徐小芹
- 作品数：16 被引量：54H指数：5
- 供职机构：华南农业大学兽医学院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目广州市科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 鸡白痢杆菌引起鸡关节病的病例报道
- 2005年
- 辛朝安徐成刚廖明罗开健徐小芹
- 关键词：大肠杆菌感染关节病病毒性关节炎维生素D缺乏葡萄球菌感染维生素缺乏
- 1型鸭肝炎病毒R株全基因组分析与检测技术的研究被引量：11
- 2008年
- 【目的】测定1型鸭肝炎病毒(DHV1)毒株R全基因组,建立鸭肝炎病毒1型巢式PCR与实时荧光定量RT-PCR。【方法】设计特异性引物测定DHV1毒株R全基因组,以3D为靶基因序列的引物P1和P2,P3和P4进行巢式PCR,引物F和R进行实时荧光定量RT-PCR。【结果】序列分析发现该毒株与其它GenBank上发表的DHV1毒株基因组核苷酸序列同源性为94.2%～99.2%,编码聚合蛋白氨基酸序列同源性为98%～98.8%,表明DHV1-R株与其它DHV1毒株之间病毒基因组一级结构有较高的同源性。基因组结构5′UTR-VP0-VP3-VP1-2A1-2A2-2B-2C-3A-3B-3C-3D-3′UTR在遗传进化关系上与副肠孤病毒属(Parechovirus)亲缘关系较近。参照鸭肝炎病毒1型基因序列设计特异性引物,分别进行巢式PCR和SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR方法检测鸭肝炎病毒1型,结果表明巢式PCR敏感性为6pg·ml-1。实时荧光定量RT-PCR确定特异性产物的Tm值,同时做普通RT-PCR。试验结果表明,特异性产物的Tm值为85.6℃,最低能检测到含0.015fg·μl-1阳性质粒标准品。【结论】建立的巢式PCR与SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR检测方法显示了较好的特异性、敏感性,为鸭肝炎病毒1型的临床检测和流行情况调查提供了新的技术手段。
- 罗玉均张桂红陈建红廖明徐小芹任涛张济培罗开健
- 关键词：全基因组巢式PCR荧光定量RT-PCR
- 一种Ⅰ型鸭肝炎病毒的分子生物学鉴别方法
- 本发明公开了一种I型鸭肝炎病毒的分子生物学鉴别方法，包括处理待检样品、制取样品的RNA、反转录得到样品的cDNA、荧光定量RT－PCR或巢式PCR法鉴定I型鸭肝炎病毒等步骤。本发明具有诊断快速、灵敏性高、且适用范围广的有...
- 张桂红罗玉均孔留五陈建红徐小芹廖明
- 文献传递
- Ⅰ型鸭肝炎病毒R株全基因组分析与检测技术的研究
- 本研究对一株 DHV1毒株 R 进行了全基因组测定(EF585200),序列经 DNAstar 分析发现,该毒株与其他 Gen- Bank 发表的 DHV1毒株基因组核苷酸序列同源性为94．2%～99．2%,编码聚合蛋白...
- 罗玉均张桂红陈建红廖明徐小芹任涛张济培罗开健
- 关键词：全基因组
- 文献传递
- 单增李斯特氏菌溶血素基因的克隆及原核表达被引量：1
- 2011年
- 参考GenBank收录的单增李斯特菌Hly基因序列,设计1对引物,采用PCR技术扩增出单增李斯特氏菌的溶血素基因Hly(不含有信号肽部分),得到一条1590bp的条带。将其连入pMD18-T载体,经酶切、PCR鉴定和序列测定法进行鉴定。测序正确后,将该基因插入到pET-28a中构建原核表达载体pET-28a-sHly,将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,将诱导产物用SDS-PAGE和Western-blot鉴定。结果显示,Hly基因可以在大肠杆菌中获得表达,表达产物分子质量约为65kU,与预期蛋白质分子质量大小一致。经Western-blotting鉴定可知,诱导表达产物以可溶形式存在,可被兔抗LM阳性血清特异识别,具有较好的抗原活性,为进一步研制基于溶解素蛋白的诊断抗原和特异性单克隆抗体,开展LM的致病与免疫机理研究奠定基础。
- 吴晓薇徐成刚马保华江经纬叶贺佳区燕宜徐小芹廖明
- 关键词：单核细胞增生性李斯特氏菌溶血素基因克隆原核表达
- 金丝猴肺脏中分离到绿脓杆菌被引量：1
- 2009年
- 徐小芹罗玉均冯春复徐成刚何逸民廖明张桂红
- 关键词：绿脓杆菌金丝猴肺脏动物园脓肿病死
- 广州地区禽产品单核细胞增生性李斯特菌污染情况调查被引量：1
- 2011年
- 单核细胞增生性李斯特菌是食品卫生上重要的病原菌。它广泛存在于自然界,可导致人和动物脑膜炎、流产、败血症等,病死率高达30%～70%,是目前人类最重要的食物源性病原菌之一[1,2]。
- 吴晓薇徐成刚马保华江经纬叶贺佳区燕宜徐小芹廖明
- 关键词：单核细胞增生性李斯特菌污染情况禽产品食品卫生自然界
- 关节型鸡白痢沙门菌的分离、鉴定及脉冲场凝胶电泳分型研究
- 本研究从广东A公司下属3个肉鸡分公司、广西B公司4个分公司9个肉鸡群发生跗关节、翅关节肿胀的病鸡肿胀部位，B公司孵化场19日龄死胚跗关节处、B公司种鸡场种蛋蛋壳表面，进行病原分离、鉴定，采用K—B法对所分离的菌株进行药敏...
- 徐成刚徐小芹辛朝安廖明
- 关键词：PFGE
- 文献传递
- I型鸭肝炎病毒VP1、3D基因克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：10
- 2008年
- 根据GenBank中的I型鸭肝炎病毒全基因序列设计了扩增I型鸭肝炎病毒VP1、3D基因的引物,用该特异性表达引物从I型鸭肝炎病毒cDNA模板中扩增得到目的基因VP1、3D,用相同的限制性内切酶酶切目的基因和表达载体pET32a后构建重组表达载体,转化宿主BL21(DE3),用不同浓度的IPTG诱导VP1、3D基因的表达,收集菌液进行SDS-PAGE电泳,Western-blotting分析蛋白免疫原性。结果表明,VP1、3D在大肠杆菌中表达量较高,表达产物的分子量约为48kD、68kD,并能被兔抗DHV-1血清所识别。I型鸭肝炎病毒VP1、3D蛋白在大肠杆菌中表达产物具有免疫原性。
- 孔留五罗玉均张桂红陈建红徐小芹廖明康艳梅何逸民
- 关键词：VP1基因3D基因克隆表达
- 使用二重PCR方法快速检测单核细胞增生性李斯特氏菌的研究被引量：2
- 2011年
- 本研究以单核细胞增生性李斯特菌Hly基因和InlA基因作为靶序列设计2对引物,建立了检测单增李斯特菌的二重PCR方法。结果表明,该方法可以同时扩增出单增李斯特菌的Hly基因和InlA基因,而对大肠杆菌、沙门氏菌等食品中的常见致病菌和英诺克李斯特菌均不能扩增出任何条带,表现出良好的特异性。二重PCR方法的最低检测限为104CFU/mL,并能够用于鉴定实验小鼠攻毒后内脏器官的单增李斯特菌分离培养物。该方法表现出良好的特异性、敏感性和通用性,适用于单增李斯特菌的快速鉴别检测。
- 吴晓薇徐成刚李贺江经纬叶贺佳区燕宜徐小芹廖明
- 关键词：单增李斯特菌二重PCR
