刘先凯
- 作品数：49 被引量：52H指数：4
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学轻工技术与工程更多>>
- 志贺菌rfbA基因突变体的构建
- 2012年
- 目的构建弗氏2a志贺菌301 rfbA基因缺失突变株,初步探究志贺菌脂多糖合成与糖蛋白合成通路是否相关。方法首先用PCR扩增出rfbA基因上下游同源臂,构建含有kan基因的打靶片段,采用λ-Red重组系统对rfbA基因进行缺失,用PCR进行初步验证,然后通过LPS的银染方法进行进一步验证。随后,制备野生株、rfbA缺失突变株的全菌蛋白样品,进行双向电泳后比较野生株301和rfbA缺失株的蛋白表达谱。结果成功构建了301 rfbA缺失突变株。在LPS的银染实验中,rfbA突变株在凝胶中未形成一长串的梯状条带。在双向电泳实验中,野生株和突变株没有明显的蛋白差异点。结论获得了301 rfbA基因缺失突变体,初步认为志贺菌中不存在与脂多糖O-抗原合成相关的蛋白糖基化途径。
- 宋丽牛畅白国旺冯尔玲刘先凯魏华王恒樑熊勇华朱力
- 关键词：志贺菌属脂多糖类基因缺失突变
- 一株脂多糖合成缺陷的无毒福氏志贺氏菌及其构建方法
- 本发明公开了一株脂多糖合成缺陷的无毒福氏志贺氏菌及其构建方法。本发明提供重组菌A，为去除福氏2a志贺氏菌中的毒力大质粒和所述福氏2a志贺氏菌基因组中的O-抗原连接酶编码基因得到的重组菌。本发明的实验证明，本发明首先依据质...
- 王恒樑朱力宋丽冯尔玲刘先凯
- 文献传递
- 福氏2a志贺氏菌2457T株argT基因突变体的构建被引量：1
- 2008年
- 目的:构建福氏2a志贺氏菌2457T株argT基因缺失突变体和ArgT蛋白非降解突变体,以进行后续ArgT功能研究。方法:根据福氏2a志贺氏菌2457T株基因组全序列,采用λ-Red重组系统对argT基因进行缺失,并经PCR验证;采用定点突变的方法构建ArgT非降解株,并经SDS-PAGE验证;对野生株、argT缺失突变株和ArgT非降解突变株37℃时的生长曲线及生化反应进行比较研究。结果:构建了2457T的argT缺失突变株和ArgT非降解突变株;2种突变株初始生长均较慢,但最终和野生株状态一致;2种突变株利用甘露醇的能力都比野生株强,而利用葡萄糖的能力降低。结论:获得了福氏2a志贺氏菌2457T株argT基因缺失突变体和ArgT蛋白非降解突变体。
- 赵格曹晓玉朱力刘先凯冯尔玲陈惠鹏王恒樑
- 关键词：缺失突变体定点突变
- 炭疽芽孢杆菌FtsE蛋白酵母双杂交载体的构建与表达
- 2007年
- 目的:构建炭疽芽孢杆菌FtsE蛋白酵母双杂交载体,以寻找与之有相互作用的蛋白。方法:通过PCR从炭疽芽孢杆菌中扩增得到FtsE蛋白的基因,将其片段克隆到穿梭质粒pGBKT7载体中,测序验证正确后转化酵母AH109株表达FtsE蛋白。结果与结论:重组载体构建正确,转化酵母细胞后表达成功,为下一步筛选与之有相互作用的蛋白奠定了基础。
- 李强刘先凯张浩冯尔玲叶棋浓王恒樑
- 关键词：炭疽芽孢杆菌芽孢酵母双杂交
- 弗氏志贺菌2a phoN1基因功能的初步研究被引量：1
- 2014年
- 目的初步探讨phoN1基因在志贺菌属中的功能。方法使用λ-Red重组系统构建弗氏志贺菌2a 301株phoN1缺失突变株,通过比较蛋白质组学方法研究突变株与野生株的蛋白表达谱差异,并利用豚鼠角膜炎模型、HeLa细胞竞争侵袭实验评价两者之间的毒力差异。结果成功构建了phoN1缺失突变株,蛋白质学研究发现,phoN1缺失对其他胞内蛋白无显著影响,豚鼠角膜实验和HeLa细胞竞争侵袭实验证实,phoN1缺失不影响志贺菌属的侵袭能力。结论 phoN1在体外生存、侵袭宿主细胞过程中未发挥显著作用,其功能有待进一步研究。
- 牛小羽胡威冯尔玲刘先凯张玫朱力
- 关键词：志贺菌磷酸酶基因敲除豚鼠模型角膜炎
- 可被O-糖基化修饰的多肽
- 本发明公开了可被O-糖基化修饰的多肽。本发明所提供的多肽为：a1)序列为W-P-Xn-S-Ym的多肽；a2)含有a1)所述序列的多肽；其中，Xn为1或2或3或4个氨基酸，Ym为1或2或3个氨基酸；所述氨基酸中的氨基酸为2...
- 王恒樑潘超朱力吴军冯尔玲刘先凯孙鹏王东澍曾明王斌
- 利用免疫蛋白质组学鉴定炭疽杆菌蛋白MetK及其免疫原性验证
- 2012年
- 目的验证免疫蛋白质组中鉴定到的S-腺苷甲硫氨酸MetK蛋白的免疫原性。方法免疫蛋白质组学的方法鉴定到MetK蛋白,通过PCR方法扩增metK基因全长,然后将其克隆到原核表达载体pET32a中,转化大肠杆菌DH5α,测序正确后提取质粒转入BL21(DE3)中进行诱导表达。再通过Ni-NTA柱纯化MetK蛋白,纯化后的蛋白免疫SPF级的BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,通过多克隆抗体与炭疽芽孢杆菌A16R全菌蛋白Western印迹检测,验证MetK蛋白的免疫原性。结果与结论成功表达了MetK蛋白,制备了其多克隆抗体,为免疫蛋白质组学鉴定到的蛋白点进行验证,也为研究MetK蛋白的生物学功能研究提供了条件。
- 童超刘先凯任静晓王东澍高志奇冯尔玲朱力廖祥儒王恒樑
- 关键词：基因表达多克隆抗体
- 福氏2a志贺氏菌2457T HtpG蛋白诱导小鼠炎性反应被引量：4
- 2008年
- 【目的】构建福氏2a志贺氏菌2457T株的htpG缺失突变株和回复株,对HtpG蛋白的功能进行初步研究。【方法】采用λ-Red重组系统对htpG基因进行缺失突变,构建了福氏2a志贺氏菌2457T株的htpG缺失突变株,并利用低拷贝质粒构建了htpG突变株的回复株。在此基础上,对野生株、突变株和回复株的生长曲线、生化反应、豚鼠角膜试验进行了比较分析,并考察了野生株、突变株和回复株腹腔注射引起小鼠炎症反应的强弱。【结果】HtpG蛋白功能与福氏志贺氏菌的基本生化代谢无关,也不影响细菌穿透上皮细胞的能力,但腹腔注射后能够引起小鼠强烈的炎症反应。【结论】HtpG蛋白功能可能与细菌的免疫致病性相关。
- 卜歆朱力刘先凯赵格冯尔玲张静飞袁静王恒樑
- 关键词：缺失突变株炎症因子
- 与福氏2a志贺氏菌2457T株ArgT相互作用蛋白的筛选及鉴定被引量：1
- 2008年
- 目的:筛选、鉴定与福氏2a志贺氏菌2457T株ArgT相互作用的蛋白,以进一步研究ArgT在福氏2a志贺氏菌致病过程中发挥的作用。方法:将ArgT与GST融合表达,通过体外GST沉降实验和MALDI-TOF MS技术,筛选并鉴定与福氏2a志贺氏菌2457T株ArgT相互作用的蛋白。结果:筛选并鉴定到与福氏2a志贺氏菌2457T ArgT相互作用的蛋白OmpR。结论:OmpR与ArgT存在体外相互作用。
- 曹晓玉赵格朱力刘先凯李娜何建勇王恒樑
- 关键词：OMPR
- 弗氏2a志贺菌2457T株碱性蛋白质组图谱的建立被引量：8
- 2007年
- 目的:建立弗氏2a志贺菌2457T株的碱性蛋白质组图谱。方法:首先采用双向电泳技术对弗氏2a志贺菌2457T株表达的全部碱性菌体蛋白及碱性膜蛋白进行分离,再通过基质辅助激光解析/电离串联飞行时间质谱进行鉴定。结果:共鉴定到46个蛋白点,对应于38种蛋白质。结论:首次完成了弗氏2a志贺菌2457T株的碱性蛋白质组图谱。
- 朱力刘先凯赵格冯尔玲杨树兴黄培堂王恒樑
- 关键词：碱性蛋白外膜蛋白蛋白质组学双向凝胶电泳
