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刘新莉: 作品数：14 被引量：35H指数：4; 供职机构：中国医科大学附属第一医院更多>>; 发文基金：辽宁省自然科学基金辽宁省科学技术计划项目辽宁省教委科研基金更多>>; 相关领域：医药卫生更多>>

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TRAIL联合Res对乳腺癌MDA-MB-231细胞DR和Caspase表达的影响: 2011年; 目的研究TRAIL联合白藜芦醇（Res）对乳腺癌MDA-MB-231细胞DR和caspase表达的影响。方法MTT法检测细胞增殖；流式细胞术检测细胞凋亡及细胞表面DR4、DR5蛋白的表达；分光光度法检测caspase-3、caspase-8相对活性；荧光定量PCR检测DR4、DR5及caspase-3、caspase-8 mRNA的表达。结果50μmol／L和100μmo/L,Res分别与50ng／mL TRAIL联合作用后，对MDA-MB-231细胞增殖的抑制率及细胞凋亡率分别与单独应用相应浓度的Res和TRAIL比较，均存在显著差异（P〈0．01）。50μmol／L和100μmol／LRes分别与50ng／mLT RAIL联合作用后，caspase-3、caspase-8的相对活性与对照组及单用TRAIL、Res比较均明显增强，差异显著（P〈0．01）。Res作用后，细胞表面DR4、DR5荧光指数与对照组比较明显增强。荧光定量PCR结果显示与对照组比较．Res作用后DR4、DR5mRNA表达上调；与单独用药比较，TRAIL联合Resetcagpase-3、easpase-8 mRNA表达上调。结论TRAIL和Res联合应用对诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡具有明显的协同效果，其作用机制可能与增加DR和caspase活性有关。; 李岩赵丹刘新莉马萍; 关键词：乳腺癌 TRAIL 死亡受体 CASPASE

pGPU6/GFP质粒介导的表达钙网织蛋白基因的短发夹RNA的构建和鉴定: 2014年; 目的构建靶向钙网织蛋白(CRT)基因的短发夹RNA(shRNA)表达质粒并鉴定。方法设计并合成4对针对CRT基因的shRNA链,退火形成双链,与酶切的质粒pGPU6/GFP连接,构建4个重质粒,转化DH5а菌株,提取质粒,进行酶切鉴定和测序分析。脂质体法转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞,通过荧光倒置显微镜判定转染效率,并通过Western印迹法检测细胞中CRT基因及蛋白的表达水平。结果经酶切鉴定筛出的重组质粒测序结果与目的序列相同,重组质粒pGPU6/GFP/Neo-CRT构建成功;转染MDA-MB-231细胞后,CRT基因在mRNA及蛋白水平的表达均降低,其中pGPU6/GFP/CRT1的抑制效果最好。结论成功构建了靶向CRT基因的shRNA表达质粒,并筛选出1种对CRT基因有显著抑制作用的shRNA。; 李晓曦孟凡东孙大鹏仇凤启刘新莉赵丹马萍; 关键词：RNA干扰

重组腺病毒载体CRT联合紫杉醇对乳腺癌细胞周期、增殖及凋亡的影响: 2012年; 目的:研究Ad-CRT联合紫杉醇对乳腺癌MDA-MB-231细胞周期、细胞增殖及凋亡的影响。方法:MTT法检测细胞增殖,相差显微镜观察细胞形态学变化;PI单染流式细胞术检测细胞周期和凋亡。结果:Ad-CRT联合紫杉醇对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的抑制率明显高于单纯Ad-CRT组和单纯紫杉醇组,且抑制作用呈时间依赖关系(P<0.05),且细胞形态发生明显的改变。Ad-CRT联合紫杉醇将乳腺癌细胞MDA-MB-231的细胞周期明显的阻滞在G2/M期,并且促进细胞的凋亡。结论:Ad-CRT联合紫杉醇能增强乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖抑制、阻滞细胞周期并且诱导细胞凋亡。; 赵丹刘新莉仇凤启孙大鹏马萍; 关键词：紫杉醇乳腺癌增殖凋亡

钙网织蛋白重组腺病毒载体构建及体外表达: 2012年; 目的构建钙网织蛋白(CRT)基因重组腺病毒载体,并检测其在293LP细胞中的表达。方法根据Genbank中提供的CRT基因序列,设计并合成引物,以人乳腺癌组织cDNA文库为模板采用RT-PCR技术扩增人CRT基因片段,测序后将CRT基因片段定向克隆至pShuttle-CMV重组穿梭载体,进而将穿梭载体克隆至PacⅠ限制性内切酶线性化的腺病毒载体pAdxsi。结果重组穿梭载体pShuttle-CRT经EcoRI/KpnⅠ酶切鉴定连接成功。酶切穿梭载体将CRT片段克隆至腺病毒载体pAdxsi得到Ad-CRT,鉴定证实Ad-CRT载体构建成功。Ad-CRT转染293LP细胞并通过Western印迹法和Real-time PCR法证实其体外表达。结论成功构建CRT重组腺病毒载体Ad-CRT并证实其在293LP细胞中表达。; 赵丹刘新莉马萍; 关键词：腺病毒载体基因治疗

靶向livin的小分子干扰RNA联合表阿霉素对乳腺癌细胞ZR-75-30凋亡的影响被引量：12: 2008年; 目的利用RNA干扰技术阻断livin基因的表达，观察其联合表阿霉素对乳腺癌细胞ZR-75-30凋亡的作用。方法体外化学合成靶向livin的小分子干扰RNA（siRNA），在脂质体（1ipofectamine^TM2000）的介导下转染人乳腺癌细胞ZR-75-30。荧光共聚焦显微镜下观察转染效率，半定量RT-PCR和蛋白质印迹法检测转染前后ZR-75-30细胞livin基因表达的变化，流式细胞术检测转染靶向livin的iRNA联合表阿霉素作用的ZR-75-30细胞的凋亡率。结果靶向livin的siRNA可以有效特异地抑制ZR-75-30细胞livin基因的表达，在mRNA水平上其表达抑制率约为53．66％；在蛋白质水平其表达抑制率约为58．32％，转染靶向livin的siRNA36h后，靶向livin的siRNA联合表阿霉素可以诱导（15．18±0．05）％的细胞凋亡。结论靶向livin的siRNA能有效、特异地阻断livin基因的表达，阻断livin基因表达联合表阿霉素可促进ZR-75-30细胞的凋亡。; 梁春艳马萍刘新莉; 关键词：LIVIN RNA干扰表阿霉素

白藜芦醇联合TRAIL抑制乳腺癌细胞抗凋亡蛋白Bcl-xl表达: 2012年; 目的:探讨白藜芦醇(Resveratrol,RES)联合TRAIL对乳腺癌细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-xl表达的影响。方法:50μmol/L RES、100ng/ml TRAIL及二者联合分别处理乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率,Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡,Real time PCR检测Bcl-2、Bcl-xl和Mcl-1的mRNA表达,Western blot检测Bcl-xl、Bcl-2和Mcl-1蛋白表达。结果:MTT结果显示RES、TRAIL均能明显抑制乳腺癌细胞增殖,且联合组抑制率高于单独处理组(P<0.05)。RES、TRAIL单独或联合能诱导MDA-MB-231细胞凋亡,凋亡率分别为(16.34±0.34)%,(43.52±0.99)%和(73.60±2.80)%,与对照组的(4.13±0.25)%比较有统计学意义(P<0.05);而对MCF-7凋亡影响不明显。Realtime PCR结果显示RES联合TRAIL能明显抑制MDA-MB-231细胞Bcl-xl mRNA表达,联合组与对照组比较有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果显示RES联合TRAIL能抑制Bcl-xl蛋白的表达而对Bcl-2和Mcl-1抑制不明显。结论:RES能增强TRAIL诱导乳腺癌细胞凋亡敏感性,这可能与二者抑制抗凋亡蛋白Bcl-xl的表达有关。; 仇凤启孙大鹏赵丹刘新莉李晓曦马萍; 关键词：白藜芦醇 TRAIL 凋亡抗凋亡蛋白 BCL-XL

TRAIL联合白藜芦醇对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡影响的研究被引量：9: 2011年; 目的:探讨TRAIL联合白藜芦醇对乳腺癌MDA-MB-231细胞株增殖及凋亡的影响。方法:MTT法和软琼脂集落形成实验检测细胞增殖;DAPI染色法及流式细胞术检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞表面DR4、DR5蛋白表达。结果:50 ng/mL TRAIL与50和100μmol/L白藜芦醇联合作用14 d后,MDA-MB-231细胞在软琼脂中集落形成率分别为(2.49±0.08)%和(1.38±0.07)%,与相应浓度TRAIL、白藜芦醇单独应用比较及组间比较,差异有统计学意义,P<0.01。50 ng/mL TRAIL与50和100μmol/L白藜芦醇联合作用后,对MDA-MB-231细胞增殖抑制率为(62.43±2.07)%、(87.32±1.44)%;细胞凋亡率为(53.59±1.44)%、(73.72±1.96)%,与单独应用相应浓度TRAIL、白藜芦醇比较及组间比较,差异有统计学意义,P<0.01。50、100和200μmol/L白藜芦醇作用后,细胞膜表面DR4、DR5的荧光指数分别为1.80±0.07、2.11±0.14、2.59±0.16和2.16±0.08、2.92±0.25、3.90±0.06,与对照组(FI值分别为1.52±0.04和1.61±0.13)比较及组间比较差异有统计学意义,P<0.05。结论:TRAIL与白藜芦醇联合可协同抑制MDA-MB-231细胞增殖并诱导其凋亡,DR4、DR5蛋白表达的上调可能是其协同效应的机制之一。; 陈洋李岩刘新莉马萍; 关键词：乳腺肿瘤肿瘤坏死因子细胞凋亡

重组腺病毒载体Ad-CRT/MAGE-A3抑制肺腺癌细胞A549侵袭的体外研究: 2012年; 目的:探讨同时携带CRT基因及MAGE-A3基因的重组腺病毒载体转染人肺腺癌细胞A549后基因的表达及其对体外增殖、侵袭、凋亡及血管形成能力的影响。方法:Ad-CRT/MAGE-A3转染A549细胞,转染48h后以Western blotting法检测CRT及MAGE-A3蛋白的表达;MTT法检测Ad-CRT/MAGE-A3对A549细胞增殖的影响;Transwell方法检测Ad-CRT/MAGE-A3对A549细胞侵袭的影响;AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测Ad-CRT/MAGE-A3对A549细胞凋亡的影响;小管形成实验检测Ad-CRT/MAGE-A3对血管形成的影响。结果:转染48h,Western blotting结果显示转染Ad-CRT/MAGE-A3的A549细胞能够表达CRT及MAGE-A3蛋白;MTT检测结果显示Ad-CRT/MAGE-A3能够明显抑制A549细胞的增殖;Tran-swell检测结果显示Ad-CRT/MAGE-A3能够明显抑制A549细胞的侵袭能力;AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测结果显示Ad-CRT/MAGE-A3能够诱导A549细胞凋亡;小管形成实验结果显示Ad-CRT/MAGE-A3能够明显抑制血管形成。结论:Ad-CRT/MAGE-A3能够明显抑制A549的增殖及侵袭能力,诱导其凋亡,并能明显抑制血管内皮细胞血管生成,其作用机制可能与CRT及MAGE-A3蛋白同时表达后相互作用有关,提示Ad-CRT/MAGE-A3可以作为潜在的肺癌基因治疗的新方法。; 刘新莉赵丹李晓曦王扬李岩马萍; 关键词：CRT 重组腺病毒载体血管形成

重组CRT/MAGE-A3腺病毒转染SGC-7901细胞及对其抑制作用的研究: 2011年; 目的探讨同时携带CRT基因及MAGE-A3基因的重组腺病毒载体转染人胃癌细胞SGC-7901的表达及对其体外侵袭、凋亡及血管形成能力的影响。方法 Ad-CRT/MAGE-A3转染SGC-7901,转染48h后以Western blotting法检测CRT及MAGE-A3蛋白的表达,Transwell方法检测Ad-CRT/MAGE-A3对SGC-7901细胞侵袭的影响,AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测Ad-CRT/MAGE-A3对SGC-7901细胞凋亡的影响,小管形成实验检测Ad-CRT/MAGE-A3对血管形成的影响。结果转染48h,Western blotting结果显示转染Ad-CRT/MAGE-A3的SGC-7901细胞能够表达CRT及MAGE-A3蛋白,Transwell检测结果显示Ad-CRT/MAGE-A3能够明显抑制SGC-7901的侵袭能力,AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测结果证实Ad-CRT/MAGE-A3在实验的转染条件下对SGC-7901并无诱导凋亡的作用,小管形成实验结果显示Ad-CRT/MAGE-A3能够明显抑制血管形成。结论 Ad-CRT/MAGE-A3明显抑制SGC-7901的侵袭能力和血管生成,提示Ad-CRT/MAGE-A3可以作为潜在的胃癌基因治疗的新方法。; 刘新莉赵丹李岩马萍; 关键词：CRT MAGE-A3 重组腺病毒载体血管形成

重组腺病毒Ad-CRT/MAGE-A3联合表柔比星抑制乳腺癌细胞增殖及侵袭被引量：1: 2012年; 目的:构建携带钙网蛋白(calreticulin,CRT)基因和黑素瘤抗原基因-A3(melanoma antigen gene-A3,MAGE-A3)的重组腺病毒载体Ad-CRT/MAGE-A3,观察其联合表柔比星对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖及侵袭的抑制作用。方法:构建Ad-CRT/MAGE-A3载体,感染MDA-MB-231细胞后,荧光显微镜观察其最适感染复数(multiplicity of infection,MOI)。分表柔比星、Ad-GFP、Ad-CRT/MAGE-A3、表柔比星+Ad-GFP、表柔比星+Ad-CRT/MAGE-A3共5组,MTT法检测各组MDA-MB-231细胞的增殖,Transwell实验检测各组MDA-MB-231细胞的侵袭力。结果:成功构建重组腺病毒载体Ad-CRT/MAGE-A3,其感染MDA-MB-231细胞的最适MOI为100。与其他各组相比,应用Ad-CRT/MAGE-A3联合表柔比星能明显抑制MDA-MB-231细胞的增殖[(83.27±1.04)%vs(57.42±1.27)%,(43.26±0.95)%,(61.23±1.47)%,(55.38±1.62)%;P<0.05]和侵袭[(8.41±4.20)vs(14.62±5.33),(107.66±3.35),(100.60±4.42),(104.20±2.60);P<0.05]。结论:腺病毒载体Ad-CRT/MAGE-A3能增强表柔比星抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖及侵袭的能力。; 刘新莉赵丹李晓曦李岩马萍; 关键词：重组腺病毒载体表柔比星乳腺癌

刘新莉

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