李祥
- 作品数：19 被引量：33H指数：4
- 供职机构：中国人民解放军总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市科技新星计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 骨髓间充质干细胞条件培养基对INS-1细胞凋亡的影响
- 2015年
- 目的探讨骨髓间充质干细胞条件培养基(BMSC-CM)对促炎因子诱导大鼠胰岛素瘤细胞(INS-1)凋亡的影响及其作用机制。方法培养大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)至第3代,收集、浓缩其上清液,获得富含BMSCs分泌因子的条件培养基。用含促炎因子TNF-α、IL-1β、IFN-γ的培养基处理INS-1细胞48h,造成炎症损伤β细胞模型,加入不同浓度的BMSC-CM继续培养12h,所获细胞分为以下5组:正常对照组,促炎因子组,1×BMSC-CM组,2×BMSC-CM组,4×BMSC-CM组。采用CCK-8法检测INS-1细胞存活率,膜连蛋白V/碘化丙啶(Annexin V/PI)检测细胞凋亡率,二氯荧光素双醋酸盐(DCFH-DA)检测细胞内活性氧(ROS)的生成量。结果与正常对照组相比,促炎因子组INS-1细胞存活率下降至正常对照组的75.84%±1.53%,细胞凋亡率增加(17.23%±1.77%),细胞内ROS水平明显升高(34.3%±0.80%),差异均具有统计学意义(P<0.01)。而BMSC-CM有效对抗了促炎因子导致的INS-1细胞损伤,其作用呈剂量依赖性,4×BMSC-CM组效果最佳,该组INS-1细胞存活率较促炎因子组升高了11.86%,达到87.7%±2.08%,细胞凋亡率下降至8.67%±1.59%,ROS生成量减少至17.1%±2.14%,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 BMSC-CM可抑制促炎因子诱导的INS-1细胞凋亡,其作用机制可能与BMSC-CM降低细胞内ROS水平有关。
- 赵坤郝好杰臧丽杨国庆李祥韩为东母义明
- 关键词：间质干细胞细胞凋亡炎症INS-1细胞
- 西达本胺联合PD-1抑制剂对结直肠癌小鼠CD8+T细胞抗肿瘤功能的影响被引量：1
- 2024年
- 目的探讨组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂西达本胺联合程序性死亡受体-1(PD-1)抑制剂对结直肠癌小鼠模型(MC38-OVA)中CD8^(+)T细胞抗肿瘤功能的影响。方法动物实验:采用背部皮下注射法构建MC38-OVA结直肠癌小鼠模型。将MC38-OVA荷瘤小鼠随机分为对照组、西达本胺组、anti-PD-1组、西达本胺^(+)anti-PD-1组,每组20只。观察荷瘤小鼠肿瘤生长情况及存活率;采用流式细胞仪检测小鼠肿瘤微环境中CD8^(+)T细胞、CD8^(+)IFN-γ^(+)T细胞、OVA抗原特异性CD8^(+)T细胞的数量及比例,以及肿瘤组织内调节性T细胞(Treg)、髓系衍生抑制细胞(MDSC)、肿瘤相关巨噬细胞(TAM)的表达变化。细胞实验:采用流式细胞仪检测0、10、25、50、100、200 nmol/L西达本胺处理的CD8^(+)T细胞及MC38-OVA肿瘤细胞的凋亡情况。采用流式细胞计数法及Ki-67抗体标记法检测0、100 nmol/L西达本胺处理的CD8^(+)T细胞及MC38-OVA肿瘤细胞的增殖情况。取CD8^(+)T细胞,设置对照组、西达本胺组、anti-PD-1组与西达本胺^(+)anti-PD-1组,与MC38-OVA肿瘤细胞按预设效靶比共培养,采用流式细胞仪检测CD8^(+)T细胞的杀伤能力。经0、100 nmol/L西达本胺处理的CD8^(+)T细胞与相同数量的MC38-OVA肿瘤细胞共培养,采用流式细胞仪检测CD107a的表达情况。结果荷瘤小鼠肿瘤生长及生存分析结果显示,与对照组比较,西达本胺^(+)anti-PD-1组荷瘤小鼠肿瘤生长明显受抑(P<0.05),生存率明显增高(P<0.01)。西达本胺组、anti-PD-1组、西达本胺^(+)anti-PD-1组肿瘤浸润CD8^(+)T细胞比例及数量明显高于对照组(P<0.05)。西达本胺^(+)anti-PD-1组CD8^(+)IFN-γ^(+)T细胞、OVA抗原特异性CD8^(+)T细胞比例及数量明显高于对照组、西达本胺组、anti-PD-1组(P<0.05)。体外实验显示,西达本胺可增强CD8^(+)T细胞的杀伤能力及CD107a的表达(P<0.05)。结论西达本胺联合PD-1抑制剂可明显增强瘤内浸润CD8^(+)T细胞的数量及�
- 董亮董亮李祥贾慧婕高志涛
- 关键词：程序性死亡受体-1西达本胺
- LRP16短发夹RNA慢病毒载体的构建及LRP16稳定抑制细胞的建立
- 2014年
- 目的:构建靶向LRP16基因的短发夹RNA(shRNA)慢病毒表达载体,鉴定其在HeLa细胞中对LRP16的抑制效果。方法:构建pWPT-U6-LRP16shRNA-CMV-GFP慢病毒载体,通过病毒感染、细胞筛选、Western印迹等步骤,获得LRP16基因稳定抑制的细胞株。结果:构建了具有LRP16干扰效果的慢病毒载体,感染HeLa细胞后获得了稳定沉默LRP16及对照的细胞株;经克隆筛选,在荧光显微镜下观察到近似100%感染细胞发出绿色荧光;Western印迹证实pWPT-U6-L374-CMV-GFP和pWPT-U6-L668-CMV-GFP均可显著抑制HeLa细胞株中LRP16蛋白的表达,其中pWPT-Gsi-L374-GFP的抑制效果更好。结论:构建了靶向人LRP16基因shRNA慢病毒载体及LRP16稳定抑制的HeLa细胞系。
- 王春萌柏苗苗伍志强李小雷李祥梅倩韩庆旺韩为东
- 关键词：LRP16HELA细胞慢病毒载体
- 探讨PD-1抑制剂在不同小鼠肿瘤模型中的应答差异被引量：3
- 2019年
- 目的探讨不同肿瘤小鼠荷瘤模型对PD-1(programmed death-1)抑制剂应答的差异。方法构建免疫健全小鼠荷瘤模型(B16黑色素瘤、CT26结肠癌、MC38结肠癌荷瘤模型),B16黑色素瘤与CT26结肠癌肿瘤模型设置以下两组:PBS对照组,PD-1抑制剂治疗组;MC38结肠癌肿瘤模型设置以下四组:PBS对照组,PD-1抑制剂治疗组,PD-1抑制剂治疗高剂量组以及PD-1抑制剂延迟治疗组;记录各组小鼠肿瘤大小,绘制肿瘤生长曲线与小鼠生存曲线。采用小鼠CD8磁珠分选肿瘤浸润CD8+T淋巴细胞分析其绝对数量差异,流式细胞术分析各组小鼠肿瘤T细胞亚群的比例差异,探究PD-1抑制剂抗瘤活性相关免疫细胞类型及其变化。结果CT26结肠癌小鼠荷瘤模型对PD-1抑制剂相对抵抗;B16黑色素瘤小鼠荷瘤模型对PD-1抑制剂应答不敏感;MC38结肠癌小鼠荷瘤模型对PD-1抑制剂的应答相对敏感并存在个体差异性,且与PD-1抑制剂治疗时间与剂量相关;PD-1抑制剂治疗后肿瘤浸润CD8^+T淋巴细胞绝对数量增加(P均<0.05),CD8^+Ki67^+、CD8^+IFN-γ^+、CD8^+Ki67^+IFN-γ^+T淋巴细胞比例均上升(P均<0.05)。结论MC38结肠癌小鼠荷瘤模型为研究PD-1抑制剂抗瘤效应的适宜模型;PD-1抑制剂能够促进肿瘤浸润CD8^+T细胞的增殖与功能,增强抗肿瘤免疫反应。
- 白杰高志涛石龙底静李嵩李祥李祥聂晶
- 关键词：免疫治疗
- miR-455慢病毒表达载体的构建与鉴定被引量：3
- 2013年
- 目的:构建人源microRNA-455(miR-455)慢病毒载体,并鉴定成熟has-miR-455在细胞内的表达水平。方法:提取SiHa细胞中的人基因组DNA,设计并合成人miR-455的上下游引物,PCR扩增目的基因,将其中表达miR-455的结构经酶切后插入慢病毒转移质粒pWPT-GFP,构建成pWPT-GFP-pri-miR-455,在293T细胞中与pMD2G、pSPAX2包装产生慢病毒,并用含慢病毒的上清感染SiHa细胞。结果:测序结果证明插入质粒载体中的miR-455前体序列完全正确,慢病毒载体构建成功并获得相应的慢病毒;重组慢病毒质粒pWPT-GFP-pri-miR-455感染SiHa细胞后上调miR-455的表达近40倍。结论:构建了miR-455的慢病毒载体,并能在293T细胞中表达,产生的慢病毒能成功感染SiHa细胞。为进一步研究miR-455的功能,以及利用慢病毒进行基因治疗奠定了基础。
- 张康梅倩李祥赵亚力韩为东孟元光
- 关键词：慢病毒表达载体SIHA细胞
- 一种增强CIK细胞活性的方法与CIK细胞及其制备方法和应用
- 本发明涉及细胞工程领域，公开了一种增强CIK细胞活性的方法，包括将CIK细胞在DNA去甲基化药物的存在下进行培养。本发明还公开了一种CIK细胞及其制备方法，该方法包括将外周血单个核细胞在细胞因子的存在下培养9‑11天，再...
- 聂晶韩为东吕海燕刘传杰李祥陈美霞张燕
- 文献传递
- 食管癌预后标志物及其应用
- 本发明属于基因工程及肿瘤学领域，涉及食管癌预后标志物及其应用，具体涉及一种与食管癌染色体9q32区域杂合性缺失相关的miRNA标志物及其应用，该引物为食管癌染色体9q32区域杂合性缺失相关的miRNA标志物的引物。
- 梅倩韩为东李祥孟元光施路郭明洲张康
- 文献传递
- 低剂量地西他滨增强T细胞对宫颈癌细胞杀伤活性研究被引量：2
- 2015年
- 目的研究低剂量地西他滨是否可增强T细胞对宫颈癌细胞杀伤活性,并探讨其可能的作用机制。方法 CCK-8检测低剂量地西他滨对宫颈癌细胞增殖的影响,流式细胞仪检测低剂量地西他滨处理后宫颈癌细胞凋亡及周期的变化;CCK-8检测T细胞对低剂量地西他滨处理后宫颈癌细胞的杀伤作用,实时定量PCR法检测地西他滨处理后宫颈癌细胞癌/睾丸抗原(cancer testis antigen,CTA)及Fas L的m RNA表达的变化。结果 10 nmol/L地西他滨对宫颈癌细胞增殖、凋亡没有显著影响,100 nmol/L地西他滨一定程度上抑制细胞增殖。10 nmol/L地西他滨虽不直接抑制细胞增长,但使宫颈癌细胞对T细胞的杀伤效应更为敏感,以效靶比为10∶1时最显著。10 nmol/L地西他滨处理后宫颈癌细胞BORIS、NY-ESO-1、MAGE-A1/A3/A4等CTA及Fas L的m RNA水平显著上调(P<0.05)。结论低剂量地西他滨可抑制Hela及Si Ha细胞的生长及存活,增强T细胞对Hela及Si Ha细胞的杀伤能力,是一个潜在的免疫治疗辅助药物。
- 白桦李祥聂晶韩卫东孟元光
- 关键词：地西他滨宫颈癌免疫治疗
- LRP16转基因小鼠的繁殖与鉴定
- 2014年
- 目的繁殖和鉴定携带有外源LRP16基因的转基因小鼠,为体内研究LRP16的生物学功能提供动物模型。方法首先将构建好的LRP16转基因重组质粒转染到293T细胞,鉴定该质粒是否可以有效表达目的蛋白,随后利用原核显微注射方法将线性化的重组质粒注射入品系为FVB的小鼠受精卵中,获得F0代小鼠。应用PCR方法对F0代小鼠进行鉴定,并将阳性F0代小鼠继续繁殖。结果 LRP16转基因重组质粒在293T细胞中可以有效表达,经PCR鉴定获得3只阳性F0代小鼠,阳性率为6.23%,选取其中1只整合有LRP16基因的F0代雄鼠,通过其与野生型FVB小鼠杂交获得7只F1代子鼠,其中4只为阳性鼠,阳性率为57.14%。从F1代中再次选取其中1只阳性雄鼠与野生型小鼠杂交繁殖获得5只F2代子鼠,PCR鉴定结果显示2只为阳性,阳性率为40%。结论 LRP16基因成功整合到小鼠基因组中,并且能够稳定遗传,为后续在动物整体水平研究LRP16的功能奠定了基础。
- 王春萌柏苗苗伍志强李小雷李祥梅倩韩为东
- 关键词：LRP16基因转基因小鼠繁殖基因鉴定
- Gateway技术构建转基因重组质粒pRP.EX3d-EF1A-LRP16-His-IRES-eGFP
- 2014年
- 目的构建转基因重组质粒pRP.EX3d-EF1A-LRP16-His-IRES-eGFP,为转基因鼠的建立奠定基础。方法利用重叠PCR技术扩增attB1-LRP16-His-attB2,经BP反应,将LRP16基因插入到载体pDown上,pUp-EF1A、pDown-LRP16-His、pTail-IRES-eGFP和PRP.Des3d经LR反应,将LRP16转移到pRP.EX3d上,转化Stbl3细胞,用氨苄西林进行抗性筛选,经PCR鉴定后将阳性克隆送测序。结果测序及酶切结果验证获得正确的pRP.EX3d-EF1A-LRP16-His-IRES-eGFP重组质粒。结论成功构建pRP.EX3d-EF1A-LRP16-His-IRES-eGFP重组质粒,可用于下一步LRP16转基因小鼠的构建。
- 柏苗苗王春萌伍志强梅倩李小雷李祥赵亚力韩为东
- 关键词：LRP16GATEWAY技术LRP16
