杜然然
- 作品数：8 被引量：21H指数：3
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- 清开灵眼用凝胶对大鼠实验性自身免疫性葡萄膜炎的治疗作用及其机制被引量：3
- 2014年
- 背景葡萄膜炎是常见的致盲眼病，多反复发作，目前主要的治疗方法是应用糖皮质激素和免疫抑制剂，但不良反应较多，寻求安全、有效的治疗方法至关重要。目的观察清开灵眼用凝胶对大鼠实验性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）的疗效，并探讨其作用机制。方法SPF级雌性Lewis大鼠27只，皮下注射200斗l含100μg光感受器间维生素A类结合蛋白（IRBP）1177—1191多肽、100μl完全弗氏佐剂（CFA）、100μg结核菌素及100μlPBS的乳化液，在大鼠两足垫处、尾根部两侧及脊背正中均匀注射5个点建立EAU动物模型。将免疫后的大鼠按随机数字表法随机分为模型对照组、清开灵眼用凝胶组和妥布霉素地塞米松组。大鼠免疫后第7天开始点眼，模型对照组用生理盐水点眼，清开灵眼用凝胶组和妥布霉素地塞米松组分别用相应的药物点眼，每日3次，连续用药7d。从免疫后第1天开始裂隙灯显微镜下观察大鼠眼前节炎症反应并进行炎症评分；免疫后第14天过量麻醉法处死实验动物并获取眼球标本，采用组织病理学方法观察大鼠前房、虹膜和睫状体的炎性细胞浸润情况；采用流式细胞仪测定大鼠脾脏、淋巴结分离的T细胞悬液中CD4^＋和CD8^＋细胞百分比、CD4^＋／CD8^＋值以及Th1细胞和Th17细胞的比例。结果模型对照组大鼠免疫后第9天开始出现眼部炎症表现，第11天炎症反应达高峰期，而清开灵眼用凝胶组和妥布霉素地塞米松组大鼠眼部炎症反应的发生较模型对照组晚，炎症反应轻，病程短。免疫后13d，3个组大鼠眼部炎症评分的总体差异有统计学意义（F=26．52，P=0．00）。清开灵眼用凝胶组和妥布霉素地塞米松组的炎症评分明显低于模型对照组，差异均有统计学意义（t=6．72、10．11，P〈0．05）。组织病理学检查发现，模型对照组大鼠前房、虹膜及睫状体组织中可见炎性细�
- 田庆梅毕宏生崔彦解孝锋宋继科郭大东赵圣亚杜然然
- 关键词：抗炎剂TH1细胞TH17细胞
- 紫外线照射对大鼠晶状体上皮细胞Ca2+-ATP酶表达及活性影响的实验研究
- 王道光郭大东毕宏生杜然然吴秋欣刘冬梅
- 复方樟柳碱治疗眼肌麻痹疗效的系统评价
- 杜然然
- 文献传递
- 枸杞多糖对体外培养视网膜神经节细胞的保护作用被引量：11
- 2014年
- 目的评价枸杞多糖对视网膜神经节细胞凋亡的保护作用。方法体外培养大鼠视网膜神经节细胞株RGC-5,采用谷氨酸作为细胞凋亡诱导剂建立RGC-5凋亡模型,终浓度为5 mmol·L-1的谷氨酸作用24 h可造成约50%的RGC-5凋亡,用此方法作为RGC-5凋亡模型。并用不同浓度(10 mg·L-1、20 mg·L-1、40 mg·L-1)枸杞多糖加入培养基干预24 h及48 h,使用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法和AnnexinV-FITC法检测细胞存活率及凋亡率。结果 MTT法检测结果显示:枸杞多糖作用24 h后,对照组存活率为48.7%,枸杞多糖组(10 mg·L-1、20 mg·L-1、40 mg·L-1)细胞存活率分别为53.1%、59.6%、66.9%,对照组与各浓度枸杞多糖组差异均有统计学意义(均为P<0.05);40 mg·L-1枸杞多糖组与20 mg·L-1枸杞多糖组之间差异有统计学意义(P<0.05)。枸杞多糖作用48 h,各浓度枸杞多糖组细胞存活率分别为60.5%、75.2%、88.6%,各浓度枸杞多糖组的RGC-5存活率明显高于对照组(均为P<0.05),且40 mg·L-1枸杞多糖组RGC-5存活率最高,与20 mg·L-1枸杞多糖组之间差异有统计学意义(P<0.05)。AnnexinV-FITC法检测结果显示:枸杞多糖作用24 h,对照组凋亡细胞(早期凋亡和晚期凋亡)所占比例为44%,枸杞多糖组(10 mg·L-1、20 mg·L-1、40 mg·L-1)凋亡细胞比例分别为20.6%、12.3%、8.5%,对照组与各浓度枸杞多糖组差异均有统计学意义(均为P<0.05);枸杞多糖作用48 h时,枸杞多糖组(10 mg·L-1、20 mg·L-1、40 mg·L-1)凋亡细胞比例分别为11.6%、6.2%、3.7%;24 h及48 h时,40 mg·L-1枸杞多糖组与20 mg·L-1枸杞多糖组之间凋亡细胞所占比例差异有统计学意义(P<0.05)。结论枸杞多糖对RGC-5具有一定的保护作用,并表现出一定程度的剂量-时间依赖性。
- 杜然然毕宏生郭俊国王兴荣郭大东田庆梅
- 关键词：枸杞多糖视网膜神经节细胞细胞凋亡
- 透镜诱导性近视豚鼠生物参数及巩膜胶原含量的改变
- 2014年
- 目的探讨生物参数和巩膜胶原在透镜诱导性近视（LIM）发生发展过程中的变化及其机制。方法实验研究。选取3周龄英国种雄性三色短毛豚鼠36只，随机分为透镜诱导组（24只）和空白组（12只）。透镜诱导组右眼戴-10D透镜诱导4周后进行检影验光和眼轴测量，并检测后极部和前部／赤道部巩膜干重、厚度。盐酸水解后检测2组相同面积后极部巩膜水解液中羟脯氨酸及氨基酸总量的改变。数据采用t检验分析。结果透镜诱导4周后豚鼠模型眼与对侧眼相比发生轴性近视（t=-14.90，P〈0.01），并伴有眼轴的明显延长（t=14．76，P〈0．01），差异有统计学意义，后极部巩膜干重和巩膜厚度较空白组均有明显降低（t=3．98、6.67，P〈0．01），同时后极部氨基酸总量呈下调趋势（t=3．29，P〈0．01）。结论透镜诱导可以引起豚鼠玻璃体腔的延长、后极部巩膜干重减轻、厚度变薄、胶原合成减少等一系列改变，减弱了巩膜的抵抗力，使眼轴易于延展而发生近视。
- 赵雯徐超立毕宏生沙芳张小燕杜然然吴建峰毕爱玲
- 关键词：近视巩膜胶原羟脯氨酸动物
- 紫杉醇对人Tenon囊成纤维细胞增生的抑制作用及机制被引量：2
- 2014年
- 背景人Tenon囊成纤维细胞（HTFs）的异常增生是导致抗青光眼滤过手术失败的主要原因。寻找抑制HTFs增生的药物对抑制青光眼术后功能性滤过泡的瘢痕化有重要意义。目的观察紫杉醇对体外培养的HTFs增生、凋亡、细胞周期以及基质金属蛋白酶-1（MMP-1）表达的影响。方法收集抗青光眼滤过术中切除的人眼Tenon囊组织，用组织块培养法培养HTFs并进行传代，取3～6代细胞用于实验。采用小鼠抗人角蛋白抗体、小鼠抗人波形蛋白抗体、小鼠抗人结蛋白抗体、小鼠抗人S-100抗体行免疫组织化学染色鉴定培养的HTFs。在培养基中分别加入0、1×10^-8、1×10^-8、1×10^-6mol／L紫杉醇，采用实时细胞电子分析系统（RT—CES）观察不同浓度紫杉醇作用后HTFs的细胞指数变化；采用DAPI染色法观察各组细胞的凋亡情况；用流式细胞术检测不同浓度紫杉醇作用后HTFs各细胞周期比例；采用实时定量PCR（real—timePCR）和ELISA法检测各组HTFs中MMP-1mRNA和蛋白的表达量，分别以MMP-1mRNA／GAPDHmRNA和MMP-1蛋白质量浓度（μg／L）表示。结果组织块原代培养7d内可见细胞游出，呈长梭形和不规则三角形，培养的细胞抗波形蛋白抗体染色阳性，而抗角蛋白抗体、抗结蛋白抗体和抗S-100抗体染色阴性。培养基中加入紫杉醇作用24h后，1×10^-8、1×10^-7、1×10^-6mol／L紫杉醇组平均细胞指数值分别为1．09±0．191、0．665±0．093和0．473±0．117，均明显低于0mol／L紫杉醇组的1．514±0．283，差异均有统计学意义（均P=0．000）；紫杉醇作用后，HTFs的细胞核内可见呈DAPI蓝色荧光的颗粒状物质，荧光强度随着紫杉醇浓度的增加而增强。l×10^-8、1×10^-7、1×10^-6mol／L紫杉醇分别作用12h后，G，／M期HTFs的比例分别为（9．20±0．80）％、（12．37±0．45）％和（13．80±0．35）％，明显高于0mol／L紫杉醇组的（7．17±0．5
- 陈宁虹毕宏生郭大东郭媛媛杜然然马晓华
- 关键词：紫杉醇TENON囊细胞学成纤维细胞细胞学
- 紫外线照射对大鼠晶状体上皮细胞Ca2＋-ATP酶表达及活性影响的实验研究被引量：2
- 2013年
- 目的研究紫外线对大鼠晶状体上皮细胞(lens epithelial cell,LEC)Ca2+-ATP酶表达及活性的影响。方法 6周龄的Wistar大鼠随机分为对照组和实验组,对照组大鼠未照射紫外线,实验组分别给予紫外线照射1 d、3 d和7 d,照射完毕后摘除双眼眼球,取出晶状体。利用实时荧光定量PCR检测紫外线对LEC Ca2+-ATP酶在mRNA水平表达的影响,Western blot检测紫外线对LEC Ca2+-ATP酶在蛋白水平表达的影响,化学比色法检测LEC内超微量Ca2+-ATP酶活性的变化,HE染色观察LEC的形态学改变,免疫组织化学SP法检测LEC中Ca2+-ATP酶的表达情况。结果紫外线照射1 d、3 d、7 d后,大鼠LEC中Ca2+-ATP酶mRNA、蛋白和活性表达水平逐渐下降,其中ATP2A2和ATP2C2的mRNA表达水平分别是对照组的(0.60±0.10)倍、(0.20±0.05)倍、(0.05±0.01)倍和(0.40±0.10)倍、(0.10±0.05)倍、(0.02±0.01)倍;Ca2+-ATP酶蛋白相对灰度值分别是对照组的(0.66±0.01)倍、(0.46±0.02)倍和(0.15±0.01)倍;Ca2+-ATP酶活性表达水平分别是对照组的0.87倍、0.61倍及0.22倍。以上各实验组与对照组相比,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。实验组LEC细胞形态学亦发生明显变化,免疫组织化学检测大鼠LEC Ca2+-ATP酶表达逐渐下降,平均光密度值与对照组比较差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论紫外线照射可降低大鼠LEC Ca2+-ATP酶的表达,且呈时间和剂量依赖性,提示Ca2+-ATP酶对紫外线诱导的LEC凋亡、维持晶状体透明以及在白内障的发生发展中具有重要意义。
- 王道光郭大东毕宏生杜然然吴秋欣刘冬梅
- 关键词：紫外线晶状体上皮细胞CA2+-ATP酶
- 参麦合剂对兔干眼症模型泪液分泌及眼表结构的影响被引量：3
- 2013年
- 目的:探索参麦合剂对兔干眼症模型泪液分泌及眼表结构的影响。方法:将30只健康新西兰大白兔随机分为空白对照组、实验对照组、药物治疗组。制作干眼动物模型后,各组给予相应治疗。治疗前和治疗后第7、14、21、28 d分别测定Schirmer试验值,BUT值、眼表荧光素染色(FL)、结膜印记细胞学检查(CIC),观察眼表泪膜状态和细胞学变化。治疗28 d后,每组随机选取5只动物,处死后剪下角结膜组织,行角结膜石蜡切片光镜观察。结果:药物治疗组用药14 d后,Schirmer值及BUT值均较其他两组明显增加(P<0.01);结膜细胞印迹学检查发现药物治疗组结膜杯状细胞数量较其他两组明显增多;光镜检查发现药物治疗组与其他两组相比,部分结膜上皮层数增多、杯状细胞增多。结论:参麦合剂能明显增加兔干眼症模型泪液分泌、改善泪膜稳定性和眼表细胞结构。
- 丛晨阳温莹毕宏生解孝锋郭大东杜然然
- 关键词：干眼症
