宫璀璀
- 作品数：52 被引量：141H指数：6
- 供职机构：解放军第153中心医院更多>>
- 发文基金：河南省自然科学基金河南省基础与前沿技术研究计划项目郑州市科技攻关计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组sCR1在毕赤酵母细胞中的表达、纯化及鉴定被引量：1
- 2008年
- 目的:酵母细胞SMD 1168表达人sCR1,并对重组蛋白进行纯化。方法:从人外周血中提取总RNA,应用RT-PCR获得人sCR1全长cDNA,将其克隆入真核表达载体pPIC9K,构建含人sCR1的重组质粒(pPIC9K-sCR1);经测序鉴定正确后,将重组质粒转化入毕赤酵母菌细胞SMD 1168中,经甲醇诱导,表达产物经SDS-PAGE分析及W estern b lot鉴定,并通过N i2+-NTA agarose亲和层析纯化。结果:经甲醇诱导的含pPIC9K-sCR1的酵母细胞表达出重组人sCR1的融合蛋白,48~72 h sCR1融合蛋白表达量最高。此蛋白在凝胶上表现为M r大于31 KDa的蛋白区带,在W estern b lot分析中可被sCR1的CD35单克隆抗体(mAb)识别。经N i2+-NTA agarose亲和层析纯化后得到较纯的sCR1融合蛋白。结论:人sCR1融合蛋白在酵母细胞表达系统中的高水平表达,并且有与人体天然蛋白相同的抗原活性。
- 王广兰宫璀璀王文丽刘亚利刘琰邰苏豫
- 关键词：蛋白表达
- 金银花对大鼠体内和体外RBL细胞的抗氧化保护作用及其机制被引量：11
- 2009年
- 目的:从细胞和分子水平探讨金银花(HS)对机体内外的抗氧化作用及其机制,为金银花的临床应用提供理论依据。方法:体外培养的人肝RBL细胞与0.25g·L-1的金银花共培养前或后加H2O2(氧化剂),应用MTT和TUNEL实验检测细胞生存率和凋亡率,免疫组织化学/免疫印迹检测NF-κB、HSP-70、Bcl-2、Bax及Caspase-3表达水平,检测细胞内抗氧化酶体系的水平。建立金银花大、小剂量灌胃的大鼠动物模型,检测血浆抗氧化酶体系的总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-Px)、谷胱苷肽(GSH)、丙二醛(MDA)的水平。结果:金银花对RBL细胞的抗氧化和抗凋亡作用中,前保护(先加金银花,后加H2O2)高于后保护(先加H2O2,后加金银花)的效应;下调NF-κB和HSP-70的表达和Bcl-2/Bax比值,且前保护组凋亡率低于后保护组;同时也上调细胞内抗氧化酶体系的水平。金银花灌胃1～2h后,大鼠血浆中T-AOC、GSH-Px、GSH、SOD含量较灌胃前显著增高(P<0.05),而MDA含量明显减低(P<0.05)。结论:金银花可通过上调体内抗氧化酶体系并下调NF-kB信号传导途径呈现抗氧化、抗凋亡的保护作用。
- 宫璀璀郑乃刚吴景兰赖泽仁何培霞
- 关键词：金银花过氧化氢
- HIF-1α和RelA基因在急进高原正常人外周血单个核细胞中的表达及其与急性高原反应的关联性被引量：2
- 2013年
- 目的:观察急进高原前后正常人单个核细胞中缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和核转录因子NF-κB p65亚基(RelA)表达水平的变化,探讨HIF-1α和RelA在急性高原反应(AMS)发生中的作用及机制。方法:对某部赴玉树抗震的士兵分别于进入高原前和进入高原后48h采集外周血,提取单个核细胞中的mRNA和蛋白,采用RT-PCR方法检测RelA和HIF-1αmRNA表达水平,Western blotting法检测HIF-1α蛋白表达水平。Spearman相关分析法分析RelA和HIF-1α基因表达与AMS发生的相关性。结果:与急进高原前比较,进入高原后HIF-1α和RelA mRNA及HIF-1α蛋白表达水平均显著增高(P<0.01);HIF-1αmRNA和RelA mRNA表达呈正相关关系(r=0.806,P<0.01);HIF-1α蛋白表达与AMS的发生率呈正相关关系(r=0.875,P<0.01);HIF-1α和RelA表达不同性别之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:HIF-1α蛋白表达水平可作为预测和干预AMS的监测指标。急进高原后HIF-1α和RelA mRNA表达水平显著增加且呈显著正相关关系,提示在其信号传导通路之间存在cross-talk现象。
- 方盼盼宫璀璀仓宝成李正民李宗杰李文莉朱传杰王迎涛
- 关键词：急性高原反应核转录因子KAPPABCROSS-TALK
- 8-Br-cAMP和槲皮素联合应用对Eca-109细胞增变基因表型的影响被引量：1
- 2010年
- 目的:探讨8-Br-cAMP和槲皮素联合应用对Eca-109细胞增变基因表型变动的影响。方法:将Eca-109细胞分为4组:①8-Br-cAMP组(Br组);②槲皮素组(Q组);③(Br+Q)组;④不加药物的对照组(C)。同时培养48 h,对以上4组细胞制备细胞滴片及硝酸纤维素膜(NCM)滴膜2种标本,分别进行Bcl-2、Bax、XRCC1、MRP和POLB的免疫组化和免疫斑点印迹实验,并以TUNEL法检测各组细胞凋亡率。结果:细胞凋亡率,C组为4%,(Br+Q)组为70%,Br组为42%,Q组为35%,(Br+Q)组>Br组或Q组>C组,(P<0.001)。Br、Q及(Br+Q)组与对照组相比,Bcl-2-IR及XRCC1-IR皆低于C组(P<0.001),而Bax-IR则高于C组(P<0.001);Br组:Q组或Br组:(Br+Q)组(P>0.05)。Bcl-2-IR与XRCC1-IR呈显著正相关,与Bax-IR和Bax-IR与XRCC1皆呈显著负相关。C组的MRP-IR、POLB-IR强于Br组、Q组或(Br+Q)组(P<0.01。)TLC扫描OD值:C组MRP-IR高于Br、Q或(Br+Q)组约3倍;POLB-IR高于Br、Q或(Br+Q)组约2倍;MRP与POLB呈显著正相关r=0.9838(P<0.01)。结论:Br与Q联合用药或单独用药皆可下调Bcl-2,XRCC1,MRP与POLB的表达,上调Bax的表达,提示Br与Q联合用药与单独用药皆可下调Eca-109细胞的增变基因表型。
- 宫璀璀郑乃刚王广兰吴景兰李璇
- 关键词：8-BR-CAMP槲皮素ECA-109细胞
- 人脐带间充质干细胞不同冻存方法探讨被引量：5
- 2012年
- 目的观察不同冻存条件对人脐带间充质干细胞(HUC-MSC)冻存效果的影响。方法将HUC-MSC传代培养增殖后,设立4个因素和3个水平,分为9个实验组,分别观察不同冻存条件下对各组HUC-MSC的存活率、回收率、免疫抗原CD34和CD44的影响。结果第9组HUC-MSC解冻复苏后,其存活率、回收率以及免疫抗原CD44积分值均高于其他组(P<0.01),冻存前后其细胞形态无明显差别,细胞免疫抗原CD34均为阴性。结论以90%血清+10%二甲基亚砜(DMSO)作为冻存液,取106/mL以下浓度的HUC-MSC放入厚壁聚乙烯泡沫盒中,立即封存置-80℃冻存24h,再投入液氮中冻存,为最佳冻存方法。
- 李正民宫璀璀
- 关键词：间质干细胞连续传代细胞培养技术正交试验
- 抗谷胱甘肽还原酶单克隆抗体的研制及鉴定
- 1999年
- 宫璀璀韩玉春胡延基王大明王文丽杨书豪李明胡哲
- 关键词：谷胱甘肽还原酶单克隆抗体
- 26例DVT患者溶栓治疗中血清D-二聚体变化及意义被引量：1
- 2007年
- 赖泽仁宫璀璀李凌
- 关键词：D-二聚体溶栓治疗DVT下肢深静脉血栓形成血清
- 急进高原后外周血单个核细胞内相关易感基因表达与急性高原反应分析
- 2013年
- 目的探讨低氧诱导因子1(HIF-1α)、P38 MAPK和血管内皮生长因子(VEGF)在急进高原后外周血单个核细胞的表达变化,以及其与急性高原反应(AMS)的关系。方法对某部队赴青海省玉树抗震的官兵分别于进入高原前后48 h采集外周血,提取单个核细胞用RT-PCR法检测P38 MAPK及HIF-1αmRNA表达,Western blot法检测HIF-1α及VEGF蛋白表达。按照《急性高原反应的诊断和处理原则》诊断AMS。结果与进入高原前相比,HIF-1αmRNA和蛋白表达水平及P38 MAPK mRNA表达水平均明显增高(P<0.001);VEGF蛋白水平也上调(P<0.01);HIF-1α及VEGF蛋白表达水平与AMS的发病程度高度相关,相关系数分别为0.875和0.675(P<0.001)。结论 HIF-1α、P38 MAPK和VEGF在急进高原48 h后表达水平均显著增加,HIF-1α和VEGF蛋白表达水平与AMS发病呈显著正相关。
- 方盼盼宫璀璀仓宝成李正民李宗杰李文莉朱传杰王迎涛
- 关键词：急性高原反应低氧诱导因子1
- 槲皮素对小鼠体内和体外NIH-3T3细胞的抗氧化作用及其机理被引量：6
- 2009年
- 目的比较槲皮素对小鼠体内和体外H2O2处理前/后的NIH-3T3细胞抗氧化效应的差异并探讨其作用机理。方法将NIH-3T3细胞分为4组,槲皮素前保护组(Qb)、槲皮素后保护组(Qa)、H2O2组(H2O2)和对照组(C)。用试剂盒检测细胞内T-AOC、SOD、GSH-Px、GSH、MDA、NOS和NO2-/NO3-的水平;MTT和TUNEL法检测细胞凋亡率和生存率;免疫印迹和免疫组化技术检测细胞的cyclin D1、PTEN、NF-κB、HSP-70、BCl-2、BAX、及caspase-3的表达。另将20只Wistar大鼠等分为对照组和实验组,检测槲皮素灌胃前、后1、2及24 h血浆内T-AOC、SOD、GSH-Px、GSH、MDA、NOS和NO2-/NO3-的水平。结果H2O2组细胞凋亡率增高,cyclin D1、PTEN及BCl-2的表达下调;BAX、HSP-70、NF-κB及caspase-3的表达上调;T-AOC,SOD,GSH-Px及GSH水平降低,NOS、NO2-/NO3-及MDA增高。动物灌胃后1 h、2 h血浆中T-AOC、SOD、GSH-Px、GSH,NOS及NO2-/NO3-的水平增高,MDA降低;24 h后基本恢复。结论槲皮素在体内外皆可通过调节抗氧化酶体系发挥抗氧化作用,其效应依据H2O2处理与否和处理前/后等细胞的异质性而呈现一定差异。
- 宫璀璀郑乃刚吴景兰何培霞王一菱
- 关键词：槲皮素
- 脂脉宁对香烟提取物诱导血管内皮细胞-304的NF-κB及热休克蛋白-70表达影响
- 2010年
- 目的:观察含脂脉宁血清对香烟提取物(CSE)诱导血管内皮细胞(VEC)-304的核转录因子-κB(NF-κB)及热休克蛋白-70(HSP-70)表达的影响。方法:将VEC-304细胞分为4组:CSE组、实验1组(脂脉宁大剂量)、实验2组(脂脉宁小剂量)及空白对照组。采用免疫组化方法,观察各组VEC-304细胞NF-κB及HSP-70的表达。结果:CSE组细胞NF-κB[(288±25)∶(185±14)]、HSP-70[(370±28)∶(258±20)]的表达均较空白对照组明显升高[P<0.05～0.01],而脂脉宁两组NF-κB[1组(193±17),2组(211±14)]、HSP-70[1组(262±21),2组(282±23)]表达明显低于CSE组[P<0.05～0.01],且1组作用更明显(P<0.05)。细胞DAB显色:CSE组细胞NF-κB蛋白、HSP-70蛋白显色呈棕黄或棕褐色,明显较空白对照组色深;实验1组和2组显色虽较空白对照组为深,但明显较CSE组色浅。结论:香烟提取物可诱导血管内皮细胞核转录因子-κB、热休克蛋白-70表达,脂脉宁则可使其表达下调。
- 刘应柯李合国宫璀璀
- 关键词：内皮细胞热休克蛋白质70NF-ΚB
