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B型流感病毒B/Guangzhou/01/2007株HA基因重组3型腺病毒的构建: 2009年; 目的:构建包含有B型流感病毒B/Guangzhou/01/2007株血凝素(HA)基因的重组3型腺病毒。方法:用PCR方法扩增得到HA基因,酶切后克隆至3型腺病毒穿梭质粒pSK-CMV,构建重组穿梭质粒pSK-CMV-HA,然后在大肠杆菌BJ5183内进行经NotI和EcoRV线性化的pSK-CMV-HA和经RsrⅡ线性化的骨架质粒pBRAdV3△E3的同源重组,AsiSI酶切线性化重组腺病毒质粒pBRAdV3△E3-HA后脂质体法转染HEp-2细胞,进行病毒包装和增殖后得到重组腺病毒rAdV3△E3-HA,并且通过病变观察、扫描电镜、RT-PCR、免疫细胞化学方法对基因组的包装和HA基因的表达进行检测。结果:将HA基因克隆入pSK-CMV获得重组穿梭质粒pSK-CMV-HA,线性化的pSK-CMV-HA与pBRAdV3△E3同源重组后获得pBRAdV3△E3-HA,线性化的pBRAdV3△E3-HA转染HEp-2细胞观察到细胞病变和HA基因的表达。结论:成功构建了带有HA基因的重组腺病毒rAdV3△E3-HA,为B型流感病毒-3型腺病毒二联活苗的研究提供了依据。; 鲁俊鹏田新贵罗满林李海涛周志超周荣; 关键词：B型流感病毒 HA基因重组腺病毒

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周志超