杜艳芬
- 作品数：24 被引量：44H指数：4
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家重点基础研究发展计划国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 利用Red重组系统敲除大肠杆菌菌株ClpP基因方法的研究被引量：1
- 2011年
- 为了研究ClpP基因的功能,试验利用Red系统的重组功能,通过PCR扩增出两端与大肠杆菌菌株ClpP基因上、下游序列同源,中间为氯霉素抗性基因cat的DNA片段,电击转化含质粒pKD46的大肠杆菌菌株DH091,筛选替换ClpP基因的阳性转化子,再导入质粒pCP20去除氯霉素抗性基因。结果表明:成功敲除大肠杆菌菌株ClpP基因。
- 司微刘慧芳王春来彭玮赫明雷杜艳芬赵海玲王聃杨金国林靖凯倪洪波刘思国
- 关键词：RED重组系统基因敲除
- 利用体内诱导抗原技术检测胸膜肺炎放线杆菌体内表达基因
- 本研究利用体内诱导抗原技术(IVIAT)对胸膜肺炎放线杆菌(APP)体内表达的基因进行了研究。.将收集到的5份感染了APP1的猪血清混合,分别吸附体外培养的APP1和大肠杆菌DE3的全菌及全菌
- 刘慧芳刘思国王春来司微王聃杜艳芬赫明雷常月红
- 文献传递
- 牛分枝杆菌Spoligotyping和VNTR-MIRU的基因分型研究
- 为了探讨间隔区寡核苷酸分型(Spacer oligo-typing,Spiligotyping)和数目可变串联重复序列-结核分枝杆菌散在分布重复单元(Variable number tan-dem repeats-myc...
- 杜艳芬林靖凯刘思国王春来刘慧芳司微王聃赵海玲
- 文献传递
- 大肠杆菌“菌影”的制备被引量：4
- 2009年
- 通过PCR扩增噬菌体PhiX174的裂解基因E,将该基因连接到含有PR/cI启动阻遏系统的pBV220载体中,从而使裂解基因E和启动阻遏系统λPL/PR-cI857串联成为温度敏感的裂解盒,构建溶菌质粒pBV-E。采用CaCl2法将其转入大肠杆菌BL21(DE3),含有裂解质粒的大肠杆菌在28℃条件下生长到对数生长期,然后升温到42℃诱导其溶解,制成了大肠杆菌菌影。电镜观察发现菌影形态完整,内容物全部被释放到胞外。
- 彭玮王聃刘思国常月红王春来刘慧芳司薇赫明雷杜艳芬
- 关键词：大肠杆菌
- 牛分枝杆菌细胞壁相关蛋白表达及免疫原性分析
- 牛结核病是由牛分枝杆菌引起的严重危害奶牛业的人畜共患病,可以通过吸入含菌气溶胶或食用受污染的乳制品而从牛传染到人,对人类的健康也造成了威胁.传统的BCG苗保护力低,因此研究更加特异准确的结核病新型诊断方法并加快新型疫苗的...
- 亓英芳杜艳芬刘慧芳赫明雷司微倪洪波王春来刘思国
- 关键词：牛分枝杆菌OMPAWESTERN-BLOT免疫原性
- 文献传递
- 哈尔滨市鲜肉中单核细胞增生性李斯特菌的分离鉴定及耐药性分析被引量：4
- 2009年
- 为了解哈尔滨市单核细胞增生性李斯特菌(Lm)的污染状况及耐药状况。在哈尔滨市市场随机采集158份鲜肉样品,采用显色培养基分离,API试剂条和PCR鉴定等方法对样品中的Lm进行分离鉴定,并通过Kirby-Barer法测定分离菌株对24种抗生素的耐药性。结果从鲜肉中共分离到Lm23株,检出率为14.56%,其中鲜猪肉检出率最高,达20.00%(14/70);23株分离菌株中耐药菌株为22株,耐药率高达95.65%。这表明哈尔滨市鲜肉中存在一定程度的Lm污染,并且分离菌株存在较严重的耐药现象。应加强控制动物饲料亚治疗抗生素的使用并严格遵守休药期,防止耐药菌株产生进而控制食源性疾病的发生。
- 尹录杜艳芬赫明雷司微刘慧芳王春来彭玮王聃李继昌邵美丽刘思国
- 关键词：鲜肉单核细胞增生性李斯特菌耐药性
- 以胎儿弯杆菌重组表面蛋白(SapA)为抗原的间接ELISA方法及初步应用
- 胎儿弯杆菌对于人和动物是危害较大的病原微生物,开展胎儿弯杆菌研究具有重要的公共卫生学意义。本研究应用PCR方法扩增出胎儿弯杆菌表面蛋白基因(SapA)的2个基因片段SapA-N(1398bp)和SapA-C(1422bp...
- 赵海玲刘思国杜艳芬刘慧芳王春来王勇司微杨金国林靖凯
- 文献传递
- 胎儿弯杆菌病TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：3
- 2009年
- 为建立胎儿弯杆菌(C.fetus)定量检测方法,本研究根据C.fetus毒力因子表面蛋白(SapA)的基因序列设计引物和一条特异的TaqMan水解探针,建立了一种敏感、特异、重复性好的快速检测C.fetus的TaqMan荧光定量PCR方法。对该方法的特异性与敏感性研究,结果显示,该方法检测C.fetus结果均为阳性,而非C.fetus均为阴性;对带有SapA基因的阳性质粒的检测敏感性为108拷贝～102拷贝/μL范围内具有良好的线性关系,可敏感地检测到模板中13个拷贝的细菌DNA,其灵敏度是常规PCR方法的100倍。该方法具有简便、快速、特异性强、敏感性高等特点。该方法为C.fetus快速检测试剂盒的研制打下了良好的基础。
- 赵海玲刘慧芳杜艳芬司微王春来刘思国
- 关键词：实时荧光PCR
- 牛分枝杆菌外膜蛋白基因ompA的原核表达及免疫活性分析被引量：1
- 2009年
- 为验证牛分枝杆菌外膜蛋白A是否具有免疫活性,以牛分枝杆菌ValleeⅢ株基因组DNA为模板扩增牛分枝杆菌外膜蛋白基因ompA,采用DNA重组技术将此基因片段连于表达载体pGEX6p-1,构建重组质粒pGEX6p-1-ompA,并将其转化到大肠杆菌中BL21(DE3)中,IPTG诱导(终浓度为0.1mmol/L),表达产物进行SDS-PAGE分析。用glutathione sepharose4B纯化蛋白和Western blot分析该蛋白的免疫学活性。结果表明:pGEX6p-1-ompA以可溶形式表达,蛋白分子量大小为60kDa,与预计大小相符,纯化的蛋白具有良好的免疫学活性。
- 亓英芳黄瑛杜艳芬刘慧芳赫明雷司微倪洪波王春来刘思国
- 关键词：牛分枝杆菌原核表达纯化WESTERNBLOT
- 牛分枝杆菌Spoligotyping和VNTR-MIRU的基因分型研究被引量：1
- 2009年
- 为了探讨间隔区寡核苷酸分型(Spoligotyping)和数目可变串联重复序列-结核分枝杆菌散在分布重复单元(VNTR-MIRU)基因分型法用于国内牛分枝杆菌的基因分型研究,初步了解我国牛分枝杆菌基因型种类、分布以及2种方法在我国应用的可行性。本研究收集东北、西北、华北、华南4个地区分离的10株牛分枝杆菌分离株,分别采用Spoligotyping和VNTR-MIRU对这些分离株进行基因分型,比较两种方法的分型效果,评价其在牛分枝杆菌基因分型中的应用。结果表明,使用Spoligotyping方法,10株牛分枝杆菌呈现出4种基因型,使用VNTR-MIRU方法,10株分离株也呈现4种基因型;当两种方法联合使用时,可以分为5种基因型,其中的2个菌株具有独特的基因型,显示来自不同地区的牛分枝杆菌存在主要的流行型为BCG家族。将Spoligotyping和VNTR-MIRU联合使用,可有效提高牛结核病的分子流行病学调查和病原学的监测效果。
- 杜艳芬林靖凯刘思国王春来刘慧芳司微王聃赵海玲
- 关键词：牛分枝杆菌SPOLIGOTYPINGVNTR基因分型
