吴丹
- 作品数：46 被引量：159H指数：8
- 供职机构：江南大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：国家杰出青年科学基金国家自然科学基金食品科学与技术国家重点实验室科研基金更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程生物学化学工程文化科学更多>>
- 异淀粉酶在α-环糊精制备中的应用及条件优化被引量：3
- 2015年
- 环糊精具有外侧亲水内部空腔疏水的桶形结构,可与众多的各类大小、形状合适的疏水性客体分子形成包合物,改变其理化性质。其中,α-环糊精(α-CD)具有较小的空腔、溶解性好及耐酸解,因此在很多领域具有特殊的应用。目前,单独采用环糊精葡萄糖基转移酶(α-CGTase)生产α-CD的底物利用率低,而已开发的双酶法不仅底物成本高,而且环糊精总转化率及α-CD比例也有待提高。因此,为了提高α-CD的得率,降低生产成本,本研究将α-CGTase与异淀粉酶复配,以木薯淀粉为底物,对酶转化条件进行了优化。结果表明,当底物浓度15%,液化时间10 min,温度40℃,反应p H 5.5,异淀粉酶加量144 U/g底物,α-CGTase加量15 U/g底物,正癸醇浓度5%(v/v),转化周期18 h,环糊精总转化率为90.5%,α-CD所占比例为96.3%,α-CD的转化率为国内外报道的最高水平。
- 冉红艳段绪果吴敬吴丹
- 关键词：Α-环糊精木薯淀粉Α-环糊精葡萄糖基转移酶异淀粉酶酶转化
- 化学添加剂提高重组α-环糊精葡萄糖基转移酶酶制剂稳定性被引量：4
- 2011年
- 通过向重组α-环糊精葡萄糖基转移酶(α-CGT酶)液中添加化学添加剂以提高其热稳定性及贮存稳定性。在不同温度下研究了添加剂对酶液的贮存稳定性影响,并用圆二色谱(CD)研究了CGT酶在近紫外区和远紫外区蛋白质结构与热稳定性的变化关系。当单独加入各种添加剂在50℃水浴1 h和室温放置108 d后,发现含有20%甘油的酶液稳定性最好,与未加任何添加剂的对照酶液相比仍有91%和50%的酶活,对照酶液在50℃水浴1 h后仅有小于10%的活性,室温放置108 d后已经没有酶活。明胶、CaCl2和PEG400也有一定的保护效果。将4种保护剂分别以最佳浓度组合叠加添加到CGT酶发酵液中40℃贮存45 d,CGT酶的残酶活几乎不变,维持在100%左右。通过变温圆二色光谱分析α-CGT酶α-螺旋和β-折叠变化,发现了保护剂可以明显降低高温条件下酶的变性程度,有利于维持其二级结构及天然三维构象,使酶在高温时保持较高的酶活。化学添加剂可以明显提高α-CGT酶酶制剂的稳定性,为CGT酶的工业化应用提供稳定剂复配的方法,同时蛋白质的变温圆二色谱分析也为其他蛋白酶热稳定性研究提供了理论依据。
- 郑贤良吴丹李兆丰陈坚吴敬
- 关键词：Α-环糊精葡萄糖基转移酶化学添加剂热稳定性圆二色光谱
- 高效液相分子排阻色谱法分析重组人复合α干扰素稳定性
- 2011年
- 采用高效液相分子排阻色谱法(HPLC-SEC)分析不同温度、振荡时间和pH条件下缓冲液中重组人复合α干扰素(cIFN)单体降解和聚合程度,以研究cIFN的体外稳定性。分析表明,振荡会引起cIFN同时发生严重的降解和聚合,在振荡15 min后,聚合体质量分数23.8%,降解产物质量分数29.6%。温度和pH会引发严重降解和部分聚合,40°C下放置66 h会产生质量分数16.3%的聚合体和质量分数49.3%的降解产物;在pH 9放置66 h后会产生质量分数11.5%聚合体和质量分数37.7%的降解产物。研究显示HPLC-SEC方法能对不同环境条件下cIFN单体所发生的聚合和降解变化进行精确定量分析。不同环境下cIFN单体容易产生聚合体和降解产物表明:cIFN稳定性较差,蛋白质单体之间作用形式容易受到环境因素影响而发生改变。
- 吴丹
- 关键词：降解产物
- 毕赤酵母Pichia pastoris表达人复合α干扰素突变体不稳定性（降解和聚合）机理研究
- 重组人复合α干扰素突变体R164S(Consensus interferon-α mutant，cIFN)是将复合α干扰素164位精氨酸突变成丝氨酸后得到的，主要是考虑防止被蛋白酶降解。 课题组前期研究发现在发酵...
- 吴丹
- 关键词：毕赤酵母发酵条件优化
- 利用游离型表达质粒强化毕赤酵母表达木聚糖酶被引量：5
- 2018年
- 巴斯德毕赤酵母是用途广泛的蛋白表达系统。目前用于毕赤酵母的质粒主要以整合型质粒为主,很少见到游离的质粒用于外源基因的表达。文中通过将来源于酵母自身的自主复制序列连接到酵母整合型表达载体pGAP中构成自主复制的游离型表达载体pGAPZαA-PARS,将该载体用于表达木聚糖酶基因。转化毕赤酵母后同传统的整合型表达菌株相比,以甘油为碳源时最高酶活达到343 U/mL,比整合型表达提高了45.9%。同时游离载体表达重组酶比活相对整合表达提高了81.2%。为了节约发酵成本,进一步研究了分别以甘油、葡萄糖、蔗糖、混合碳源(蔗糖︰甘油=1︰2)等不同碳源下游离型重组菌株的表达水平。发现甘油表达水平最高,蔗糖最低,但是以工业葡萄糖为碳源时产酶成本最低。由于pGAP载体不需要以甲醇为碳源,因而文中所构建的游离载体pGAPZαA-PARS极大促进了毕赤酵母在食品行业中的应用。同时,游离型载体可大幅度提高表达水平,为进一步研究提高GAP启动子的高效表达奠定了基础。
- 潘阳吴丹吴敬
- 关键词：毕赤酵母木聚糖酶GAP启动子蛋白质表达
- MTSase和MTHase在Brevibacillus brevis中的克隆表达及应用研究被引量：3
- 2018年
- 为实现将来源于嗜酸热硫化叶菌(Sulfolobus acidocaldarius)ATCC 33909的麦芽寡糖基海藻糖合成酶(MTSase)和麦芽寡糖基海藻糖水解酶(MTHase)在短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)中的重组表达,分别以重组质粒pET-24a(+)-treY和pET-24a(+)-treZ为模板PCR扩增得到MTSase和MTHase基因片段,通过与表达载体pSVN连接得到重组质粒,电转化表达宿主Brevibacillus brevis,成功构建重组菌Brevibacillus brevis/pSVN-treY和Brevibacillus brevis/p SVN-treZ。重组菌在TM培养基中发酵48 h,胞内酶活力分别达到MTSase 630.0 U/g(wet cell)、MTHase 170.0 U/g(wet cell)。对重组MTSase和MTHase进行酶转化实验,结果表明,当以质量浓度为100 g/L马铃薯淀粉为底物,酶转化温度为60℃,pH为5.5,加酶量为MTSase 80 U/g淀粉、MTHase 20 U/g淀粉,普鲁兰酶5 U/g淀粉和环糊精葡萄糖基转移酶(CGTase)15 U/g淀粉,反应48 h,海藻糖转化率达到80.2%。
- 吴世雄宿玲恰姚锴琳吴敬吴丹
- 关键词：酶活力
- 共表达N-乙酰转移酶和磷脂酶重组菌的构建及发酵优化被引量：2
- 2018年
- 为了提高磷脂酶在毕赤酵母中的表达量,构建了N-乙酰转移酶(Mpr1)和磷脂酶共表达的重组毕赤酵母。Mpr1是一类能催化乙酰基团在乙酰辅酶A和胺之间转移的胞内酶,能够降低酵母细胞内的ROS水平,具有抗活性氧(ROS)氧化胁迫生理功能。来源于尖孢镰刀菌的磷脂酶(phospholipase)是一类可以将磷脂水解为小分子脂肪酸、甘二酯和磷酸胆碱的胞外酶。研究了Mpr1对重组菌的生长和磷脂酶表达量的影响。为了获得在3.6 L发酵罐中表达磷脂酶的最佳发酵条件,分别从诱导温度、起始诱导菌体浓度和甲醇诱导浓度3个方面研究了重组菌的高密度发酵,以恒溶氧反馈调节补加甘油和甲醇流加仪在线监测流加甲醇。结果表明:当诱导温度、起始诱导菌体质量浓度和甲醇诱导体积分数分别为28℃,40 g/L和1.0%,诱导120 h后磷脂酶活达到最高,为8 100 U/mL,总蛋白含量为8.3 mg/mL,为前期工作中磷脂酶单独表达时的1.33倍。
- 吉得宁宿玲恰吴敬吴丹
- 关键词：尖孢镰刀菌磷脂酶高密度发酵
- 新型功能糖的酶法制备
- 随着经济的快速发展以及物质生活水平的不断提高,具有营养功能、感觉功能和调节生理活动功能的功能食品正逐步走进千家万户的一日三餐,是健康产业发展的新趋势。在功能食品中功能糖是重要的组成部分。功能糖是功能性低聚糖、功能性膳食纤...
- 吴敬吴丹陈晟宿玲恰
- 关键词：功能糖酶法制备
- 文献传递
- 化工项目管理中的质量控制体系建设——以吉化乙丙橡胶工程为例
- 进入21世纪以来，随着我国经济的高速发展，人民生活水平日益提高，汽车产业、橡胶制品、润滑油领域等各个行业都得到了迅猛的发展，乙丙橡胶产品的市场需求越来越大。化工装置追求连续化平稳生产和效益最大化，化工产品具有易燃易爆和有...
- 吴丹
- 关键词：乙丙橡胶
- 二硫键对毕赤酵母表达重组人复合α干扰素的降解与聚合影响
- 2009年
- 毕赤酵母(Pichia pastoris)表达重组人复合α干扰素(cIFN)时会形成cIFN分子内二硫键异构体,cIFN发生强烈的降解、聚合等不均一表达现象。体外试验证实了cIFN的3种二硫键异构体,研究了形成不同二硫键异构体的条件和各自的稳定性,包括降解与聚合。当cIFN分子内部二硫键破裂时会对其稳定性造成致命影响,从而使cIFN更容易遭到发酵液中蛋白酶降解和聚合。
- 马动吴丹郝玉有储炬王永红庄英萍张嗣良
- 关键词：二硫键降解
