1的表达水平及其与Th17的关系。方法收集80例RA患者外周血标本，其中静止期32例、活动期48例，健康志愿者50名。采用实时荧光定量聚合酶链反应（QRT—PCR）检测外周血单个核细胞（PBMC）中HMGB1、RORγt和白细胞介素（IL）-17的mRNA水平；酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血浆HMGB1、IL-17、IL-23的蛋白浓度，采用单因素方差分析和Spearillan相关分析进行统计学处理。结果RA患者PBMC中HMGB1、RORγt和IL一17mRNA的表达水平均高于健康对照组（P〈0．05），且活动期[HMGB1（0．424±0．262）pg／ml，RORγt（0．34±0．25）pg／ml，IL-17（1．42±0．38）pg／ml]明显高于静止期（R0．01）。血浆HMGB1、IL-23和IL-17蛋白水平也显示类似的结果，RA组明显高于健康对照组（P〈0．05），且与CRP、ESR、RF呈正相关（P〈0．05）。结论检测RA患者外周血HMGB1和Th17细胞特异性转录因子及相关细胞因子水平，有助于探讨HMGB1和IL-17在RA发病过程中的病理生理作用，也为寻找RA的治疗靶点提供了新的思路。
- 石燕王胜军陈建国薛渊何志强周成林郑东杨恒李雅贞仝佳苏兆亮邵启祥许化溪
- 关键词：白细胞介素17
- 远红荧光蛋白HcRed基因的原核和真核表达及鉴定
- 2010年
- 目的:分别构建携带HcRed基因的PET28a(+)原核和PIRES真核载体,并分别在大肠埃希菌和鼠树突状细胞系(DC2.4)中表达、鉴定,为后续基因及蛋白的转染提供基础。方法:参照基因库中HcRed1基因序列,设计HcRedCDS全长引物,以含有HcRed的质粒为模板,通过PCR获得目的基因,并分别连接于PET28a(+)原核载体和PIRES真核载体。经PCR、酶切鉴定后,原核载体转化大肠埃希菌,经IPTG诱导表达;真核载体用脂质体转染DC2.4,G418筛选出克隆后,应用RT-PCR和流式细胞仪进行检测。结果:扩增出687 bp的HcRedCDS区序列,构建了原核和真核表达载体PET28a(+)/HcRed和PIRES/HcRed,分别于大肠埃希菌和DC2.4细胞系中成功表达。结论:成功构建HcRed基因的原核、真核表达载体,并分别在工程菌和细胞系中成功表达,为后续基因及融合蛋白的筛选、示踪和体内观测奠定了基础。
- 何志强薛渊石燕杨恒赵银霞王楷文周成林王胜军邵启祥焦志军许化溪
- 关键词：原核表达
- Ⅱ型胶原诱导的小鼠关节炎模型IL-25表达水平的变化及意义被引量：9
- 2010年
- 目的以Ⅱ型胶原诱导的DBA/1小鼠关节炎模型为研究对象,动态观察其IL-25的表达水平,探讨IL-25与关节炎发生发展的关系及其可能的机制,为寻找新的类风湿性关节炎免疫干预新途径积累实验数据。方法采用RT-PCR法扩增目的基因,构建mIL-25标准质粒,QRT-PCR检测模型鼠脾脏及其关节病变局部IL-25的表达水平;应用ELISA技术检测模型鼠血清和脾细胞培养上清IL-25蛋白的含量。结果在Ⅱ型胶原诱导的小鼠关节炎的发病过程中,模型鼠脾细胞和关节滑膜组织IL-25的mRNA表达水平、均呈持续上升趋势,与对照小鼠相比差异显著(P<0.05)。这种IL-25蛋白和转录水平的表达,随着关节炎症程度的增加而升高。此外,模型鼠脾细胞对ConA的刺激表现出强IL-25表达性应答。结论 IL-25的表达水平与Ⅱ型胶原诱导的关节炎的发生发展密切相关。
- 王楷文周成林王胜军赵银霞杨恒郑东薛渊Sandoghchian Siamak仝佳苏兆亮邵启祥许化溪
- 关键词：IL-25自身免疫性疾病
- 牙龈卟啉菌外膜蛋白RagB的基因克隆、原核表达及其多克隆抗体的制备被引量：3
- 2010年
- 目的:克隆牙龈卟啉菌外膜蛋白RagB基因、原核表达并制备牙龈卟啉菌外膜蛋白RagB多克隆抗体。方法:根据牙龈卟啉菌外膜蛋白RagB的DNA序列,设计特异性引物并经PCR扩增其基因。扩增产物经鉴定和测序分析后,与质粒pET-32a(+)重组形成pET-32a-ragB,继而转化大肠埃希菌。IPTG诱导重组蛋白的表达,再通过Ni-NTA亲和层析柱纯化后,用SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定;获得的重组蛋白行常规家兔免疫,以制备多克隆抗体,并应用ELISA测定抗体效价。结果:PCR扩增获得编码区全长为1506bp可编码501个氨基酸的RagB基因,测序结果与GenBank公布的序列(AJ130872)完全一致;构建了pET-32a-ragB原核表达载体,获得了高表达的融合蛋白,SDS-PAGE电泳和Western blot表明具有较高的纯度;ELISA结果显示,特异性兔抗RagB的多克隆抗体效价为1×105。结论:在成功构建牙龈卟啉菌外膜蛋白RagB原核表达载体的基础上,高效表达及纯化了RagB融合蛋白,并制备了高效价的多克隆抗体。为进一步开展牙龈卟啉菌疫苗研究、建立牙龈卟啉菌感染的实验室诊断方法奠定了基础。
- 郑东孔凡芝王胜军苏兆亮仝佳杨恒赵银霞王楷文许化溪
- 关键词：牙龈卟啉菌原核表达多克隆抗体
- Toll样受体8在人宫颈癌细胞株HeLa中的表达及其激动剂对HeLa细胞增殖和凋亡的影响被引量：3
- 2011年
- 目的观察Toll样受体8（TLR8）在人宫颈癌细胞株HeLa中的表达，探讨TLR8激动剂CL075对HeLa细胞增殖和凋亡的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）法，检测13种肿瘤细胞系中TLR8mRNA和经CL075作用后HeLa细胞中环氧化酶2（COX-2）、Bcl-2和血管内皮生长因子（VEGF）mRNA的表达水平；采用免疫荧光技术对HeLa细胞中TLR8蛋白的表达进行定位观察；采用流式细胞术检测不同浓度CL075作用下HeLa细胞的细胞周期和凋亡的变化；采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测HeLa细胞的增殖状态。结果与其他肿瘤细胞株相比，HeLa细胞中TLR8mRNA的表达水平最高，达703．7±20．6。TLR8蛋白主要定位于HeLa细胞的胞浆中。0．1、0．5和1．0μg／ml的CL075分别作用于HeLa细胞48h后，G2／M＋s期细胞所占的比例逐渐增高，其中1．0μg／mlCL075作用组G2／M＋S期细胞所占的比例最高，达（57．67±1．73）％，明显高于空白对照组[（39．02±2．33）％，P〈0．01]。经不同浓度的CL075处理后，HeLa细胞的凋亡水平与空白对照组相比，无明显改变（P〉0．05）；但经顺铂处理后，凋亡细胞明显增多（P〈0．01）。MTT法检测结果显示，与空白对照组比较，CL075作用于HeLa细胞48和72h后，HeLa细胞的增殖能力明显增强（P〈0．01）。CIA）75作用于宫颈癌HeLa细胞24和48h后，COX-2、Bcl-2和VEGF mRNA的表达水平明显升高（P〈0．05）。结论宫颈癌HeLa细胞中TLR8的表达水平及其与配体相互作用的信号，可能是肿瘤发生和发展的重要因素之一。TLR8可能是宫颈癌治疗的一个潜在靶点。
- 杨恒何志强赵银霞王楷文郑东苏兆亮仝佳马洁王胜军许化溪
- 关键词：宫颈肿瘤HELA细胞细胞增殖细胞凋亡
