- 10种中草药成分对体外过表达Aβ的影响及机制探讨被引量：5
- 2014年
- 筛选对阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）患者脑内老年斑的组成成分β-淀粉样蛋白（β-amyloid peptide，Aβ）有抑制作用的中草药成分，并探讨其可能机制。从资料中选出10种具有潜在治疗AD的中草药成分，分别以不同药物浓度（0．5～100μmol·L1）作用于两种双基因转染细胞模型（117细胞模型：过表达Aβ和β-分泌酶；146细胞模型：过表达Aβ和γ-分泌酶），一定时间后，用ELISA法测定各组细胞外Aβ水平，初筛出具有降低细胞外Aβ的中草药成分，并估算其最佳药物浓度范围，然后分别观察其对细胞形态、活力及凋亡率的影响，并分析其对模型细胞内Aβ水平、β、γ-分泌酶活性的作用效果。初筛结果显示，10种中草药成分中有4种能浓度依赖性降低两种模型外Aβ水平，分别为隐丹参酮、黄芪总皂苷、天麻素和芍药苷，其浓度分别在0．5～5．0、0．5～5．0、5．0～50和1．0～25μmol·L_。内时效果最为显著。进一步的研究表明，这4种中草药成分对细胞活性无抑制作用，对细胞内Aβ的降低水平大于细胞外，黄芪总皂苷和天麻素还分别对β-分泌酶、γ-分泌酶活性有浓度依赖性抑制作用；其中，黄芪总皂苷对卢一分泌酶活性的最高抑制率达78．2％，天麻素对γ-分泌酶活性的最高抑制率达80．3％。综上所述，隐丹参酮、黄芪总皂苷、天麻素和芍药苷对细胞模型产生的Aβ均有浓度依赖性抑制作用，其中黄芪总皂苷、天麻素抑制Aβ的作用机制可能分别与抑制β-分泌酶活性、γ-分泌酶活性有关。
- 朱燃黄田喜赵雪梅张冀民梁平
- 关键词：黄芪总皂苷天麻素淀粉样蛋白分泌酶
- 阿尔采末病Aβ多肽基因的高效表达及纯化研究被引量：1
- 2004年
- 目的 通过对Aβ多肽基因进行重组克隆 ,构建质粒和高效表达的菌株 ,并研究表达产物快速高效的纯化回收方法。方法 采用IMPACT TWIN表达系统构建Intein Aβ重组基因表达质粒 ,将该质粒转化至BL2 1(DE3) ,筛选高效表达菌株 ;表达产物经ChitinBeads亲和层析柱分离纯化 ;SDS PAGE电泳 ,毛细管区带电泳及免疫印迹法等鉴定。结果 重组的Intein Aβ基因在BL2 1中获得高效表达 ,筛选出稳定高效表达的BL2 1(DE3)细胞株 ;融合蛋白表达量可达全菌蛋白的 6 0 % ;表达产物经ChitinBeads亲和层析纯化后 ,其纯度可达 98%以上 ,并具有与Aβ多肽相同的分子量及免疫学活性。结论 Aβ多肽基因在IMPACT TWIN系统中可获得高效表达 ,利用ChitinBeads亲和层析方法可将表达的Aβ多肽进行快速、简便、无酶化的高效分离纯化。
- 杜洪震赵雪梅潘杨杏张冀民梁平
- 关键词：阿尔采末病基因表达
- 阿尔采末病淀粉样前体蛋白(APP)和早老素-1(PS-1)双重基因稳定转染细胞系的建立被引量：1
- 2004年
- 目的 构建APP751和PS 1(M14 6L)双重基因稳定转染的中国仓鼠卵巢 (CHO)细胞系 ,以用于 β 分泌酶或γ 分泌酶抑制剂的研究和相关药物的筛选。方法 从人胎盘基因文库中用多聚酶链反应 (PCR)方法扩增野生型和突变型PS 1(M14 6L)基因 ,并重组克隆到PCI neo质粒 ,用脂质体 (Lipo fectAmine)法将野生型和突变型 (M14 6L)PS 1转染至含APP751表达基因的CHO细胞 ,选择培养液筛选能稳定表达目的基因的CHO细胞株。用免疫沉淀和ELISA测定分析细胞表达产物。结果 建立了数株能表达Aβ和PS 1的CHO细胞。在转染细胞株中高表达的SP 1为全长 4 5kd的PS 1蛋白 ;野生型PS 1和突变型PS 1(M14 6L)以及单纯APP751转染的CHO细胞株均可分泌Aβ多肽 ,且突变型PS 1(M14 6L)转染的细胞株分泌到条件培养液中的Aβ1～ 42 比其它细胞株增加了近两倍。结论 突变型PS 1(M14 6L)的高表达可促使Aβ1～ 42 的分泌增加。我们建立的PS 1和APP双重基因稳定转染的CHO细胞株模型 ,可用于 β 分泌酶或γ
- 梁平潘扬杏赵雪梅杜洪震张冀民
- 关键词：早老素-1基因转染
- 天麻素抑制小鼠大脑内Aβ斑块形成及其作用机制被引量：19
- 2016年
- 观察天麻素对5×FAD阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)模型小鼠脑内Aβ纤维斑块的影响,并利用117模型细胞(过表达Aβ和β-分泌酶)研究其可能的作用机制。5×FAD小鼠随机分为天麻素(gastrodin,GAS)高剂量(200 mg·kg^(-1)·d^(-1))、中剂量(100 mg·kg^(-1)·d^(-1))及低剂量(50 mg·kg^(-1)·d^(-1)),并设置5×FAD阳性小鼠对照组及5×FAD阴性小鼠对照组。用药3个月后,用Morris水迷宫检测小鼠行为学变化,ELISA法检测小鼠脑匀浆中Aβ含量,免疫组化观察5×FAD小鼠脑内海马区及皮层区Aβ斑块。天麻素以不同的浓度(10~100μmol·L^(-1))作用于117细胞,分别检测细胞内外Aβ含量变化,分析细胞内β-分泌酶转录水平和蛋白水平的变化,以及细胞凋亡、细胞活力的变化情况。结果显示:与5×FAD阳性对照组相比,天麻素高剂量组(GAS-H)平台寻找时间缩短50.60%,在目标象限逗留时间延长2.25倍;脑匀浆中Aβ含量下降55.74%;脑内Aβ斑块在海马区减少93.28%,在皮质区减少88.88%;117细胞实验结果表明,天麻素在100μmol·L^(-1)时细胞内外Aβ含量分别降低63.1%和49.1%,且降低的效果呈浓度依赖性;天麻素在100μmol·L^(-1)时细胞β-分泌酶转录水平降低32.9%;50μmol·L^(-1)时细胞β-分泌酶蛋白表达水平降低47.9%。结果提示:天麻素可抑制5×FAD鼠脑内Aβ纤维斑块,同时可明显改善其学习记忆及认知能力。初步研究其机制,发现可能与抑制β-分泌酶的表达进而抑制Aβ及其纤维斑块的形成有关。
- 周楠楠朱燃赵雪梅张冀民梁平
- 关键词：天麻素Β淀粉样多肽Β-分泌酶
