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转录因子Nkx2.5和GATA4的相互作用被引量：9: 2012年; 背景:心脏发育过程是复杂多种因子相互作用的结果,对转录因子Nkx2.5和GATA4在心脏发育过程中相互作用的研究将有助进一步了解心脏发育过程。目的:分析心脏转录因子Nkx2.5和GATA4在细胞内的相互作用。方法:在构建Nkx2.5和GATA4真核表达质粒以及脑钠肽启动子荧光表达质粒的基础上,将真核表达质粒经共转染或单转染COS7细胞,利用免疫共沉淀技术验证Nkx2.5和GATA4在细胞内是否有相互作用,并通过荧光素酶分析技术分析Nkx2.5和GATA4对脑钠肽启动子序列可能存在的协同激活作用。结果与结论:通过免疫共沉淀实验发现GATA4能将Nkx2.5沉淀下来,相应的Nkx2.5也能将GATA4沉淀下来,说明在COS7细胞中,GATA4能和Nkx2.5相互作用。脑钠肽启动子荧光表达质粒并与Nkx2.5和GATA4共转染COS7细胞,比起单转染Nkx2.5或GATA4质粒,两者共转染更能激活脑钠肽启动子的表达。Nkx2.5和GATA4不仅各自在心脏发育过程中发挥重要作用,两者之间的相互协调作用对于心脏的正常发育过程同样非常重要。; 丁建东方翔李开如姚玉宇陶绍玉王点马根山; 关键词：转录因子 NKX2.5 GATA4 脑钠肽先天性心脏病

心脏转录因子GATA结合蛋白4真核表达质粒的构建被引量：5: 2010年; 背景:有研究表明心脏转录因子GATA结合蛋白4(GATA4)与先天性心脏病的发生有密切的关系,但其机制不明,而目前尚未查及GATA4真核表达质粒构建类的报道。目的:构建人类心脏特殊转录因子GATA4的真核表达质粒。方法:对重组质粒pUC57-GATA4进行酶切获得GATA4基因编码区序列,将真核表达载体pCMV-Myc和GATA4基因在双酶切后用T4连接酶连接,构建重组质粒pCMV-Myc-GATA4,转化至大肠杆菌,提取质粒后经聚合酶链反应、双酶切及测序鉴定。结果与结论:实验成功酶切重组质粒获得GATA4基因编码区约1.3kb的目的片段,聚合酶链反应和酶切鉴定以及基因测序结果显示,构建的重组真核表达质粒中含有正确的GATA4基因序列,证实成功构建了含有GATA4基因的真核表达重组质粒。; 丁建东方翔陶绍玉任利群张晓黎姚玉宇马根山; 关键词：转录因子 GATA4 重组质粒真核表达载体

中国散发性先天性心脏病患者金属蛋白酶Tolloid样1基因突变的分析被引量：1: 2012年; 目的在中国散发性先天性心脏病患者中检测金属蛋白酶Tolloid样1（TLL-1）基因的突变。方法人选115例散发性先天性心脏病患者作为先天性心脏病组，性别、年龄相匹配的102例健康者作为对照组。应用常规饱和酚-氯仿法提取基因组DNA，采用聚合酶链反应结合DNA测序技术对先天性心脏病组和对照组金属蛋白酶TLL-1基因的外显子10进行序列检测，并分析金属蛋白酶TLL．1基因的突变情况。结果在先天性心脏病组的3例房间隔缺损、2例室间隔缺损、1例动脉导管未闭和1例复杂先天性心脏病患者中发现金属蛋白酶TLL-1基因外显子10第60位插入1个碱基A，而正常对照组未发现此突变，先天性心脏病组与对照组的碱基突变发生率差异有统计学意义（6．1％比0，P〈0．01）。结论中国散发性先天性心脏病人群中存在金属蛋白酶TLL-1基因外显子10第60位碱基A插入，其导致先天性心脏病的机制有待进一步研究。; 李健丁建东方翔张华郑若龙崔俊友高春恒王点马根山; 关键词：心脏缺损先天性金属蛋白酶类

转录因子Nkx2．5基因突变与先天性心脏病相关性的初步研究被引量：11: 2009年; 目的初步探讨转录因子Nkx2．5的基因突变与中国先天性心脏病发生之间的关系。方法采用聚合酶链反应结合DNA测序技术，对99例中国散发先天性心脏病患者及90名正常人的Nkx2．5基因的外显子1进行序列检测，分析Nkx2．5基因突变是否与先天性心脏病的发生有关。结果在Nkx2．5基因外显子1中，3例室间隔缺损、7例房间隔缺损、1例肺动脉瓣狭窄、1例动脉导管未闭患者和3名正常人第239位发生了A—G的突变等位基因频率在先天性心脏病患者与正常人之间差异有统计学意义（P=0．031）。结论Nkx2．5基因外显子1基因突变与中国先天性心脏病的发生之间存在一定的相关性。; 丁建东李开如张晓黎姚玉宇任利群陶绍玉方翔马根山; 关键词：NKX2.5基因基因突变

转录因子Nkx2.5和GATA-4在心脏发育中的作用被引量：7: 2009年; 转录因子是能直接或间接辨认和结合转录上游区段DNA的蛋白质。Nkx2.5和GATA-4是两个与心脏发育密切相关的转录因子。Nkx2.5参与了心脏形成,包括右侧环化、心腔分化、心脏间隔功能成熟以及工作心肌和传导系统的维持等过程。GATA-4在心肌分化增殖和存活及心脏肥大过程中起重要作用。Nkx2.5和GATA-4在蛋白质水平相互作用,调节心房利钠肽、骨形态发生蛋白和心脏限制性锚蛋白复制蛋白等启动子的表达。; 方翔丁建东; 关键词：转录因子 GATA-4 NKX2.5 心脏发育

金属蛋白酶mTLL-1与心血管疾病: 2010年; 哺乳动物Tolloid样1(mTLL-1)属于金属肽链内切酶中虾红素家族的成员,由tll1基因编码。由于其与骨形态发生蛋白1(BMP-1)在结构和功能上具有高度的同源性,因而也属于BMP-1类分子。mTLL-1在心脏发育过程中起着关键作用,mTLL-1功能缺陷可能是导致心房间隔缺损的重要因素之一,近期研究发现心房间隔缺损的患者中存在mTLL-1基因突变。在此综述了mTLL-1在心脏中的表达、mTLL-1与心脏和主动脉形成及定位缺陷、mTLL-1与心脏分隔、mTLL-1基因突变与房间隔缺损以及mTLL-1与其他心脏畸形。; 李健方翔丁建东; 关键词：金属蛋白酶房间隔室间隔

心脏转录因子Nkx2.5真核表达质粒的构建被引量：2: 2010年; 目的构建人类心脏特殊转录因子Nkx2.5的真核表达质粒,为进一步探讨Nkx2.5在心脏发育及先天性心脏病发病过程中的作用奠定基础。方法以质粒pCMV6-XL5-Nkx2.5为模板,并设计上下游引物扩增Nkx2.5编码区序列,将真核表达载体pCMV-HA和Nkx2.5的PCR产物分别在双酶切后用T4连接酶连接,构建重组质粒pCMV-HA-Nkx2.5,转化至大肠杆菌,提取质粒后经PCR、双酶切及测序鉴定。结果成功设计引物扩增出Nkx2.5基因编码区约1 000 bp的目的片段,PCR和酶切鉴定结果显示,构建的重组真核表达质粒中含有正确的Nkx2.5基因序列。结论成功构建了含有Nkx2.5的真核表达重组质粒,为后续研究奠定基础。; 方翔丁建东李开如姚玉宇陶绍玉王点马根山; 关键词：转录因子 NKX2.5 重组质粒真核表达载体

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方翔