何丹妮
- 作品数：11 被引量：45H指数：4
- 供职机构：南京农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏高校优势学科建设工程资助项目国家公益性行业科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 猪瘟病毒Core蛋白的原核表达和抗体制备及应用被引量：2
- 2015年
- 根据猪瘟病毒衣壳蛋白(Core)基因序列设计一对特异性引物,RT-PCR从猪瘟兔化弱毒中扩增出完整的Core基因,经酶切和序列测定后,克隆到携带His标签的原核表达载体p ColdⅠ中,成功构建了重组质粒p Cold-Core,并转化到大肠杆菌Rosseta 2(R2)中;利用IPTG诱导表达目的蛋白并鉴定表达效果。结果表明:经终浓度为0.1 mmol/L IPTG诱导24 h后,Core基因在R2中获得分泌性可溶表达,表达量占菌体蛋白的32.6%,SDS-PAGE显示目的蛋白相对分子质量为20 ku。Western blot结果显示Core蛋白可以分别与His单抗和猪瘟病毒阳性抗血清发生特异性反应,均出现单一反应带。将目的蛋白切胶后免疫Balb/c小鼠,制备特异性抗血清,Western blot结果显示该抗血清与衣壳蛋白反应后有明显的特异性条带,经激光共聚焦鉴定抗血清能够与胞浆中的猪瘟病毒粒子发生反应。结果表明,Core基因表达成功,制备的抗血清具有生物学功能。本研究为深入探讨Core蛋白在猪瘟病毒致病机制上的作用奠定了基础。
- 景娇张小敏何丹妮刘珂周斌陈溥言
- 关键词：猪瘟病毒原核表达抗血清
- 4种商品化试剂盒检测猪瘟病毒抗体的比较分析被引量：7
- 2011年
- 猪瘟（CSF）是由猪瘟病毒感染引起的猪的急性、热性、高度致死性传染病,是严重影响养猪业发展的主要疫病之一。世界动物卫生组织（OIE）将其列为A类l6种传染病之一,我国亦将其列为一类传染病,是发生最多、危害最大、流行最广的动物传染病之一。
- 庞然张小敏周斌何丹妮陈溥言
- 关键词：猪瘟病毒抗体试剂盒动物传染病世界动物卫生组织
- 2008～2010年华东部分地区猪圆环病毒2型感染血清学调查被引量：22
- 2010年
- 为了解华东地区近三年来猪圆环病毒病(porcine circovirus disease,PCVD)的流行状况,以便更好地控制该病的发生,2008年1月～2010年9月在华东地区5个省、直辖市及河南省的68个规模化猪场(均未免疫商品化猪圆环病毒疫苗)共收集1017份猪血清样品,应用商品化猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)抗体诊断试剂盒(PCV2-ELISA),对送检血清样品进行PCV2抗体水平检测。结果显示:送检猪血清中抗体阳性总数为609份,总阳性率为59.88%;2008、2009和2010年送检样品的阳性率分别为53.4%、35.33%和80.63%,PCV血清抗体阳性率呈先下降后上升的趋势;成年猪血清阳性率最高为81.40%,保育猪血清阳性率最低为41.48%,仔猪和育肥猪血清阳性率相近,分别为57.95%和52.20%,说明仔猪断奶后随母源抗体下降其抗体阳性率亦下降,但随猪龄的增长而感染逐渐加重后其抗体阳性率又升高,且不同生长阶段PCV毒抗体阳性率有明显差异。
- 赵津张小敏周斌曹瑞兵庞然何丹妮陈溥言
- 关键词：猪圆环病毒病血清学调查抗体水平ELISA
- 猪源Mxl蛋白的表达及其抗猪瘟病毒感染的研究
- Mx(Myxovirus resistance)是一种由Ⅰ型干扰素(IFNα/β)诱导的具有GTP酶活性的抗病毒蛋白，具有广谱抗病毒活性。对Mx蛋白多种多样抗病毒活性机制研究非常重要。作为Mx蛋白家族的一员，猪Mx1蛋白...
- 何丹妮
- 关键词：真核表达猪瘟病毒抗病毒活性抗体制备
- 四种商品化试剂盒检测猪瘟病毒抗体的比较分析
- 随机抽取某规模猪场70头不同日龄阶段的猪血清样品，经中和抗体试验验证后，再使用4种商品化试剂盒进行猪瘟抗体检测，通过中和抗体试验和4种试剂盒之间阳性率和符合度的比较分析，希望了解各种试剂盒的敏感性和特异性，明确各种试剂盒...
- 庞然张小敏周斌何丹妮陈溥言
- 关键词：猪瘟病毒抗体ELISA试剂盒
- 文献传递
- 猪盖他病毒衣壳蛋白的原核表达、纯化和多克隆抗体的制备被引量：4
- 2013年
- 原核表达猪盖他病毒(Getah virus)衣壳蛋白(Cap)并制备多克隆抗体。设计一对特异性引物,从含有Cap基因的pT-Cap质粒中扩增全长Cap基因,克隆至携带有His标签的原核表达载体pColdⅠ中,通过PCR、酶切鉴定和序列测定后,重组质粒pCold-Cap转化大肠杆菌Rosetta 2,IPTG诱导后SDS-PAGE和Western blot鉴定融合蛋白;蛋白经镍柱纯化后切胶免疫Balb/c小鼠,制备多克隆抗体。实验表明:经终浓度0.1mmol/L IPTG 15℃诱导24h后,Cap基因在Rosetta 2中获得高效表达,表达量占菌体蛋白的40.2%,SDS-PAGE显示融合蛋白相对分子质量为32.3kD。Western blot显示制备的鼠源抗血清可以与融合蛋白发生反应,有明显的特异性条带。猪盖他病毒衣壳蛋白原核表达成功,制备的多抗可以识别Cap蛋白。
- 姜焱何丹妮张小敏周斌陈溥言
- 关键词：衣壳蛋白原核表达多克隆抗体
- 猪源Mx1蛋白的表达及其抗猪瘟病毒感染的研究
- Mx(Myxovirus resistance)是一种由I型干扰素(IFNa/β)诱导的具有GTP酶活性的抗病毒蛋白,具有广谱抗病毒活性。对Mx蛋白多种多样抗病毒活性机制研究非常重要。作为Mx蛋白家族的一员,猪Mx1蛋白...
- 何丹妮
- 关键词：原核表达真核表达猪瘟病毒抗病毒
- 文献传递
- 实时荧光定量PCR检测猪源Mx1方法的建立及应用被引量：4
- 2013年
- 根据GenBank中的猪源抗病毒蛋白Mx1基因(poMx1)序列设计1对特异性引物,从Mx1基因全长片段中扩增和克隆了特异性的115 bp核苷酸片段。测序鉴定正确后将重组质粒进行定量并10倍倍比稀释作为扩增模板,通过SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,建立Mx1的标准曲线及回归方程。结果显示:该标准曲线的回归方程为Y=-2.986 3 lg X+38.239 3(R2=0.998 5),灵敏度为1×102μL-1;应用该方法对猪瘟兔化弱毒苗接种猪肾细胞(PK-15)后产生的poMx1 mRNA进行定量分析,发现病毒感染细胞4 h后,poMx1的表达量最高(P<0.01),然后随着时间的增加而缓慢减少。结论:建立的SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR方法可以检测poMx1 mRNA的表达水平。
- 张小敏周斌何丹妮庞然赵津陈溥言
- 关键词：实时荧光定量PCR
- 猪源Mx1基因的原核表达、鉴定及抗血清制备
- 目的：本研究原核表达了猪源的Mx1蛋白，目的制备高免抗血清，为今后鉴定猪源Mx1抗猪瘟病毒的机理奠定基础。方法：根据GenBank所收录的猪源Mx1基因序列，设计了一对特异性引物，以pT-poMx1为模板，PCR亚克隆出...
- 何丹妮周斌张小敏陈溥言庞然赵津
- 关键词：猪瘟病毒原核表达抗血清制备
- 猪源Mx1基因的原核表达及其抗血清制备被引量：7
- 2012年
- 利用1对特异性引物,从pT-poMx1中扩增出Mx1基因开放式阅读框(1 992 bp),并将其编码区插入到携带GST标签的原核表达载体pGEX-6p-1中,经酶切和序列测定后,重组质粒pGEX-poMx1转化入大肠杆菌BL21(DE3),利用IPTG诱导表达融合蛋白并分析表达效果。结果表明:经终浓度为0.8 mmol.L-1 IPTG诱导后4 h,猪源Mx1基因(poMx1)在BL21(DE3)中获得高效表达,表达量占菌体蛋白的32.6%,SDS-PAGE显示融合蛋白相对分子质量为99×103。将目的蛋白切胶后免疫Balb/c小鼠,制备了特异性多抗血清,Western blot结果显示该抗血清与融合蛋白孵育反应后有明显的特异性条带。结论:poMx1基因表达成功。
- 何丹妮周斌张小敏陈溥言庞然赵津
- 关键词：原核表达抗血清
