佟惠春
- 作品数：29 被引量：45H指数：4
- 供职机构：天津医科大学基础医学院更多>>
- 发文基金：天津市卫生局科技基金天津市自然科学基金天津市科委资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组腺病毒rAd-E1A-CDglyTK对人卵巢癌SKOV3细胞的抑制作用被引量：3
- 2008年
- 目的:探讨含腺病毒基因E1A、融合自杀基因CDglyTK及报告基因GFP的重组腺病毒rAd-E1A-CDglyTK与酶前体药物5-FC和(或)GCV联合应用对人卵巢癌SKOV3细胞的抑制作用。方法:将重组腺病毒质粒prAd-E1A-CDglyTK经脂质体介导转染293细胞,进行病毒的扩增、纯化与PCR鉴定,以紫外分光光度法与TCID50法测定纯化病毒的颗粒浓度与感染性滴度,计算病毒比活性;在SKOV3细胞中观察重组病毒的复制能力及感染效率,确定感染率达90%以上的最小MOI。用MTT法观察感染重组病毒的SKOV3细胞对5-FC或GCV的敏感性,并计算IC_(50);观察一定MOI的rAd-E1A-CDglyTK或重组复制缺陷型腺病毒rAd-CDglyTK与IC_(50)的5-FC和(或)GCV联合应用对SKOV3细胞生长的抑制作用。结果:经PCR和琼脂糖凝胶电泳证实,纯化重组腺病毒中存在E1A和CDglyTK两个基因片段,其病毒颗粒浓度和感染性滴度分别为9.47×10^(11) VP/ml和3.16×10^(10)IU/ml,病毒比活性为3.34%。重组病毒可在SKOV3细胞中复制,对SKOV3细胞的感染效率随MOI的增加而增加,可致细胞感染率达90%以上的最小MOI为50 IU/cell。5-FC或GCV明显抑制感染细胞的生长,且存在明显的剂量依赖效应。两种重组腺病毒/前药系统的抑瘤作用比较显示,rAd-E1A-CDglyTK组细胞生长抑制率[(16.57±1.59)%]显著高于rAd-CDglyTK组[(10.44±1.80)%,P<0.01];与IC_(50)的5-FC和GCV双药联合应用,其抑制率达(71.68±2.63)%,显著高于rAd-CDglyTK/5-FC+GCV组的(63.64±2.91)%(P<0.01)。结论:重组腺病毒rAd-E1A-CDglyTK与酶前体药物联合应用对卵巢癌SKOV3细胞具有显著的抑制作用,其效果优于重组复制缺陷型腺病毒rAd-CDglyTK。
- 周丽君李秋香李冬田曹阳李光明佟惠春
- 关键词：卵巢癌重组腺病毒自杀基因SKOV3细胞
- 含胞嘧啶脱氨酶基因重组腺病毒的构建及其对肺癌抑制作用的研究被引量：1
- 2002年
- 目的:构建含胞嘧啶脱氨酶基因(CD基因)重组腺病毒(AdE1CMVCD),并鉴定;用自杀基因治疗系统(AdE1CMVCD/5-FC)对肺癌进行抑瘤作用的实验研究。方法:体外实验:用不同稀释度的AdE1CMVCD转染人肺癌细胞H460后分别加入不同浓度的5-氟胞嘧啶(5-FC),用MTT法测OD570nm值,按公式计算细胞生长抑制率;体内实验:建立T739鼠肺腺癌荷瘤模型,瘤体内导入AdE1CMVCD,腹腔注射5-FC,观察实验组及各对照组瘤体及生存期差异。结果:该系统转染的人肺癌H460细胞生长抑制率随前药5-FC浓度及感染重组病毒剂量的增加而增加,最大抑制率达61.29%,同时观察到了明显的旁杀伤作用;在体内实验中观察到AdE1CMVCD/5-FC对小鼠肺癌有明显的生长抑制作用,明显延长荷瘤小鼠生存期。结论:本文建立的AdE1CMVCD/5-FC系统体内外对肺癌均有明显的抑制作用,为临床肺癌基因治疗的应用奠定了基础。
- 佟惠春李冬田李芳芳李光明
- 关键词：胞嘧啶脱氨酶基因重组腺病毒肺癌基因治疗
- 内皮抑素基因的获取及其分泌型质粒构建的研究被引量：1
- 2002年
- 目的 :通过分离、克隆、重组出内皮抑素基因并测定其基因序列 ,探讨单独或联合其它血管抑制因子基因及其表达产物经纯化作为生物制品可用于肿瘤治疗的研究。方法 :采用RT_PCR技术自肝癌组织中扩增出内皮抑素目的基因片段 ,采用pEZZ18为分泌型质粒载体构建含内皮抑素基因的重组质粒并在大肠杆菌DH5α内进行表达。结果 :成功获得内皮抑素基因并经序列测定证实。序列分析显示与已发表的内皮抑素基因无明显差异。克隆至 pEZZ18载体构建成功含内皮抑素基因的分泌型重组质粒。结论 :构建的重组质粒具有外分泌特性 ,为成功分泌表达内皮抑素、快速纯化及临床应用打下良好基础。
- 杨洁安纯明佟惠春李冬田
- 关键词：内皮抑素基因质粒构建基因序列
- 含胞嘧啶脱氨酶基因重组腺病毒体内抑瘤作用的研究
- 2002年
- 目的 :构建含胞嘧啶脱氨酶基因 (CD基因 )重组腺病毒AdE1CMVCD ,用自杀基因治疗系统AdE1CMVCD/5_氟胞嘧啶 (5_FC)对小鼠肺腺癌进行体内抑瘤作用的实验研究。方法 :建立T739小鼠肺腺癌荷瘤模型 ,瘤体内导入AdE1CMVCD ,腹腔注射5_FC ,观察各组小鼠瘤体和生存期差异以及瘤体组织切片病理变化。结果 :从实验中观察到AdE1CMVCD/5_FC系统对小鼠肺腺癌有明显的抑制生长作用 ,与对照组荷瘤小鼠相比 ,治疗组荷瘤小鼠生存期明显延长。结论 :AdE1CMVCD与5_FC联合在体内对肺癌有明显的抑制作用 。
- 佟惠春李冬田李芳芳李光明
- 关键词：抑瘤作用基因疗法肺肿瘤腺癌
- AdTK治疗肺癌的实验研究被引量：10
- 2003年
- 构建含HSV-TK基因的重组腺病毒AdTK,在两种肺癌细胞和鼠肺癌模型中对AdTK/GCV系统进行抑瘤实验研究。方法:采用同源重组法构建AdTK,用MTT法测定AdTK/GCV系统对H460、PG49人肺癌细胞的生长抑制率,建立T739鼠肺癌模型,观察AdTK/GCV系统对瘤体大小及鼠存活期的影响。结果:成功构建AdTK,AdTK转染H460、PG49细胞后对细胞抑制率随AdTK、GCV及药物作用时间的增加而增高,有显著性差异,小鼠体内实验中观察到AdTK/GCV系统对鼠肺癌有明显生长抑制作用,且明显延长了小鼠的存活期。结论:本文建立的AdTK/GCV系统在体内外对肺癌细胞均有明显抑制作用,为AdTK用于基因治疗奠定了基础。
- 李秋香李冬田朱乃军佟惠春
- 关键词：重组腺病毒HSV-TK基因肿瘤基因治疗
- 慢性活动性乙型肝炎的HBV和HCV重叠感染及其抗-HCV抗体的临床意义被引量：2
- 1994年
- 应用酶联免疫法检测天津地区90例慢性活动性乙型肝炎患者的抗丙型肝炎病毒(抗-HCV)抗体。对抗-HCV阳性患者的血清进行了Nested-PCR检测。90例患者有24例为抗-HCV阳性,阳性率为26.7％;24例抗-HCV阳性患者经PCR检测,8例为HCV RNA阳性。本组研究表明,天津地区慢性活动性肝炎患者血清中存在高水平的抗-HCV。在一定数量的患者中抗-HCV与HCV RNA并存,揭示确有HBV和HCV重叠感染,这种感染似以HBeAg阴性慢性活动性肝炎为常见,对重叠感染患者应分病室住院治疗。
- 李冬田李秋香佟惠春贾彦征任中原王淑惠
- 关键词：乙型肝炎丙型肝炎
- 弱势群体致腹泻肠道原虫感染调查
- 2005年
- 王赞鑫纪伟华程训佳邢杰邵红霞佟惠春
- 关键词：弱势群体肠道原虫腹泻大肠埃希菌HIV病毒感染性疾病
- 肝细胞癌基因治疗的体外实验研究被引量：1
- 2003年
- 目的 :构建一种对肝细胞癌有直接、间接治疗作用的重组腺病毒。方法 :用PCR方法扩增CD基因和glyES基因片段 ,插入腺病毒穿梭质粒。用细菌内同源重组方法与腺病毒骨架质粒重组构建出重组腺病毒质粒。经脂质体介导转染293包装细胞扩增获取重组腺病毒rAd CDglyES。用MTT法检测其对肝癌细胞株 (SMMC -7721)的生长抑制率及其表达产物对经ECGF处理的脐静脉血管内皮细胞 (ECV -304)增殖的影响。结果 :纯化的重组腺病毒滴度为1×1013 3TCID50/L ,对SMMC 7721的生长抑制率达 (82 1±8 3) % ,与对照组 (24 6±14 1) %比较有显著性差异 (P<0 01)。浓缩的转染了该重组腺病毒的细胞培养上清液对ECV 304细胞增殖的抑制率为(78 7±1 8) % ,而同样浓缩的转染了对照重组腺病毒rAd CD的细胞培养上清液的抑制率仅为 (24 2±9 7) % ,两者亦有显著性差异 (P<0 01)。结论 :rAd
- 李菲李冬田张巍佟惠春尹冰楠
- 关键词：肝细胞癌基因治疗体外实验研究胞苷脱氨酶腺病毒
- 直接酶标HBVDNA探针及化学发光自显影检测技术的应用被引量：4
- 1994年
- 本文报道用Ｒｅｎｚ等法制备探针。以ＰＢＯ（对苯醌）氧化ＨＲＰ使其产生活化位点，然后与ＰＥＩ（聚乙烯亚胺）缩合形成ＨＲＰ－ＰＢＯ－ＰＥＩ复合物，再以戊二醛为连接桥与ＨＢＶＤＮＡ共价结合构建直接酶标ＨＢＶＤＮＡ探针，杂交后用化学发光自显影检测技术（Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔａｕｔｏ－ｐｈｏｔｏｇｒａｐｈｉｃｄｅｔｅｃｔｉｏｎ）观察结果。该法无同位素探针的缺点，但同样的特异及敏感，可检测０．１～０．５ｐｇ靶ＤＮＡ。检测１６份乙肝患者血清，与免疫法测定病毒标志阳性率的符合率为８７．５％（１４∶１６），本法有较高的特异性及敏感性，其优点是经济、简便和快速，有推广价值。
- 李冬田李秋香郑玉廷佟惠春任中原
- 关键词：化学发光自显影
- 腺病毒为载体的HSV1-TK基因对肿瘤细胞系抑制作用的研究被引量：2
- 2002年
- 目的:用E1区缺失的含HSV1-TK基因和CMV启动子的重组腺病毒AdE1CMVHSV1-TK(AdTK)前体药物GCV即AdTK/GCV系统,观察其在体外对PG49、H460、MCF-7、Hela4种建株肿瘤细胞系的抑制作用、旁杀伤效应和AdTK/GCV系统处理的肿瘤细胞培养上清液对肿瘤细胞的杀伤效应。方法;采用MTT法测定细胞生长抑制率,AdLacZ作为对照病毒。结果:细胞生长抑制率随重组病毒的浓度、前体药物的浓度及作用时间的增加而升高,而对照病毒则没有显示出对肿瘤细胞明显的抑制作用。旁杀伤效应显示,细胞抑制率随导入AdTK病毒的肿瘤细胞比例的增加而升高。另外肿瘤细胞呈现出上清液浓度依赖性抑制,其生长抑制率随上清液浓度的增加而升高。结论:AdTK/GCV系统对4种肿瘤细胞系有明显的抑制作用及旁杀伤效应。
- 朱乃军李秋香李冬田孙文敏佟惠春
- 关键词：肿瘤细胞基因疗法腺病毒
