李晔
- 作品数：3 被引量：0H指数：0
- 供职机构：中山大学中山医学院寄生虫学教研室更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金高等学校学科创新引智计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 恶性疟原虫信号肽肽酶原核表达载体的构建及融合表达蛋白的鉴定
- 2014年
- 目的构建恶性疟原虫PfSPP基因pMAL-p2x的原核表达载体,并鉴定表达,为其功能研究奠定基础。方法体外培养恶性疟原虫(3D7株和FCR3株),提取虫体总RNA,进行反转录后,采用RT-PCR扩增PfSPP的全编码区基因,将其克隆入原核表达载体pMAL-p2x,PCR、双酶切鉴定重组质粒,并进行序列测定,将测序正确的重组质粒转化入大肠杆菌进行表达获得MBP-PfSPP融合蛋白,采用Western blotting对表达产物进行鉴定。结果成功构建pMAL-PfSPP,转化菌经诱导表达出分子量约为77 000Mr的MBP-PfSPP融合蛋白,抗MBP多克隆抗体可特异性地识别表达的融合蛋白。结论成功表达具有多个跨膜结构的膜蛋白PfSPP,从而为深入研究PfSPP的酶活性及生物学功能奠定基础。
- 李学荣尚梅吴银娟李晔徐劲余新炳ATHAR H.Chisthi
- 关键词：恶性疟原虫膜蛋白原核表达
- 恶性疟原虫信号肽肽酶-绿色荧光蛋白突变株的建立及其在疟原虫体内的表达分析
- 2014年
- 目的构建恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)信号肽肽酶(PfSPP)基因转染载体,筛选可在体内表达疟原虫信号肽肽酶-绿色荧光蛋白(PfSPP-GFP)的疟原虫。方法提取Trager-Jensen法培养的恶性疟原虫3D7株基因组DNA,PCR扩增PfSPP C端不含终止密码子的883 bp基因片段,克隆构建重组转染载体pSPPcGT。重组载体经PCR和双酶切鉴定后送测序。电转化法将重组载体转染入恶性疟原虫体内,采用5 nmol/L恶性疟原虫二氢叶酸还原酶抑制剂WR99210筛选转染后,恶性疟原虫经无水乙醇固定、4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色后,荧光显微镜下观察PfSPP-GFP在其体内的表达分布情况。提取筛选后恶性疟原虫全蛋白,Western blotting分析虫体内PfSPP-GFP蛋白的表达情况。结果 PCR扩增获得PfSPP基因C端不含终止密码子的DNA片段,大小为883 bp。构建的重组转染载体pSPPcGT经PCR鉴定、双酶切鉴定和测序鉴定均正确。荧光显微镜观察结果显示,筛选后恶性疟原虫细胞内有绿色荧光蛋白表达,主要位于细胞质中,表明PfSPP-GFP已成功转染至恶性疟原虫并表达。Western blotting分析结果显示,转染的恶性疟原虫可表达含PfSPP-GFP融合蛋白,与预期相对分子质量(Mr)64 000大小一致。结论构建了恶性疟原虫PfSPP-GFP重组转染载体,筛选获得了能在疟原虫体内表达PfSPP-GFP的突变株。
- 李学荣吴银娟尚梅李晔徐劲余新炳ATHAR Chishti
- 关键词：恶性疟原虫绿色荧光蛋白
- 华支睾吸虫颗粒蛋白在虫体及宿主中的表达
- 2017年
- 目的探讨华支睾吸虫颗粒蛋白(CsGRN)在虫体和宿主中的表达。方法使用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测华支睾吸虫成虫、囊蚴和虫卵及猫的肝脏、胆管组织和全血CsGRN基因mRNA表达水平;免疫组化检测CsGRN在成虫及宿主猫、人和实验感染的Balb/c小鼠肝脏中的定位。结果 CsGRN基因mRNA在虫体的各阶段都有表达,在感染的猫肝和胆管组织中高表达;CsGRN主要定位在成虫的睾丸、外膜和虫卵,在宿主人、猫和小鼠中主要分布在胆管上皮和肝细胞。结论 CsGRN可能参与虫体的生长发育,它作为分泌排泄抗原之一可能损害肝胆管组织,有进一步研究价值。
- 王彩琴雷华丽田艳丽尚梅吴银娟李晔陈庭金黄艳余新炳李学荣
- 关键词：华支睾吸虫颗粒蛋白宿主免疫定位致病机制
