张姝芳
- 作品数：9 被引量：13H指数：4
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- 两种蟾蜍（Bufo）MCL-1 cDNA的克隆及其重组蛋白表达与抗血清的制备
- 髓细胞白血病基因-1/(myeloid cell leukemia-1，mcl-1/)是bcl-2家族的一个抗凋亡成员，在凋亡调控中具有重要作用。由于mcl-1可以直接调控细胞分化和细胞周期，所以与肿瘤的发生发展密切相关...
- 张姝芳
- 关键词：中华蟾蜍重组蛋白抗血清
- 文献传递
- 中华大蟾蜍mcl-1基因克隆及其重组蛋白在原核体系中的诱导表达被引量：7
- 2013年
- 以蟾蜍（Bufo）为基原的常用中药材有蟾酥、蟾衣、蟾皮、干蟾等，具有强心、麻醉、解毒、止痛、抗菌、增强免疫力及抗肿瘤等药理作用，按溶解性可将其成分划分为脂溶性甾族类和水溶性吲哚生物碱类。体内外实验已证明由蟾皮制成的水溶性注射液——华蟾素具有良好的抗肿瘤效果。
- 胡巧玲张姝芳杨仙玉余美华诸葛慧
- 关键词：中华大蟾蜍原核表达重组蛋白
- 中华大蟾蜍TAGLN2 cDNA的克隆与其组织分布被引量：3
- 2013年
- 为研究蟾蜍旧ufo）基原的中药材中的多肽类有效成分，开展从日本蟾蜍（B．japonicus for-moslAs）皮肤cD—NA质粒文库中筛选蛋白编码基因的工作．由于后续拓展蟾蜍药用价值的研究中需要大量的实验材料，开始以中华大蟾蜍（B．gargarizarts）皮肤第一链cDNA为模板，克隆其相关基因的工作．通过DNA聚合酶链式反应获得编码转胶蛋白-2（transgelin2，TAGLN2）的转录子（GenBank登录号为KF432856）．该cDNA全长1207bp，其5’、3’端非翻译区域和开放阅读框分别为16bp、597bp和594bp，编码由197个氨基酸残基组成的蛋白质，与日本蟾蜍的TAGLN2（GenBank登录号为AGQ03775．1）相比，仅一个氨基酸发生替换，与人的同源性为82％，与其他动物的同源性介于70％～75％．RT—PCR组织分布检测表明TAGLN2在所检测的中华大蟾蜍各器官中均有表达．在肺、肝和肾中表达量较多．这些研究结果为后续中华大蟾蜍TAGLN2的生物学功能研究以及相关药物研发提供基础数据．
- 张珊珊诸葛慧张姝芳季煜程方恩浩杨仙玉
- 关键词：中华大蟾蜍基因克隆
- 日本蟾蜍聚集素cDNA的克隆与序列分析被引量：5
- 2013年
- 为研究蟾酥、蟾衣、蟾皮中多肽类有效成分,通过菌落PCR对日本蟾蜍(Bufo japonicus formosus)皮肤cDNA质粒文库进行了筛选,获得了聚集素(clusterin,CLU)全长cDNA序列(GenBank登录号为JX035891)并对其进行了生物信息学分析。日本蟾蜍clucDNA全长为1 616 bp,包括1 332 bp的开放阅读框(open reading frame,ORF)、5'端30 bp及3'端254 bp的非翻译区(untranslated region,UTR)。根据cDNA序列推导的日本蟾蜍CLU前体蛋白由443个氨基酸残基组成,其中含20个氨基酸残基组成的信号肽,6个糖基化位点,10个可形成二硫键的半胱氨酸残基和2个卷曲螺旋区域。氨基酸序列同源性分析显示,日本蟾蜍CLU与非洲爪蟾(Xenopus laevis)的同源性为65%,与其他7种动物的同源性则介于41%-48%之间。
- 袁进强徐跃杨仙玉诸葛慧张姝芳
- 关键词：聚集素基因克隆
- 日本蟾蜍MCL-1 cDNA的克隆及生物信息学分析被引量：6
- 2013年
- 克隆日本蟾蜍(Bufo japonicus formosus)髓细胞白血病基因-1(myeloid cell leukemia-1,mcl-1),并进行序列分析。通过菌落PCR对日本蟾蜍皮肤cDNA质粒文库筛选获得目的基因。运用生物信息学方法对该基因进行分析,预测其编码蛋白的结构和功能。序列分析表明mcl-1基因(GenBank登录号为JX219482)的cDNA全长为1 090 bp,5′端和3′端非翻译区域分别为19bp和432 bp,ORF由639个碱基组成,编码由212个氨基酸残基组成的蛋白质。经氨基酸序列同源性比对发现,日本蟾蜍与非洲爪蟾(Xenopus laevis)的同源性为60%,与其他7种动物的同源性在38%-55%之间。MCL-1氨基酸序列构建的进化树与传统动物分类学相符。日本蟾蜍MCL-1与人类同源蛋白具有相似的结构特征,对其cDNA序列的进一步分析,将为研究其生物学功能和药物研发奠定基础。
- 张姝芳袁进强黄慧诸葛慧徐跃杨仙玉
- 关键词：基因克隆
- 中华大蟾蜍gal-3基因多样性的原因分析被引量：2
- 2013年
- 使用TAKARA的SMARTer^(TM)RACE cDNA Amplification Kit和改进的Quantscript RT kit方法制备了3组源于同一中华大蟾蜍(Bufo gargarizans)个体皮肤总核糖核酸(RNA)的第一链互补脱氧核糖核酸(cDNA),并以此为模板通过聚合酶链式反应(PCR,polymerase chain reaction)扩增半乳糖凝聚素3(gal-3)的全长开放阅读框(ORF,open reading frame),然后进行PCR产物的克隆、测序,再通过多种形式的序列比对分析该基因多样性产生的原因.从3组实验得到31个克隆,去除组内和组间重复出现的序列,共获得16个不同的cDNA.相同的序列,相同的单核苷酸多态性位点(single nucleotide polymorphism,SNP)以及相同位置相同数目的碱基缺失在3组独立的实验中重复出现,表明gal-3基因多样性.实际上,gal-3基因的多样性导致其编码蛋白的多样性.尽管如此,推导的氨基酸序列比对显示半乳糖凝聚素3糖基结合位点、磷酸化位点以及与其生物学功能关系密切的相关基序均高度保守,暗示中华大蟾蜍皮肤gal-3基因多样性的客观存在.
- 潘李念万文彬张姝芳诸葛慧周品品杨仙玉
- 关键词：中华大蟾蜍分子多样性
- 日本蟾蜍TAGLN2 cDNA的克隆与生物信息学分析被引量：5
- 2013年
- 为研究蟾蜍皮肤中多肽类有效成分,通过菌落PCR(polymerase chain reaction)对日本蟾蜍(Bufojaponicus formosus)皮肤cDNA质粒文库进行筛选,对测序结果进行分析及同源性比较,获得转胶蛋白-2(transgelin-2,TAGLN2)的5′端缺失的部分cDNA序列(GenBank登录号为JX197456),长为997 bp,包括348 bp的开放阅读框(open reading frame,ORF)、5'端31 bp及3'端618 bp的非翻译区(untranslated region,UTR),编码由115个氨基酸残基组成的蛋白质。推导的氨基酸序列含有一个调宁蛋白同源性结构域(calponin homology,CH)、两个可形成二硫键的半胱氨酸残基、3个α螺旋区域和5个潜在的磷酸化位点。氨基酸序列同源性分析显示,本文获得的日本蟾蜍N-端截短型TAGLN2与热带爪蟾(Xenopus(Silurana)tropicalis)和非洲爪蟾(Xenopus laevis)相对应部分的同源性分别为90%和89%,与其他7种动物的同源性介于71%～85%之间。
- 诸葛慧袁进强张姝芳杨仙玉
- 关键词：基因克隆生物信息学分析
- 日本蟾蜍皮肤胸腺素α原cDNA的克隆及序列分析被引量：2
- 2013年
- 为研究蟾酥、蟾衣、蟾皮中多肽类有效成分,通过菌落聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)对日本蟾蜍Bufo japonicus formosus皮肤cDNA质粒文库进行了筛选,获得胸腺素α原(prothymosin-α,ProTα)全长cD-NA序列,并对它们进行了生物信息学分析。日本蟾蜍ProTαcDNA全长为1 480 bp,包括339 bp的完整开放阅读框(open reading frame,ORF),5′端125 bp及3′端1 016 bp的非翻译区(untranslated region,UTR)。根据cDNA序列推导的日本蟾蜍ProTα由112个氨基酸残基组成,无信号肽结构。氨基酸序列同源性分析显示,日本蟾蜍ProTα与食用蛙Rana esculenta同源性为82%,与其他11种动物的同源性则介于54%～73%。ProTα具有显著的抗肿瘤作用。分析日本蟾蜍ProTαcDNA序列,可为研究其生物学功能和药物研发提供实验依据。
- 宋敏国袁进强杨仙玉张姝芳诸葛慧徐跃
- 关键词：动物学基因克隆
- MCL-1原核表达载体构建及重组蛋白表达被引量：1
- 2013年
- [目的]构建日本蟾蜍(Bufo japonicus formosus)髓细胞白血病基因-1(myeloid cell leukemia-1,mcl-1)的原核表达载体并诱导其重组蛋白表达。[方法]通过PCR方法扩增日本蟾蜍皮肤mcl-1开放阅读框,将其插入到原核表达载体pET-28b中。经菌落PCR、DNA限制性内切酶消化筛选阳性克隆,并通过DNA测序确定原核表达载体pET-28b-mcl-1构建成功。将pET-28b-mcl-1转入大肠杆菌(E.coli)感受态细胞BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达,并用SDS-PAGE对重组蛋白的表达进行检测。[结果]原核表达载体pET-28b-mcl-1构建成功;重组蛋白在大肠杆菌中成功表达。[结论]原核表达载体的构建及重组蛋白的表达,为后续MCL-1的纯化、抗血清的制备及生理功能检测奠定了基础。
- 余美华张姝芳倪晓敏袁进强胡巧玲万文彬杨仙玉
- 关键词：MCL-1原核表达载体重组蛋白表达
