- 枯草芽孢杆菌耐盐突变株proA全基因克隆及proBA基因渗透压调节功能研究
- 利用TaKaRa LA PCR试剂盒扩增枯草芽孢杆菌93151耐盐突变株proA基因的未知下游序列。根据测序结果,设计引物,克隆出发菌株和突变株全长proBA基因。序列分析表明,突变株proA基因有三个碱基发生了突变(从...
- 刘瑞杰曹军卫苗丽霞
- 枯草芽孢杆菌proA基因突变对提高大肠杆菌转化子渗透压耐受能力的影响
- 2006年
- 将枯草芽孢杆菌93151野生型菌株的proB基因和耐盐突变株93151-14的proA基因,进行体内重组,筛选出含有野生型proB和突变型proA杂合基因的转化子.此杂合基因能够与脯氨酸营养缺陷型大肠杆菌JM83功能互补.分别测定了大肠杆菌JM83三种转化子(分别含有野生型proBA基因,双突变proBA基因和杂合proBA基因)的耐盐能力,发现含有杂合proBA基因转化子的耐盐能力(0.45 mol/L)尽管比含有双突变proBA基因的转化子(0.5 mol/L)要低一些,但比含有野生型proBA基因的转化子(0.3 mol/L)要高得多.测定了3种转化子在不同盐浓度下生长时的胞内自由脯氨酸含量,发现其含量均随着盐浓度的上升而提高,表明其耐渗透压胁迫能力的提高与胞内自由脯氨酸的积累密切相关.但在相同盐浓度下,含有杂合proBA基因转化子的胞内自由脯氨酸含量要低于含有双突变proBA基因的转化子的胞内自由脯氨酸含量,但明显高于含有野生型proBA基因的转化子的胞内自由脯氨酸含量.说明尽管proB基因的突变在提高细胞耐高渗胁迫的能力中,有重要作用但proA基因的突变也发挥了不可忽视的作用.
- 魏红波曹军卫陈明清刘瑞杰
- 渗透压调节基因proBA的融合表达对大肠杆菌耐高渗胁迫能力的影响被引量：6
- 2005年
- 枯草芽孢杆菌 9315 1的渗透压调节基因proB和proA以重叠基因的方式组织 ,但是表达两个单独的蛋白质ProB和ProA。通过引物设计 ,在抗脯氨酸反馈抑制耐盐突变菌株 9315 1 14的proBA基因重叠区引入一个限制性酶切位点 ,分别扩增出proB和proA基因 ,并构建融合的proBA基因。SDS PAGE分析显示有一条新的分子质量约为85kD的蛋白带出现。相对于表达未融合的proB和proA 。
- 刘瑞杰陈婷曹军卫
- 关键词：枯草芽孢杆菌脯氨酸融合基因
- 枯草芽孢杆菌抗反馈抑制突变株proBA融合基因在拟南芥中的表达
- 微生物和植物在高渗胁迫条件下生长时,常常在细胞内积累高浓度的相容溶质。脯氨酸是许多微生物和植物积累的相容溶质。植物与微生物的脯氨酸生物合成途径非常相似,只是植物中P5CS是一个双功能酶,行使类似于微生物中γ-谷氨酸激酶(...
- 陈明清刘瑞杰魏红波刘清曹军卫
- 文献传递
- 枯草芽孢杆菌耐盐突变株proA基因克隆及proBA基因渗透压调节功能研究被引量：5
- 2004年
- 利用TaKaRaLAPCRTM试剂盒扩增枯草芽孢杆菌 931 5 1耐盐突变株proA基因的未知下游序列。根据测序结果 ,设计引物 ,克隆出发菌株和突变株全长proBA基因。将出发菌株和突变株的proBA基因分别转化大肠杆菌JM83(proBA- ) ,均能够与其功能互补。SDS PAGE分析其表达产物 ,有两条分子量分别约为 4 0kD和 4 5kD的新蛋白带出现。测定 4种转化子 (分别含有出发菌株和突变株proB基因的大肠杆菌 1 1 2 5 2转化子及proBA基因的大肠杆菌JM83转化子 )的耐盐能力。发现含有突变株proB或proBA基因转化子的耐盐能力 ,均比相应的含有出发菌株proB或proBA基因的转化子高。另外含有出发菌株和突变株的proBA基因转化子的耐盐能力 ,也均比相应的仅含proB基因的转化子高 ,表明枯草芽孢杆菌的ProA比大肠杆菌的ProA更为有效。测定所有JM83转化子胞内自由脯氨酸 ,发现其含量随盐浓度的上升而提高 。
- 刘瑞杰曹军卫苗丽霞
- 关键词：枯草芽孢杆菌克隆
- 枯草芽孢杆菌耐盐突变株proBA基因渗透调节功能研究
- 利用TaKaRa LA PCR<'TM>试剂盒扩增枯草芽孢杆菌93151耐盐突变株proA基因的未知下游序列.结果显示proA基因编码区全长为1248bp,其后紧接着一个非典型的终止子结构.分别克隆出发菌株和突变株全长p...
- 刘瑞杰
- 关键词：枯草芽孢杆菌融合基因
- 文献传递
- 融合的渗透压调节基因和蛋白质及制备方法和应用
- 本发明公开了一种融合的渗透压调节基因和蛋白质，制备方法及应用，其特征是其具有与SEQ ID No.1所示的核苷酸序列和SEQ ID No.2所示的氨基酸序列，制备步骤是A.引物设计；B.融合proB基因的克隆；C.pro...
- 曹军卫刘瑞杰魏红波陈明清
- 文献传递
- 融合的渗透压调节基因和蛋白质及制备方法和应用
- 本发明公开了一种融合的渗透压调节基因和蛋白质，制备方法及应用，其特征是其具有与SEQ ID No.1所示的核苷酸序列和SEQ ID No.2所示的氨基酸序列，制备步骤是A.引物设计；B.融合proB基因的克隆；C、pro...
- 曹军卫刘瑞杰魏红波陈明清
- 文献传递
- 枯草芽孢杆菌抗脯氨酸结构类似物突变株的筛选及突变株proBA基因的克隆和序列分析被引量：4
- 2002年
- 利用亚硝基胍对枯草芽孢杆菌 9315 1进行诱变处理 ,获得了耐NaCl浓度达 14 %的突变株 ,同时发现该突变株也是一个抗脯氨酸反馈抑制突变菌株。其胞内自由脯氨酸的含量随着盐浓度的提高显著增加 ,说明其对渗透压的耐受能力与胞内自由脯氨酸的含量紧密相关。利用PCR方法克隆突变株的proBA基因 ,得到一个约 2 3kb的DNA片段 ,序列分析表明该片段含有一完整的proB基因和部分proA基因。与野生菌株的proB基因相比 ,突变株proB基因中有3个碱基发生了改变 ,其中一个碱基的变化 (从起始密码子开始第 781位由T→A)导致了一个氨基酸发生改变 (Ser→Thr) ,另外两个碱基变化为沉默位点突变。将该proB基因转入大肠杆菌脯氨酸营养缺陷型菌株 ,能够与其功能互补。同时对部分proA基因序列分析发现 ,其与proB基因头尾重叠 ,在proA基因起始密码子上游第 14个碱基处有一个类似于SD的序列 ,其所编码的氨基酸序列与枯草芽孢杆菌 16 8的同源性为 77%
- 苗丽霞曹军卫刘瑞杰王友亮曾永辉
- 关键词：枯草芽孢杆菌克隆
- 采用定向进化方法修饰枯草芽孢杆菌抗反馈抑制突变株proBA融合基因及其表达的初步研究
- 很多生物为了抵御高渗胁迫,其细胞内常常积累高浓度的相容溶质,如甜菜碱、谷氨酸、脯氨酸等。枯草芽孢杆菌93151是以积累脯氨酸作为相容溶质的。在微生物中脯氨酸的合成是以谷氨酸为底物,通过γ-谷氨酸激酶(GK,proB基因产...
- 陈明清刘瑞杰魏红波刘清曹军卫
- 文献传递
