屈贤铭
- 作品数：30 被引量：442H指数：12
- 供职机构：中国科学院上海生命科学研究院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划中国科学院重点实验室基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生化学工程更多>>
- 抗菌肽及其生产方法和应用
- 本发明提供了一组新的抗菌肽。这些抗菌肽具有比天然抗菌肽更强的对抗植物病原体，特别是细菌感染的生物化学活性，还提供了以化学合成方法、DNA重组技术生产所说的抗菌肽的方法，以及这些抗菌肽及其融合体在防治植物、动物或人体病原体...
- 贾士荣屈贤铭冯兰香唐惕
- 文献传递
- 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子/白细胞介素-3融合蛋白的表达研究被引量：1
- 2000年
- 利用PCR扩增得到粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子 (GM CSF)、白细胞介素 3(IL 3)完整基因片段 ,将其分别克隆至pGEM T ,构建成GM CSF/IL 3融合蛋白基因 ,DNA序列与设计预期一致。将得到的融合蛋白基因克隆至T7RNA聚合酶表达载体pT7zz,得到表达质粒pFu ,经转化至表达宿主E .coliBL2 1(DE3) ,在IPTG诱导下获得融合蛋白目的产物的直接表达。经SDS PAGE电泳鉴定扫描分析 ,目的基因产物表达量占菌体总蛋白量的 30 %以上 ,目的基因表达产物以包涵体的形式表达。Western blot鉴定表明 ,该表达产物可以与GM CSF抗体及IL 3抗体特异性结合。目的基因表达产物经过包涵体变性、透析复性及柱层析纯化 ,用GM CSF、IL 3依赖细胞株TF 1检测 。
- 张毅屈贤铭杨胜利
- 关键词：融合蛋白基因药物GM-CSFIL-3
- 昆虫抗菌蛋白基因转录调控研究的新进展被引量：7
- 1997年
- 在自然或人为创伤和感染情况下 ,昆虫能迅速产生各种类型的抗菌因子 ,例如天蚕素(cecropin) ,果蝇抗菌蛋白 (diptericin) ,天蚕抗菌蛋白 (attacin)和防御素 (defensin)等 .这些活性多肽和蛋白从其被合成的脂肪体和某些血细胞中 ,分泌到血淋巴参与虫体对入侵物的免疫反应 .抗菌多肽和蛋白的诱导、表达及其协同作用于外源微生物 ,构成昆虫先天性防卫免疫系统中极为重要的环节 .近年的研究表明 ,昆虫的这种防卫免疫系统与哺乳动物急性期反应是相关的 。
- 屠益增蔡敏莺屈贤铭
- 关键词：抗菌蛋白基因转录调控
- 抗菌肽Magainin II单克隆抗体的制备及应用被引量：2
- 1999年
- 本文采用硝酸纤维素膜脾内埋植免疫， 利用淋巴细胞杂交瘤技术， 首次制备了抗菌肽ｍａｇａｉｎｉｎ ＩＩ的单克隆抗体（ｍＡｂ）， 获得４ 株稳定分泌抗ｍａｇａｉｎｉｎＩＩｍＡｂ 的杂交瘤细胞株。利用该ｍＡｂ 对提取的ｍａｇａｉｎｉｎ ＩＩ进行竞争性ＥＬＩＳＡ 和免疫组化分析， 均获得较满意的效果。
- 胡泰山魏万贵陆坚峰刘振义陈登鸿屈贤铭杨胜利
- 关键词：MAGAININ单克隆抗体免疫组织化学
- 抗菌肽Magainin基因的克隆及其在Pichia pastoris中的表达被引量：38
- 2002年
- 用化学合成法合成了以酵母偏爱密码子编码的抗菌肽magainin基因片段 ,合成片段拼接后 ,与pUC19重组 ,获得magainin基因 .Magainin基因与酵母表达载体pPIC3重组 ,构建胞内表达载体pPIC3 Mag ,电击法转化GS115宿主菌 ,经表型筛选和PCR鉴定证实了目的基因已稳定整合入Pichiapastoris酵母基因组中 .阳性克隆用甲醇诱导表达 ,用免疫印迹法确定了产物的正确性 .
- 陈海旭邹冠玉屈贤铭杨胜利
- 关键词：抗菌肽克隆
- 重组刺桐胰蛋白酶抑制剂a的制备及其在tPA突变体纯化中的应用被引量：5
- 2002年
- 将基因工程菌株E .coliBL2 1(DE3)pET2 2b mETIa高密度发酵 ,用异丙基硫代 β D 半乳糖苷 (IPTG)诱导 ,重组刺桐胰蛋白酶抑制剂a (rETIa)蛋白在E .coli中得到较高水平表达 ,表达量占菌体总蛋白的 4 0 %以上 .经菌体破碎、包涵体变性、复性 ,二步柱层析纯化得到电泳纯的rETIa蛋白 .测得rETIa对t PA突变体(NTA)的抑制平衡常数Ki 为 8 72× 10 -8mol/L .据此利用纯化的rETIa蛋白制备rETIa Sepharose 4B亲和层析柱 .直接一步纯化NTA复性液 ,纯化的NTA纯度达 90 %以上 ,收率为 96 2 % ,纯化倍数为 13 2 ,比活为(5 6 5 7± 71 3)U/μg .
- 王新屈贤铭杨胜利
- 关键词：纯化
- 穴居狼蛛毒中一个抗菌活性多肽的鉴定和纯化被引量：19
- 1989年
- 从我国新疆地区产穴居狼蛛的毒液中分离纯化了一种多肽——狼蛛抗菌肽(Lycosin)。穴居狼蛛的粗毒在酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳中可分出11条蛋白带,用0.6％的大肠杆菌琼脂胶覆盖在凝胶上进行鉴定表明,电泳迁移率最快的区带有抗菌活性。经鉴定该多肽分子系由43至45个氨基酸残基组成,N-末端为丙氨酸,分子中的碱性和疏水性氨基酸分别占总氨基酸残基数的1/4和1/3。
- 徐科吉永华屈贤铭
- 关键词：穴居狼蛛毒液
- 重组刺桐胰蛋白酶抑制剂a在大肠杆菌中的表达和纯化被引量：8
- 2002年
- 为了大量制备重组刺桐胰蛋白酶抑制剂a(rETIa) ,对构建的基因工程菌株E .coliBL2 1(DE3)pET2 2b mETIa进行了表达条件的优化 .用摇瓶培养 ,rETIa蛋白占菌体总蛋白 4 0 %以上 .经破碎菌体 洗涤包涵体 溶解包涵体 复性初步纯化后 ,再经二步柱层析纯化获得电泳纯的rETIa蛋白 .测定了rETIa对胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、组织型纤溶酶原激活因子缺失突变体 (NTA)的抑制活性 .
- 王新陈海旭陆坚峰张毅屈贤铭杨胜利
- 关键词：大肠杆菌纯化
- 柞蚕抗菌肽D中精氨酸、赖氨酸和色氨酸等氨基酸残基的化学修饰被引量：1
- 1988年
- 用不同的化学试剂修饰了柞蚕抗菌肽D分子中的色氨酸、精氨酸和赖氨酸等氨基酸残基。NBS修饰抗菌肽D,以及氨肽酶M对抗菌肽D作用的结果表明色氨酸残基对抗菌肽D抑制E.coli D31的作用影响不大。CHD和MLH对精氨酸和赖氨酸残基的修饰,导致抗菌肽D失去抑制E.coli的作用,但可逆地消除CHD和MLH的修饰作用后,抗菌肽D恢复了对E.coli D31的抑菌作用。这些结果初步认为,抗菌肽D抑菌作用与分子中的荷电性有关,改变了分子的电荷,也就同时失去了其抑菌功能。 此外,对精氨酸残基修饰的结果还表明,抗菌肽D的免疫原性与精氨酸残基有关。但是,抗菌肽D的免疫决定簇与其生物活性中心并不完全平行。
- 唐向辉屈贤铭
- 关键词：化学修饰柞蚕
- 柞蚕蛹抗菌肽D对大肠杆菌K_(12)D_(31)的作用被引量：1
- 1986年
- 本文报道了不同浓度的柞蚕蛹抗菌肽D,对大肠杆菌KD的杀灭作用动力学。在LEG培养液中,抗菌从D的浓度在5微克/毫升时显效。浓度在10微克/毫升以上时,其杀菌速度大于细菌的增殖速度。固定抗菌肽浓度为10微克/毫升,细菌浓度在3×10^(7)个细菌/毫升,培养在磷酸钾盐缓冲液中,4小时后能全部杀灭。同样浓度细菌在LEG培养液中,4小时后细菌数下降到约为10^(2)个细菌/毫升,但不能全部杀灭。同时还提供了柞蚕蛹抗菌肽D和B对大肠杆菌KD作用不同时间的电镜照片。
- 邱雪贞屈贤铭吴克佐戴培桦李士云
- 关键词：柞蚕抗菌肽抗菌活性大肠杆菌
