关丽
- 作品数：6 被引量：25H指数：3
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 内含中东呼吸综合征冠状病毒部分N基因病毒样颗粒构建和表达被引量：1
- 2015年
- 目的 构建耐RNase酶内含中东呼吸综合征冠状病毒（middle east respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV）部分N基因的病毒样颗粒（virus-like particles,VLPs）.方法 将MS2噬菌体包膜蛋白和成熟酶蛋白基因编码序列插入到表达载体pET32a,构建成pET32MS中间载体,再将MERS-CoV N基因和beta-actin基因片段连接到成熟酶蛋白基因的下游,获得的重组载体p32MS-EMC-Beta转化到E.coli BL21 （DE）感受态细胞中进行诱导表达,表达产物进行纯化,然后进行耐酶实验及稳定性实验.结果 获得含MERS-CoV N基因片段的颗粒,可抵抗RNase降解,在37℃保存30d.结论 成功构建了含MERS-CoV N基因VLPs且稳定良好,可作为MERS-CoV的标准品和质控品。
- 张丹聂凯关丽陆丽马学军
- 关键词：噬菌体MS2冠状病毒属病毒样颗粒
- 环介导逆转录等温扩增技术检测中东呼吸综合征冠状病毒基因被引量：6
- 2015年
- 建立了基于浊度仪和羟基萘酚蓝(Hydroxy naphthol blue,HNB)颜色变化的简单、快速和灵敏的环介导逆转录等温扩增技术(RT-LAMP)检测方法,应用于中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV)的检测。针对MERS-CoV的核衣壳蛋白基因(Nucleocapsid,N)设计6条特异引物,在等温条件下(63℃)进行60min扩增反应。通过实时浊度仪记录扩增曲线和扩增前在反应体系中加入HNB观察颜色变化两种方式进行检测结果判定。本文对不同人类冠状病毒及常见呼吸道病毒进行了特异性验证,对梯度稀释的体外转录MERS-CoV全N基因RNA进行了定量和检测限分析,同时与已发表的实时荧光定量PCR(rRT-PCR)进行比较。结果显示,本研究建立的RT-LAMP方法特异性高,对于每反应管103至106的拷贝数RNA,出峰时间与每反应管N基因RNA拷贝数对数值有稳定的线性关系。基于浊度仪和颜色判定的RT-LAMP检测方法检测限分别为500拷贝和1 000拷贝。因此,该方法有望应用于MERS-CoV感染的快速筛选,具有在基层医疗卫生机构和现场推广和应用的潜力。
- 关丽聂凯张丹李鑫娜王延群谭文杰马学军
- 环介导等温扩增技术的改进及其在现场检测平台上的应用进展被引量：6
- 2014年
- 环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是一种新型核酸体外扩增技术,具有等温、快速、高特异性和灵敏度、产物检测简便等特点。自建立以来,该技术被广泛应用于病原检测、动物胚胎的性别鉴定、转基因食品检测和肿瘤的基因检测等领域并得到不断改进和完善,主要体现在特异性提高,反应速度加快,样本处理简化,检测方法特异化,多重扩增得以实现。由于LAMP满足现场检测的诸多要求,当前基于LAMP技术的现场检测平台正向着微型化、集成化、自动化方向发展,并呈现出与芯片实验室和数字扩增等技术联合应用的趋势。本文综述了近年来LAMP技术的改进及其在现场检测平台上的应用进展。
- 关丽马学军
- 关键词：环介导等温扩增技术
- 埃博拉病毒扎伊尔亚型多引物自配引发等温扩增方法的建立被引量：8
- 2016年
- 鉴于目前埃博拉疫情在西非流行和输入国内的潜在风险,开发快速准确易普及的检测埃博拉病毒的方法对埃博拉防控具有重大意义。本文拟建立一种基于颜色判定简单、快速和灵敏的方法,即多引物自配引发等温扩增技术(isothermal multiple self-matching initiated amplification,IMSA)应用于埃博拉病毒扎伊尔亚型的检测。该技术设计了分别对应于埃博拉病毒扎伊尔型核蛋白(nuclear protein,NP)基因的7个区段的6条特异引物,在等温(63℃)条件下进行核酸扩增反应1小时,在扩增前加入HNB染料(羟基萘酚蓝)作为反应指示剂,以HNB染料颜色变化作为结果判定的标准。文中利用这种技术与RT-qPCR分别对含有目的片段的假病毒的系列稀释物以及模拟临床样本进行灵敏度分析,同时对30例健康人血浆以及登革病毒、日本脑炎病毒样本进行特异性分析。在塞拉利昂完成了81例埃博拉疑似病例血液样本的检测。结果显示RT-IMSA方法检测灵敏度与RT-qPCR方法的灵敏度相当,30例健康人血浆样本检测均为阴性,并且与登革病毒及日本脑炎病毒无交叉反应。与获得批准的荧光定量PCR试剂盒比较,RT-IMSA检测81例临床样本的结果为53例阳性,23例阴性,5例假阴性。灵敏度和特异性分别为91.4%和100%。因此,相较于RT-qPCR的高成本和复杂操作,RT-IMSA方法具有快速、简单的检测优势。
- 李鑫娜聂凯王佶张丹关丽刘军柯跃华周航宇马学军
- 关键词：假病毒
- 一种基于新型再测序芯片的不明原因腹泻样品检测方法的建立和初步应用被引量：1
- 2014年
- 本研究建立了一种基于新型再测序芯片（Resequencing Pathogen Microarray，RPM）的腹泻症候群多病原检测方法，能同时检测14种轮状病毒，7种杯状病毒，8种星状病毒，28种肠道病毒，16种少见致泻病毒。选取已验证的阳性病毒样本为模板来评估该方法的特异性。用克隆质粒和体外转录的RNA梯度稀释液来检验RPM的灵敏度，在20～2000拷贝／gL水平时RPM仍能检测和分辨出相近的病毒亚型。通过调整参考品的浓度优化了阳性判定阈值，并改进了肠道病毒的检测流程以完成分型。对10份不明原因腹泻样品进行了筛查，从中检出6份腹泻病毒阳性样本。根据RPM结果对样品进行了单重PCR并且测序，RPM与测序结果一致。本研究建立了一种高通量，高特异性，灵敏度较高的RPM方法，对于不明原因腹泻病例的诊断和突发疫情的处理有巨大的应用价值。
- 王佶徐子乾张晨牛培华关丽段招军马学军
- 关键词：腹泻病毒
- 基于颜色判定的环介导逆转录等温扩增技术检测柯萨奇病毒A6型被引量：3
- 2015年
- 目的建立基于羟基萘酚蓝（hydroxynaphtholblue，HNB）颜色变化的简单、灵敏和快速的环介导逆转录等温扩增技术（RT—LAMP）检测方法，应用于柯萨奇病毒A6型（coxsackievirusA6，CV-A6）的检测。方法针对CV-A6的VPl基因设计6条特异引物，在等温条件下（63℃）进行50min扩增反应。扩增前在反应体系中加入HNB，通过观察颜色变化进行检测结果判定。使用多种肠道病毒进行特异性验证，使用梯度稀释的体外转录CV-A6全VP1基因RNA进行灵敏度分析，同时与实时荧光定量逆转录PCR（rRT—PCR）检测结果进行比较，并对92份手足口病患者临床标本进行检测。结果本研究建立的RT-LAMP方法对除CV-A6外的23种肠道病毒的检测结果均为阴性，灵敏度为100拷贝／反应，与rRT—PCR方法相当。在对92份手足口病临床标本的检测中，检测结果与rRT-PCR方法相符，Kappa值为1，灵敏度和特异性均为100％。结论本研究建立的针对CV-A6的LAMP检测方法，特异度高，灵敏度与rRT—PCR相当，有望应用于CV—A6感染的快速筛选，具有在基层医疗卫生机构和现场推广与应用的潜力。
- 关丽许松涛聂凯张丹李鑫娜许文波马学军
- 关键词：聚合酶链反应柯萨奇病毒感染
