廖永翠
- 作品数：7 被引量：24H指数：3
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 白木香AsMYC2蛋白的原核表达与纯化被引量：5
- 2016年
- MYC2转录因子属于bHLH转录因子家族中重要的一员,它是植物茉莉酸(JA)信号途径中的核心调控元件之一,但在白木香中研究甚少。本实验以白木香叶片中分离的总RNA为模板,通过RT-PCR方法获得AsMYC2基因的编码区(CDS)全长,利用基因重组技术构建pGEX-4T-1-AsMYC2原核表达载体,并进行酶切和测序鉴定,将鉴定正确的克隆转化大肠杆菌BL21(DE3),在37℃下0.1 mmol·L^(-1)异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导4 h,AsMYC2蛋白的表达量最高,且主要为可溶性蛋白。利用谷胱甘肽亲和介质进行融合蛋白的纯化,最后应用SDS-PAGE电泳和Western blotting鉴定融合蛋白。结果表明,成功构建了pGEX-4T-1-AsMYC2原核表达载体,诱导了GST-AsMYC2(谷胱甘肽巯基转移酶-AsMYC2)融合蛋白的表达并进行了蛋白的纯化。高质量的GST-AsMYC2融合蛋白的获得,为多克隆抗体的制备提供材料基础,为筛选其互作蛋白因子和研究基因功能奠定基础。利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术对该基因进行组织表达特异性分析,结果显示AsMYC2基因在沉香形成的主要部位根和茎中的表达量最高,在叶中的表达量最低;该结果提示该基因可能与白木香中沉香的形成有关。
- 廖永翠徐艳红张争魏建和
- 关键词：白木香
- 一种诱导型启动子及其应用
- 本公开涉及一种诱导型启动子，还涉及含有所述诱导型启动子的表达载体以及该诱导型启动子在调控目标基因表达中的应用，本公开所提供的诱导型启动子具有在诱导条件下启动下游结构蛋白基因表达的功能。为利用其诱导表达机制、提高白木香倍半...
- 魏建和徐艳红孙佩文吕菲菲高志晖廖永翠张争杨云金钺
- 文献传递
- 茉莉酸信号途径参与调控沉香倍半萜生物合成的分子机制研究
- 茉莉酸(JA)及其衍生物统称为茉莉素(JAs)，广泛存在于植物中的一类植物内源激素，对植物生长和发育具有广泛的生理效应;同时可作为内源信号分子参与植物的抗逆反应。长期以来，对JA信号途径的机制及功能的研究一直是生命科学研...
- 廖永翠
- 关键词：白木香信号途径茉莉酸
- 白木香AsNINJA1基因全长cDNA克隆及其在愈伤组织中的茉莉酸甲酯诱导表达被引量：3
- 2014年
- 目的克隆国产沉香基原植物白木香Aquilaria sinensis互作蛋白(jasmonate Zim-domain,JAZ)基因(NINJA),为深入研究其在沉香倍半萜合成途径中的功能奠定基础。方法以白木香总RNA为模板,采用RACE法和RT-PCR方法,克隆白木香NINJA基因cDNA全长,并进行生物信息学的分析;采用实时荧光定量(qRT-PCR)方法分析经茉莉酸甲酯(MeJA)处理的白木香愈伤组织中AsNINJA1基因的表达模式。结果获得白木香NINJA基因全长cDNA,命名为AsNINJA1。序列分析表明,该基因的序列全长为1 982 bp,包含一个1 221 bp的开放阅读框,编码406个氨基酸,蛋白质相对分子质量为43 697,等电点为6.02。qRT-PCR结果显示,经MeJA处理4 h后AsNINJA1基因相对表达量最高,是对照(未经MeJA处理的白木香愈伤组织)的近100倍,随后显著下降。结论获得AsNINJA1基因全长cDNA序列,该基因对MeJA诱导极为敏感,且能在伤害早期响应。
- 廖永翠徐艳红张争隋春梁良魏建和
- 关键词：白木香茉莉酸甲酯
- 白木香肉桂酸-4-羟基化酶(C4H)基因的克隆及表达分析被引量：10
- 2014年
- 对国产沉香的基原植物白木香Aquilaria sinensis肉桂酸-4-羟基化酶基因C4H编码区进行克隆,并对其进行生物信息学分析和表达分析。根据已报道的白木香伤害转录组高通量测序结果分析获得1条具有肉桂酸羟化酶酶保守结构域的C4H基因序列,采用RT-PCR技术克隆得到白木香C4H基因编码区序列,并对C4H蛋白进行生物信息学分析。另外,采用qRT-PCR方法对C4H基因在伤害胁迫下的表达模式进行分析。序列分析表明,所克隆的C4H基因编码区开放阅读框(opening reading frame,ORF)长为1 515 bp,编码514个氨基酸,GenBank登录号为KF134783。qRT-PCR实验证明C4H基因受不同伤害处理的诱导,分别在8,20 h达到最高表达水平。白木香C4H基因的编码区序列的分离克隆为进一步研究C4H蛋白在白木香中黄酮及芳香族类化合物合成途径中的功能及表达调控奠定基础。
- 梁良韩晓敏张争郭庆梅徐艳红刘娟廖永翠
- 关键词：白木香芳香族化合物
- 一种诱导型启动子及其应用
- 本公开涉及一种诱导型启动子，还涉及含有所述诱导型启动子的表达载体以及该诱导型启动子在调控目标基因表达中的应用，本公开所提供的诱导型启动子具有在诱导条件下启动下游结构蛋白基因表达的功能。为利用其诱导表达机制、提高白木香倍半...
- 魏建和徐艳红孙佩文吕菲菲高志晖廖永翠张争杨云金钺
- 白木香AsJAZ1基因原核载体的构建与表达被引量：3
- 2016年
- 克隆国产沉香基原植物白木香Aquilaria sinensis jasmonate-zim-domain protein(As JAZ1)基因的编码区,构建原核表达载体及诱导重组蛋白的表达,为筛选互作蛋白因子和研究基因功能奠定基础。该实验以白木香叶片中分离的总RNA为模板,通过RT-PCR方法克隆到茉莉酸信号转导抑制蛋白基因JAZ(As JAZ1)的编码区全长序列,克隆到原核表达载体p ET-28a上,构建重组原核表达载体p ET-28a-As JAZ1,经酶切鉴定和测序验证后将其转入大肠杆菌BL21(DE3),在37℃经0.5 mmol·L-1异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达4 h后,可获得相对分子质量约为39 k Da的融合重组蛋白的高效表达。该重组蛋白在大肠杆菌的上清和沉淀中均有表达,但以包涵体表达为主。
- 廖永翠徐艳红张争魏建和
- 关键词：白木香原核表达
