吴莹莹
- 作品数：6 被引量：25H指数：2
- 供职机构：深圳大学生命科学学院过敏反应与免疫学研究所更多>>
- 发文基金：深圳市科技计划项目国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 过敏性哮喘模型脱敏治疗前后小鼠肥大细胞的变化与其细胞因子的检测被引量：9
- 2014年
- 目的:制备粉尘螨粗抗原建立BALB/c小鼠哮喘模型,检测细胞因子并观察肥大细胞形态及脱颗粒的情况。方法:制备粉尘螨粗抗原,30只BALB/c小鼠随机均分为3组,阴性对照组(A组)、哮喘模型组(B组)和治疗组(C组)。A组始终使用PBS处理,B组和C组在第0、7和14天用50μg粉尘螨粗抗原+50μl明矾佐剂腹腔注射致敏。在第28天,A组和B组用PBS、C组用粉尘螨粗抗原(350μg/次)皮下注射免疫1周,隔天免疫1次,末次免疫1周后开始用50μg粉尘螨粗抗原滴鼻激发,每天1次,连续7次。末次激发24 h后进行气道高反应检测。末次激发48 h后处死小鼠取血,对小鼠进行肺泡灌洗收集肺泡灌洗液(BALF),无菌摘取肺组织和脾脏,分别进行肺组织病理切片与脾细胞培养。检测BALF和脾细胞上清中IL-4、IL-10和IFN-γ细胞因子水平,血清中IgE、组胺抗体水平,进行HE染色和甲苯胺蓝染色观察肺部炎症细胞浸润程度和肥大细胞脱颗粒状况。结果:与B组相比,C组气道高反应性和肺部病理症状减轻(P<0.01)。C组BALF中细胞计数结果显示与B组相比细胞总数和嗜酸粒细胞数明显减少(P<0.01)。与B组相比,C组的肥大细胞脱颗粒情况明显减轻,细胞形态稳定。与B组(IgE:1.905)相比,C组血清中抗原特异性IgE抗体水平(IgE:1.278)明显降低(P<0.01)。BALF细胞因子IL-4、IL-10和IFN-γ水平检测结果显示,与B组相比,C组BALF中IL-4水平明显降低接近A组值(P<0.01),而IL-10与A、B两组相比有明显升高(P<0.01),C组的IFN-γ也高于A、B两组(P<0.01)。C组脾细胞上清中IL-4明显低于B组(P<0.01),而IL-10明显高于B组(P<0.01),IFN-γ也明显高于B组(P<0.01)。BALF和血清中组胺水平结果显示,在BALF中,C组与B组相比略低(P<0.05),而在血清中检测出的组胺有明显降低(P<0.05)。结论:过敏性哮喘模型脱敏治疗后小鼠肥大细胞脱颗粒情况被抑制。
- 姚添淇吴莹莹杨小猛匡渤海刘志刚
- 关键词：粉尘螨过敏性哮喘肥大细胞
- 粉尘螨体壁及血体腔超微结构观察被引量：1
- 2014年
- 目的本研究主要使用透射电镜观察粉尘螨(Dermatophagoides farinae)体壁及血体腔超微结构。方法取成年粉尘螨20只,先后用2.5%戊二醛及1%锇酸行前后固定,经脱水、包埋、超薄切片、正染色后行透射电镜观察。结果粉尘螨的表皮由上表皮和前表皮构成,其中上表皮进一步分为表皮质层、蜡层和黏质层,前表皮可分为内表皮和外表皮。前表皮结构分层明显,其内可见许多孔道和薄片。粉尘螨血体腔由体壁围绕而成,各组织器官浸浴在血淋巴中,血淋巴内可见大量线粒体、液泡、糖原颗粒以及少量细菌、吞噬细胞等。结论粉尘螨体壁及血体腔超微结构的观察为其形态学研究提供更全面的实验依据。
- 王月明吴琳吴莹莹李盟杨利桃黄礼年孙新刘志刚
- 关键词：粉尘螨体壁超微结构
- 过敏性哮喘模型小鼠肥大细胞的活化及细胞因子的变化被引量：2
- 2014年
- 目的观察粉尘螨粗抗原建立的Bal b/c哮喘模型小鼠肥大细胞的活化及细胞因子的变化。方法将20只Bal b/c小鼠按随机数字表法分为2组:阴性对照组(A组,n=10),使用100μL PBS处理;哮喘模型组(B组,n=10),50μg粉尘螨粗抗原+50μL明矾佐剂分别在第0、7和14d腹腔注射致敏1次,第28天再用50μg粉尘螨抗原滴鼻激发,每天1次,连续7次。末次激发24h测定气道高反应;48h处死小鼠进行眼球取血,进行肺泡灌洗并收集右肺的肺泡灌洗液(BALF),无菌取肺HE染色病理观察、甲苯胺蓝染色观察肥大细胞脱颗粒,制取脾细胞及粉尘螨粗抗原刺激培养。采用ELISA法测定BALF和脾细胞培养上清IL-4、IL-10和IFN-γ以及血清IgE、组胺抗体含量。结果与A组相比:B组气道高反应性和肺部病理显著加重(P<0.01);BALF细胞总数和嗜酸粒细胞数显著增多(P<0.01);肥大细胞脱颗粒现象显著加重;血清抗原特异性IgE水平显著升高(P<0.01);BALF和脾细胞培养上清IL-4和IL-10水平显著升高(P<0.05或P<0.01),IFN-γ水平显著降低(P<0.01);BALF和血清组胺水平显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论过敏性哮喘模型中肥大细胞被活化。
- 姚添淇吴莹莹杨小猛匡渤海刘志刚
- 关键词：粉尘螨过敏性哮喘肥大细胞小鼠
- 空气净化器处理后牛乳β乳球蛋白的免疫反应性研究
- 2013年
- 目的通过检测牛乳β乳球蛋白免疫反应性,分析其空间结构的变化,以探讨过敏原免疫反应性下降的可能机制。方法分别取牛乳β乳球蛋白置于空气净化器(接受1、12、24h的作用,实验组)、与实验组相同温度和湿度的环境(12、24h后取样,对照组)、4℃冰箱(正常组)中。用ELISA法检测牛乳β乳球蛋白免疫反应性,采用圆二色谱仪和荧光光谱仪检测空气净化器处理前后的牛乳β乳球蛋白,分析牛乳β乳球蛋白空间结构的变化。结果实验组(作用24h)的光密度值接近0.88,相对于正常组的光密度值1.27和对照组的光密度值1.25,降低了约30%。牛乳β-乳球蛋白在空气净化器作用前后,正常组和对照组的圆二色谱光谱曲线没有发生明显的变化,而实验组处理12h和处理24h负峰值与正常组相比有明显的升高,并且呈现一定的递增趋势。实验组在280nm和295nm处的荧光强度明显强于正常组和对照组,且随着处理时间的增加强度越强。结论经过空气净化器处理之后的牛乳β乳球蛋白免疫反应性有所降低,圆二色谱光谱实验和荧光光谱实验结果表明其空间结构发生了变化,空间结构变化可能是使其免疫反应性改变的原因。
- 吴莹莹刘晓宇马忠校王媛媛冉丕鑫刘志刚
- 关键词：空气净化器免疫反应性空间结构
- 空气净化器降低室内尘螨过敏原含量及其免疫反应性的实验研究被引量：11
- 2013年
- 目的检测开启空气净化器前后室内空气中粉尘螨主要过敏原的含量,探讨粉尘螨经空气净化器不同作用时间后对其抗原免疫反应性的影响。方法实验分组采样:(1)不开空调和空气净化器;(2)开空调、不开空气净化器;(3)同时开空调和空气净化器;(4)开空气净化器、不开空调。用粉尘采样器分别采集室内空气中尘螨过敏原Der f1和Der f2,运用ELISA方法检测4种环境条件下空气中Der f1、Der f2的含量;通过ELISA和免疫印迹方法检测空气净化器作用不同时间(24h、48h和72h)后粉尘螨过敏原免疫反应性的变化。结果 20个取样房间在开空调之后室内尘螨过敏原的含量都会增高,而在使用空气净化器后,不管是在空调开启或者关闭的情况下室内空气中Der f1和Der f2都会降低(P<0.01);粉尘螨在空气净化器等离子和静电高压场强作用下,死亡的粉尘螨其免疫反应性均较活螨显著降低(P<0.01),免疫组化显示其免疫反应性有所降低。结论本实验使用空气净化器能够显著降低室内空气中的尘螨过敏原Der f1、Der f2的浓度,并且通过空气净化器作用后,死亡的粉尘螨免疫反应性显著降低,提示使用空气净化器对过敏性疾病(如哮喘和过敏性鼻炎)具有重要的预防和干预作用。
- 马忠校刘晓宇杨小猛王媛媛吴莹莹刘志刚
- 关键词：粉尘螨空气净化器免疫反应性
- 粉尘螨第十六类变应原的克隆表达、纯化及免疫原性鉴定被引量：2
- 2013年
- 目的获得大量具有良好IgE结合活性的粉尘螨第十六类变应原(Der f16)的重组变应原,以促进粉尘螨变态反应性疾病的特异性诊断及治疗的研究。方法挑取经纯培养的粉尘螨,提取总RNA,根据已知Der f16基因序列设计引物,经RT-PCR扩增Der f16基因片段,产物连入pMD32-T载体中。扩增后,利用限制性内切酶EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切将目的基因片段连接到pET32a表达载体上,转化到大肠杆菌(E.coli BL21)中经IPTG诱导表达。表达载体经亲和层析纯化,SDS-PAGE检测蛋白纯度,Western bolt检测变应原免疫学活性。结果以粉尘螨总RNA为模板成功克隆出Der f16基因,与数据库中Der f16基因同源性为100%;经IPTG诱导后,大肠杆菌大量表达Der f16蛋白,所获得的重组蛋白分子质量为73ku,上清及沉淀物均有蛋白表达,且上清表达量高于沉淀物。重组Der f16能够与螨过敏患者血清中的IgE反应,而不与健康者血清中的IgE反应。结论成功构建了Der f16的原核表达载体,并高效表达和纯化出具有免疫原性的Der f16重组蛋白。
- 李维中王月明吴莹莹邬玉兰刘志刚
- 关键词：粉尘螨克隆纯化
