刘立新
- 作品数：24 被引量：45H指数：4
- 供职机构：北京市农林科学院畜牧兽医研究所更多>>
- 发文基金：北京市农林科学院青年基金北京市农林科学院科技创新能力建设专项北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 鸡腺病毒4型北京毒株的分离鉴定
- 刘立新吴烨挺杨志远林健赵际成王小蕾段会娟齐志涛王凤龙丁玉林刘月焕
- 鸡马立克氏病CVI988冷冻活疫苗
- 周蛟李汉秋林健周煜王菁赵蕾张培君宋维平张建伟李秋菊管艺王强苏凤林彭湃叶如俊刘立新
- 应用细胞工程原理和方法研制成功了具有我国自主知识产权的鸡马立克氏病CVI988/Rispens冷冻活疫苗生产工艺技术，并进行产业化生产和示范推广。本疫苗适用于1日龄雏鸡免疫接种，可有效预防鸡马立克氏病。通过种毒繁殖建立种...
- 关键词：
- 关键词：鸡马立克氏病活疫苗
- 一株H3N8亚型马流感病毒的鉴定及HA基因序列分析被引量：3
- 2018年
- 2016年4月北京某马场出现马流感疑似疫情,为确诊病原,从发病马群中采集鼻拭子接种鸡胚分离病毒,并进行血凝试验和血凝抑制试验、基因测序和BLAST比对分析。结果表明,从鼻拭子中分离到1株马流感病毒,命名为A/equine/Beijing/2016。血凝试验、血凝抑制试验及测序结果表明,该分离株为H3N8亚型。对分离株的HA基因进行遗传进化分析,表明该分离株属于H3N8亚型美洲谱系的佛罗里达Ⅱ群。对该分离株及国内近年来的马流感病毒分离株的HA氨基酸序列进行分析,发现该分离株相比于OIE推荐的疫苗候选株出现了一个重要的抗原漂移。马流感病毒HA基因的不断变异,提示有必要加强对国内马流感病毒的流行病学监测。
- 王小蕾段会娟杨志远刘立新赵际成潘洁刘月焕林健
- 关键词：HA基因
- 鸭坦布苏病毒病卵巢病变标准的判定被引量：4
- 2016年
- 【目的】了解产蛋鸭感染鸭坦布苏病毒后卵巢病变产生的进程和卵巢病变规律,为采用产蛋鸭卵巢病理变化检查法进行疫苗效力检验提供依据。【方法】70只260日龄产蛋樱桃谷鸭,以0.5m L/只(含100DID50)的剂量经胸部肌肉接种鸭坦布苏病毒(HB株)强毒。观察试验鸭的临床症状,统计每日产蛋数和采食量。攻毒后2 d,每只鸭经翅静脉采血,分离血清,经卵黄囊途径接种5枚6日龄SPF鸡胚,每胚0.1m L。接种后置37℃条件下继续孵化,24 h死亡鸡胚弃去。采用RT-PCR方法测定24—72 h死亡鸡胚的DTMUV核酸,将1/5或以上鸡胚死亡且DTMUV核酸阳性的鸭判为DTMUV感染鸭。攻毒后4—10 d,每日剖杀10只鸭,观察和分析生殖系统病变。统计病变率,检查输卵管内是否有蛋,卵泡是否变形、出血和破裂,依据病变率和病变,确定检查内容和病变卵巢的判定时间和标准。【结果】(1)攻毒后3、4、5、6 d,鸭几乎不采食,产蛋数明显下降。攻毒后7 d,鸭精神状况好转;攻毒后8 d,采食量开始回升。(2)70只鸭中,除1只鸭的病毒分离结果为阴性外,其余69只鸭的病毒分离结果均为阳性,病毒分离阳性率为98.6%(69/70)。(3)攻毒后4—10 d,共64只产蛋期鸭的生殖器官可以判定。(4)攻毒后4、5、6、7、8、9和10 d,卵巢病变率分别为66.7%(6/9)、100%(10/10)、100%(10/10)、100%(9/9)、100%(9/9)、100%(9/9)和100%(8/8)。(5)除攻毒后4 d有2只鸭输卵管中有蛋外,其余62只鸭输卵管中均无蛋,无蛋率为96.9%(62/64)。(6)攻毒后4—10 d,96.9%(62/64)鸭的卵泡变形,96.9%(62/64)鸭的卵泡出血,95.3%(61/64)鸭的卵泡变形和出血,34.4%(22/64)卵泡破裂。【结论】(1)确定卵巢病理变化检查时间为攻毒后7—8 d;(2)具有变形或出血病变之一,判病变卵泡。输卵管内无蛋且有3个及以上病变卵泡,判为病变卵巢。
- 林健杨志远何平有段会娟邹立宏杨保收赵际成潘洁王小蕾刘立新刘月焕
- 关键词：卵巢病理变化
- 禽腺病毒4型人工感染SPF鸡动态病理学观察被引量：4
- 2018年
- 为了深入研究禽腺病毒4型的致病机理,以34日龄SPF鸡人工感染禽腺病毒4型建立了禽腺病毒感染病理模型,并在感染后第1~10天剖杀试验鸡,采集胸腺、心、肝、腺胃、脾、肾,采用常规病理学方法和免疫组织化学方法研究其在感染SPF鸡体内的动态病理变化规律。结果表明,34日龄SPF鸡经口服途径感染禽腺病毒4型,成功建立了人工感染动物模型。感染后第3天鸡出现临床症状,第4~6天为死亡高峰期,第7天后病鸡开始恢复,发病率75%,死亡率67.8%。攻毒后第5天病鸡肝脏病变最重,病变肝细胞内可见嗜碱性、嗜酸性的包涵体,免疫组织化学染色可见攻毒后第5天鸡的肝细胞、脾脏网状细胞和肾小管上皮细胞中出现棕黄色阳性颗粒。
- 吴烨挺杨志远林健赵际成王小蕾段会娟齐志涛潘洁刘月焕刘立新
- 关键词：动态病理学
- 鸭坦布苏病毒病灭活疫苗(HB株)母源抗体的消长规律被引量：6
- 2016年
- 【目的】评价鸭坦布苏病毒病灭活疫苗母源抗体的效力,制定疫苗的最小免疫日龄。【方法】随机采集鸭坦布苏病毒病灭活疫苗(HB株)二免后135日樱桃谷种鸭的种蛋孵化,随机取5、7、10和15日龄免疫种鸭后裔雏鸭10只和相对应日龄非免疫种鸭后裔雏鸭5只,采血,分离血清,测定母源抗体,并以0.1m L/羽(含100DID_(50))的剂量经腿部肌肉攻毒。观察雏鸭攻毒后的临床表现(采食量、粪便、精神和死亡情况),观察至攻毒后10d。攻毒后2d经颈静脉采血,分离血清进行病毒分离。每份血清接种5枚6日龄SPF鸡胚,0.1m L/枚,37℃孵化,24h以内死亡鸡胚视为非特异死亡,孵化至168h。只要有1枚及以上鸡胚死亡则判该鸭感染。计算母源抗体雏鸭组的攻毒保护率和无母源抗体组的发病率。攻毒后5d,分别称量雏鸭的体重,计算平均日增重。对成对样本进行T检验,分析母源抗体对雏鸭增重的影响。通过试验鸭中和抗体、增重变化和病毒分离的方法评价母源抗体的效力。【结果】(1)1日龄雏鸭的母源抗体阳性率最高,1、5、7、10和15日龄雏鸭的母源抗体阳性率分别为56.1%(37/66)、40%(4/10)、50%(5/10)、30%(3/10)和0%(0/10),5—7日龄抗体阳性率处于平台期,15日龄时母源抗体降低至全阴性;(2)攻毒后对照鸭表现精神沉郁(20/20)、仰翻和侧翻等神经症状(6/20)及死亡(2/20),有母源抗体的雏鸭临床症状明显轻于对照组。(3)5、7、10和15日龄免疫种蛋孵化雏鸭攻毒后5d平均增重115.5、142.8、177.8和162.2g。5、7、10和15日龄非免疫种蛋孵化雏鸭攻毒后5d平均增重54.5、91.0、165.0和118.8g。(4)5、7、10和15日龄免疫种蛋孵化雏鸭的攻毒保护率分别为50%(5/10)、60%(6/10)、20%(2/10)和0%(0/10);5、7、10和15日龄非免疫种蛋孵化雏鸭的发病率均为100%。(5)5和7日龄雏鸭平均增重和攻毒保护率最高,分别为50%(5/10)和60%(6/10),10和15日龄雏鸭的母源抗体尽管�
- 韩春华赵际成段会娟林健杨志远谢佳潘洁王小蕾刘立新刘月焕
- 关键词：母源抗体
- 两种佐剂在H9N2亚型禽流感灭活疫苗中的效果比较被引量：2
- 2020年
- 为提高H9N2亚型禽流感灭活疫苗的免疫效力,拟从Carbigen和Marcol-52两种佐剂中选择一种适合的疫苗佐剂。利用两种佐剂分别制备H9N2亚型禽流感灭活疫苗,通过SPF鸡免疫后7、14、21、24 d的抗体水平、黏膜系统SIgA含量及攻毒保护率三个方面,对Carbigen和Marcol-52佐剂进行探讨。结果显示,Carbigen佐剂和Marcol-52佐剂疫苗均可以刺激机体产生呼吸道黏膜SIgA和血清抗体。在免疫后第7天至第21天,Carbigen佐剂疫苗组血清抗体水平均高于Marcol-52佐剂疫苗组;Carbigen佐剂疫苗组SIgA产生早于Marcol-52,在第14天Carbigen佐剂疫苗组SIgA含量明显高于Marcol-52佐剂疫苗组(P<0.05),产生SIgA主要部位位于气管叉和肺脏;Carbigen佐剂疫苗组攻毒后的保护率高于Marcol-52佐剂疫苗组。Carbigen佐剂配置的疫苗可刺激接种动物快速产生免疫应答反应,其效果优于Marcol-52佐剂,有望成为H9N2灭活疫苗的候选佐剂。
- 齐志涛程慧敏杨志远林健王小蕾刘立新赵际成潘洁段会娟
- 关键词：禽流感H9N2灭活疫苗SIGA
- 鸽副黏病毒灭活疫苗候选株aYQ的生物学特性研究被引量：2
- 2019年
- 评价鸽副黏病毒(PPMV)致弱毒株aYQ的生物学特性,为研制鸽副黏病毒灭活疫苗奠定基础。将PPMV aYQ株经SPF鸡胚连续传代,建立种子批。测定各代次毒种的血凝效价(HA)和鸡胚半数感染量(EID50),并进行纯净性检验;测定毒种鸡胚最小致死量的平均死亡时间(MDT)、1日龄鸡脑内接种致病指数(ICPI)和6周龄鸡静脉接种致病指数(IVPI);测定毒种对鸡胚和鸽的毒力、遗传稳定性和抗原相关性。PPMV aYQ株经SPF鸡胚传代至F10,HA效价为1∶256～1∶512,病毒含量为10-8.5 EID50/0.1mL～10-8.9 EID50/0.1mL,毒种各代次均无细菌、霉菌、支原体以及外源病毒污染;PPMV aYQ株的ICPI和IVPI结果均为0,MDT测定结果大于120h;以103倍稀释的PPMV aYQ株病毒液接种10日龄SPF鸡胚96h无死亡,无眼观病变。以106EID50/羽的剂量人工感染鸽,未见异常症状;PPMV aYQ株各代次F基因均未发生基因突变,F蛋白裂解位点氨基酸序列均为-112GRQGRL 117-;交叉血凝抑制试验和交叉中和试验结果表明,PPMV aYQ株与NDV La Sota株间存在明显的抗原性差异。鸽副黏病毒弱毒株aYQ能够在SPF鸡胚上稳定传代,且生物学特性稳定,免疫原性良好,可以作为鸽源副黏病毒灭活疫苗的毒种。
- 赵文奇杨志远林健陈光华杨龙峰赵际成段会娟丁国杰马会籽王小蕾刘立新田方杰潘洁程水生孙晔蒋桃珍刘月焕
- 关键词：疫苗毒种生物学特性
- 一株H3N2亚型犬流感病毒的分离鉴定被引量：1
- 2020年
- 从北京市延庆区某疑似发生犬流感的德国牧羊犬采集犬鼻拭子,采用鸡胚接种、传代、HI试验、HA和NA基因扩增和序列同源性分析及比格犬回归试验等方法对病毒进行分离鉴定。结果表明,分离的病毒具有HA活性,且HA活性可被H3亚型禽流感病毒阳性血清所抑制(HI抗体效价为1∶160),与H1、H5、H7亚型禽流感病毒阳性血清和犬流感阴性血清HI试验均为阴性反应(HI抗体效价<1∶10)。分离病毒HA基因、NA基因与A/canine/Georgia/89750.1/2017(H3N2)毒株HA、NA基因的同源性均为99.8%。攻毒后第4天开始,2只犬均出现体温升高、咳嗽、流鼻和精神沉郁等临床症状,并从鼻拭子中分离到病毒,该病毒是一株H3N2亚型的犬流感病毒,将其命名为A/canine/China/Huabei-170607/2017(H3N2)。
- 郑祥茹林健杨志远刘立新程慧敏黄程王小蕾潘洁段会娟赵际成刘月焕
- 关键词：H3N2亚型流感病毒
- H3亚型犬流感病毒的荧光定量PCR方法建立及其增殖特性研究
- 2022年
- 旨在建立H3亚型犬流感病毒(canine influenza virus, CIV)荧光定量PCR方法,利用该方法对病毒在犬肾细胞(MDCK细胞)上增殖特性进行研究。根据CIV的血凝素(HA)片段上的HA2基因保守区设计并合成特异性引物,构建CIV-HA重组质粒作为标准品,经过条件优化,建立H3亚型CIV荧光定量检测方法,对其敏感性、特异性和重复性进行评价,并将该方法应用于CIV在MDCK细胞上增殖特性的研究,与病毒滴度(TCID;)进行相关性分析。结果显示:该方法具有较好的敏感性、特异性和重复性,最低检测线可以达到20.8 copies/μL,与犬瘟热病毒、犬细小病毒、犬副流感病毒、犬腺病毒2型、H1亚型流感病毒不发生交叉反应,批间、批内重复性良好(变异系数<1.1%)。将该方法应用于检测CIV在MDCK细胞上的增殖特性,与细胞培养法测定病毒滴度相比,二者具有较好的相关性。本研究初步建立了H3亚型CIV荧光定量检测方法,该方法可为CIV的增殖特性研究提供工具。
- 程慧敏黄程林健王小蕾杨志远段会娟赵际成潘洁刘月焕刘立新
- 关键词：H3亚型荧光定量PCR染料法
