刘秉春
- 作品数：6 被引量：25H指数：3
- 供职机构：内蒙古大学更多>>
- 发文基金：内蒙古自治区自然科学基金国家自然科学基金国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 金黄色葡萄球菌诱导牛原代乳腺上皮细胞的凋亡被引量：8
- 2013年
- 【目的】观察金黄色葡萄球菌能否诱导牛原代乳腺上皮细胞发生凋亡。【方法】先以新鲜牛奶为材料分离培养牛乳腺上皮细胞并鉴定,然后用金黄色葡萄球菌侵染牛乳腺上皮细胞,采用普通光镜和扫描电子显微镜观察金黄色葡萄球菌诱导牛乳腺上皮细胞凋亡的形态学变化;用流式细胞仪(Annexin V/PI双染法)定量检测金黄色葡萄球菌感染对牛乳腺上皮细胞凋亡的诱导作用;RT-PCR检测细胞凋亡通路中关键蛋白caspase 3和caspase 8的变化情况。【结果】从乳汁中分离的细胞经原代培养后,细胞呈典型的铺路石状,细胞表层可产生大小不等的乳滴,RT-PCR法扩增出乳腺上皮细胞的骨架蛋白8特异性条带;免疫荧光细胞染色法结果显示分离培养的牛乳腺上皮细胞表达角蛋白8;金黄色葡萄球菌感染牛乳腺上皮细胞3 h后,可诱导牛乳腺上皮细胞发生凋亡,表现为细胞核皱缩,染色质边缘化和细胞浆内空泡增多等典型凋亡特征;Annexin V/PI双染法检测后发现,与对照组相比,感染组细胞凋亡率明显升高,差异极显著(P﹤0.01);与对照组相比,感染组细胞caspase3及caspase 8表达量明显增高。【结论】金黄色葡萄球菌可以诱导牛原代乳腺上皮细胞凋亡,具有细胞凋亡的典型形态特征和生化特性,凋亡通路可能涉及caspase 3和caspase 8参与的外源性凋亡途径。
- 崔新洁胡庆亮李奕平陶琳修磊刘秉春陈媛王潇
- 关键词：金黄色葡萄球菌牛乳腺上皮细胞细胞凋亡
- 核酸疫苗初免-蛋白疫苗加强的免疫策略提高日本血吸虫核酸疫苗免疫效果被引量：10
- 2013年
- 为研制抗血吸虫疫苗提供实验依据,探讨了抗血吸虫SjGST-32核酸疫苗与蛋白疫苗联合免疫的免疫增强效应及免疫应答特征。将日本血吸虫DNA疫苗VR1012-SjGST-32与重组蛋白疫苗rSjGST-32分别在第0、2和4周免疫小鼠,在第6周攻击感染日本血吸虫尾蚴,攻击感染45 d后剖杀小鼠,计算减虫率、检卵率以及检测肝脏病理变化,观察免疫保护效果;检测小鼠血清中特异性IgG抗体滴度,T细胞增殖反应和抗原特异性CD4+IFN-γ+、CD4+IL-4+和CD4+IL-10+的数量,探讨免疫应答特征。结果显示,DNA初免-蛋白加强的联合免疫组的保护作用优于单独免疫组,显著提高了减虫率(42.3%)和减卵率(59.6%),并且能够显著减轻血吸虫虫卵对肝脏的病理损害;进一步发现,DNA疫苗和蛋白疫苗联合应用增强了机体T淋巴细胞增殖反应、抗体IgG滴度以及抗原特异性CD4+IFN-γ+的产生。这些研究为新型血吸虫疫苗的优化设计和合理应用提供了依据。
- 刘秉春崔新洁罗新松王潇
- 关键词：核酸疫苗蛋白疫苗血吸虫免疫效果
- Th17/IL-17在金黄色葡萄球菌小鼠乳腺感染模型中的动态变化及功能初探
- 金黄色葡萄球菌乳腺炎发病机制复杂，深入了解乳腺对金黄色葡萄球菌感染的免疫应答机制，是预防和控制金黄色葡萄球菌乳腺炎发生的关键。Th17细胞亚群及其分泌的主要细胞因子IL-17在胞外细菌感染和介导慢性炎症中发挥重要作用。尤...
- 刘秉春
- 关键词：金黄色葡萄球菌乳腺炎发病机制TH17细胞
- 文献传递
- 小分子化合物CHIR-99021与白血病抑制因子诱导和维持人脊髓样神经干细胞
- 神经干细胞(neural stem cells,NSCs)因其组织修复及跨越血脑屏障的能力被认为在神经系统疾病的治疗中有重要价值,并成为再生医学和干细胞领域研究的热点。在机体内不同区域干细胞巢的NSCs有各自区域特异性的...
- 刘秉春
- 关键词：LIF神经干细胞WNT信号通路
- 文献传递
- 牛奶中乳腺上皮细胞的分离培养及鉴定被引量：7
- 2013年
- 旨在建立简便、经济、纯净的牛乳腺上皮细胞的体外培养方法,并对所培养细胞进行鉴定。以新鲜牛奶为材料,离心收集细胞进行原代培养并传代,通过测定生长曲线、乳腺上皮细胞骨架蛋白-角蛋白8和18、β-酪蛋白、核型等对所培养细胞进行鉴定,以确定其为乳腺上皮细胞。离心收集到的细胞原代培养3 d后形成多个单克隆,细胞呈典型的铺路石状,同时伴随少量的吞噬细胞,继续培养至单克隆汇合时,细胞表层产生大小不等的乳滴,吞噬细胞大多转移到乳滴中,传代后,得到纯净的乳腺上皮细胞,吞噬细胞随传代而消失;细胞生长曲线呈"S"型,RT-PCR法扩增到了乳腺上皮细胞的骨架蛋白8、18以及β-酪蛋白,细胞免疫组化检测到了细胞角蛋白8,核型为29对端着丝粒常染色体,1对近端着丝粒性染色体。通过以上试验证明,乳汁分离法可以培养纯净的、具有正常分裂增生能力的牛乳腺上皮细胞,建立了乳腺上皮细胞的体外培养模型。
- 崔新洁王婷刘秉春陶林王潇
- 关键词：乳汁牛乳腺上皮细胞细胞骨架蛋白泌乳
- 牛白细胞介素-17真核表达载体的构建及在牛乳腺上皮细胞中的表达
- 2014年
- 【目的】在体外分离培养牛乳腺上皮原代细胞,并构建牛白细胞介素-17(bIL-17)基因真核表达质粒,观察重组质粒在牛乳腺上皮细胞的表达.【方法】提取牛脾脏细胞总RNA,通过RT-PCR扩增bIL-17,将bIL-17连入pMD19-T进行测序,测序成功后将bIL-17插入含有增强型绿色荧光蛋白报告基因的真核表达质粒pEGFP-N3上,构建真核表达质粒pEGFP-N3-bIL-17.用脂质体法将pEGFP-N3-bIL-17质粒转染于牛乳腺上皮细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白在细胞中的表达,RT-PCR检测bIL-17基因在细胞内的转录,定量ELISA检测bIL-17蛋白在细胞内的表达情况.【结果和结论】成功构建具有绿色荧光和新霉素抗性的双选择标记的牛白细胞介素-17真核表达载体,并可在牛乳腺上皮细胞成功表达.
- 王婷崔新洁刘秉春陶琳胡庆亮修磊王潇
- 关键词：牛乳腺上皮细胞转染
