付琳琳
- 作品数：38 被引量：104H指数：6
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- 两种方法纯化的抗体筛选华支睾吸虫模拟抗原表位的比较被引量：2
- 2010年
- 目的比较用不同方法纯化的IgG从噬菌体随机12肽库中筛选出的华支睾吸虫模拟抗原表位。方法用饱和硫酸铵沉淀法和饱和硫酸铵沉淀法加层析法(两步法)纯化提纯的华支睾吸虫病患者血清IgG筛选华支睾吸虫模拟抗原表位,扩增随机挑取噬菌斑并进行序列分析和免疫学鉴定。结果硫酸铵沉淀法纯化IgG筛选的20个噬菌体克隆,6个有不同的DNA插入序列,Western blot显示6个克隆均可与华支睾吸虫患者血清反应,斑点免疫金银染色法有3个克隆可被华支睾吸虫患者血清识别。两步法纯化IgG筛选的20个噬菌体克隆,9个有DNA插入序列,其中有2个序列相同;Western blot和斑点免疫金银染色法显示9个克隆均可与华支睾吸虫患者血清反应。结论两种方法纯化的IgG均筛选到了可与华支睾吸虫患者血清结合的模拟抗原表位,用两步法纯化IgG筛选的模拟抗原表位更具有潜在的诊断价值。
- 赵昆付琳琳杜文平郑葵阳汤仁仙曹磊磊刘宜升
- 关键词：华支睾吸虫模拟表位
- 快速斑点免疫金染色法与二种免疫金银染色法诊断日本血吸虫病的比较被引量：2
- 2003年
- 将日本血吸虫虫卵可溶性抗原点加于微孔滤膜 ,经预作用和封闭后 ,依次加入待检血清和金标记二抗 ,建立快速、敏感、特异性强 ,操作简便和经济实用的诊断日本血吸虫病的免疫学检测方法———快速斑点免疫金染色法 (R Dot IGS) ,该法无需银显影 ,检测过程仅为 15min。用 (R Dot IGS)、快速微量斑点免疫金银染色法 (RM Dot IGSS)和斑点免疫金银染色法 (Dot IGSS)同步检测 5 5份日本血吸虫病患者血清 ,三种方法的阳性率分别为 98. 18% ( 5 4/ 5 5 ) ,98. 18% ( 5 4/ 5 5 )和 10 0 % ;检测 5 0例健康人血清均为阴性 ;检测 10例肝吸虫病人和 10例肺吸虫病人血清 ,仅有 1份肝吸虫病人血清在RM Dot IGSS反应为阳性。检测结果证明R Dot IGS具有敏感特异、快速简便实用的特点 ,适用于日本血吸虫病的现场流行病学调查和临床快速诊断。
- 刘宜升杜文平郑葵阳付琳琳陈明
- 关键词：日本血吸虫病抗体
- 华支睾吸虫感染小鼠肝组织细胞因子动态变化的初步观察被引量：2
- 2011年
- 目的观察小鼠感染华支睾吸虫囊蚴后肝脏病理学特征及IFN-γ、IL-4、IL-12表达情况，探讨IFN-γ、IL-4、IL-12在免疫调控中的作用及意义。方法分别在感染后的不同时段剖杀小鼠，取其肝脏，采用石蜡切片，H—E染色，光镜观察肝脏病理变化情况；采用SABC免疫组织化学染色法测定IFN-γ、IL-4、IL-12在华支睾吸虫感染小鼠肝脏组织中表达水平的动态变化。结果H—E染色：感染后1天，小鼠肝脏无明显变化。感染后4天，小鼠肝脏轻度肿胀，肝脏汇管区表现为轻度炎症反应。随着病程的发展病理改变趋于严重。免疫组织化学结果：Th1细胞凶子IL-12和IFN-γ的表达呈现大致相同的趋势，在感染后1周开始上升，在4周达高峰，随后下降，至第12周仍高于正常组水平（P〈0．05）。而IL-4的表达水平则自感染后第1周开始持续上升，-直持续至感染后第12周实验观察结束，且随感染时问延长而明显升高。结论免疫组织化学检测结果提示细胞因子IFN-γ、IL-12和IL-4的阳性表达主要在汇管区、肝小叶坏死区的淋巴细胞和巨噬细胞的胞质，肝细胞未见阳性表达。华支睾吸虫感染的免疫应答发生了由Th1免疫应答向Th2免疫应答转变的趋势；华支睾吸虫病前期Th1细胞免疫应答占优势，后期Th2细胞免疫应答占优势。
- 曹磊磊付琳琳尤红娟孙伟徐田云孔德龙李向阳刘宜升郑葵阳
- 关键词：华支睾吸虫细胞因子IL-4IL-12
- 刚地弓形虫Peroxiredoxin基因的克隆及其融合蛋白的高效表达和纯化
- 2012年
- 目的克隆刚地弓形虫Prx基因,用IPTG诱导表达Prx融合蛋白并进行纯化。方法用PCR扩增目的基因片段并克隆至pGEX-6P-1载体,构建pGEX-6p-1/TgPrx原核表达载体;IPTG诱导表达Prx融合蛋白,表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析,GST亲和层析纯化融合蛋白。结果从弓形虫RH株DNA中扩增Prx基因,成功构建了弓形虫重组质粒pGEX-6p-1/TgPrx,并在大肠埃希菌(E.coli)中得到高效表达,表达的融合蛋白分子质量为51ku,该蛋白可被鼠抗弓形虫血清特异性识别。结论原核表达具有生物学活性的弓形虫重组Prx蛋白(rTgPrx),该蛋白有望用于弓形虫病免疫学检测。
- 李雪艳刘转转付琳琳颜超杜文平汤仁仙郑葵阳刘宜升
- 关键词：刚地弓形虫原核表达蛋白纯化
- ESA刺激华支睾吸虫感染小鼠脾细胞分泌Th1/Th2的动态观察被引量：7
- 2009年
- 目的观察华支睾吸虫分泌排泄抗原(ESA)刺激感染小鼠脾脏单个核细胞Th1/Th2细胞因子的动态变化。方法双抗体夹心ELISA法检测华支睾吸虫感染后不同时间小鼠脾细胞培养上清中IFN-γ、IL-4的动态变化。结果自感染后1w起IFN-γ的表达量开始上升,第4w达高峰(P<0.05),此后开始下降,至第12w水平接近正常。与IFN-γ不同,IL-4的表达自感染后第1w起持续升高,直至观察结束的12w(P<0.05)。结论初步结果提示华支睾吸虫感染后急性期转向慢性期的过程中Th1/Th2细胞因子的表达经历了由Th1优势应答向Th2优势应答的转变。
- 郭倩倩付琳琳汤仁仙夏惠郑葵阳刘宜升杜文平曹磊磊赵昆戴其锋
- 关键词：华支睾吸虫分泌排泄抗原TH1/TH2
- 快速斑点免疫金染色法与二种免疫金银染色法检测抗囊尾蚴抗体的比较研究
- 2002年
- 目的 建立敏感性高、特异性强 ,方法简便和经济实用的快速诊断囊尾蚴病的免疫学检测方法。方法将猪囊尾蚴液抗原点加于微孔滤膜 ,经预作用和封闭后 ,依次加入待检血清和金标记二抗 ,建立快速斑点免疫金染色法 (F -Dot-IGS)以检测囊尾蚴病患者血清抗体 ,同时用快速微量斑点免疫金银染色法 (RMDot-IGSS)和斑点免疫金银染色法 (Dot-IGSS)检测作为对照。结果 检测 4 0例囊尾蚴病患者血清抗体 ,阳性率 10 0 % ;检测 4 0例健康人血清均为阴性 ;除包虫病患者外 ,10例肝吸虫病患者、10例血吸虫病患者和 10例肺吸虫病患者血清未见交叉反应。结论 F -Dot-IGS敏感特异 ,快速简便 ,有较高的实用价值 。
- 郑葵阳杜文平郑霞付琳琳刘宜升
- 关键词：囊尾蚴病
- 华支睾吸虫模拟抗原表位的筛选和鉴定被引量：1
- 2007年
- 目的从噬菌体12肽库中筛选华支睾吸虫模拟抗原表位。方法应用噬菌体随机12肽库亲和筛选华支睾吸虫病患者混合血清IgG,经过3轮的淘筛,随机挑取蓝色噬菌斑进行扩增,以ELISA检测其免疫活性,挑选免疫活性较高的克隆进行序列分析及免疫学鉴定。结果8个阳性克隆测得6个DNA序列,Western-bloting显示6个单克隆噬菌体均可与华支睾吸虫患者血清反应,斑点免疫金银染色法有3个克隆可被华支睾吸虫患者血清识别。结论应用噬菌体肽库筛选技术可以获得华支睾吸虫模拟抗原表位。
- 余杨刘宜升付琳琳杜文平郑葵阳
- 关键词：华支睾吸虫噬菌体肽库抗原模拟表位
- 人体寄生蠕形螨感染的流行病学现况调查被引量：2
- 2011年
- 目的通过对在校学生面部蠕形螨感染情况的调查，了解蠕形螨感染与致病的关系，为采取有效措施预防群体蠕形螨感染提供依据。方法用刮取法和透明胶带粘贴法采集受检者两侧鼻翼处分泌物并在显微镜下检查，阳性者计数并进行虫种鉴定。结果共榆查928名在校学生，阳性85人，感染率9．2％（85／928）。男性中阳性36人，感染率为10．2％（36／353），女性中阳性49人，感染率为8．5％（49／575），男女感染率差异无统计学意义（P〉0．05）。蠕形螨感染中以毛囊蠕形螨感染为主；轻度感染率高于中、重度感染（P〈0．01）；刮取法检出率明显高于粘贴法（P〈0．05）；聚居者感染率高于家庭生活者（P〈0．01）；不同肤质的人蠕形螨感染率差异无统计学意义（P〉0．05）。结论在校学生蠕形螨感染较为普遍，应加强聚居学生蠕形螨感染的群防群治工作。
- 莫燕青李妍邵国庆顾龙飞袁光达孟冰陈洋杨波邢道荣郑葵阳刘宜升付琳琳
- 关键词：蠕形螨在校学生
- 华支睾吸虫脂肪酸结合蛋白基因的克隆、表达及免疫原性分析被引量：3
- 2015年
- 目的：克隆表达华支睾吸虫脂肪酸结合蛋白（ Clonorchis sinensisfatty acid binding protein，CsFABP），并对其免疫原性进行分析。方法根据编码CsFABP的已知基因序列设计合成一对引物，应用RT－PCR技术扩增编码CsFABP的基因片段。将扩增的CsFABP的基因片段克隆到原核质粒pET30a（＋）中，转化入大肠埃希菌（ E． coli） DH5α中，经含卡那霉素琼脂平板筛选，小量抽提质粒，经双酶切、PCR及测序鉴定阳性克隆。将阳性重组质粒转化入E．coli BL21中，经异丙基－β－D－硫代半乳糖苷（ IPTG）诱导表达，表达产物经十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ SDS－PAGE）、考马斯亮蓝染色、Western blot分析鉴定。结果经酶切、菌液PCR以及测序确认，成功构建重组质粒pET30a（＋）－CsFABP，并在E．coli BL21中高效表达。 Western blot试验证实表达的Cs-FABP能被特异的兔抗华支睾吸虫免疫血清识别。结论本研究成功构建重组质粒pET30a（＋）－CsFABP，获得的CsFABP表达蛋白质具有一定的反应原性。
- 张波张蓓蓓李波华慧李向阳刘转转颜超付琳琳汤仁仙郑葵阳
- 关键词：华支睾吸虫脂肪酸结合蛋白原核表达免疫原性
- TLR4在华支睾吸虫感染致小鼠肝纤维化作用的研究被引量：3
- 2014年
- 目的探讨TLR4基因在华支睾吸虫感染小鼠致肝纤维化中的作用。方法建立感染华支睾吸虫C3H/HeN(TLR4野生型)与C3H/HeJ(TLR4基因突变型)小鼠模型,在感染后1d、7d、2W、4W、8W、12W取小鼠肝脏,切片并进行HE和Masson染色,观察病理变化。结果 C3H/HeN小鼠肝脏大体病变从2W开始,随感染时间延长而加重;C3H/HeJ小鼠从2W开始,4W加重,至8W已明显减轻。观察HE、Masson染色肝脏切片示随感染时间的延长,C3H/HeN小鼠前期肝纤维化逐渐加重,至8W起趋于稳定;2W^12W纤维化评分均高于感染前(P<0.01)。C3H/HeJ小鼠肝纤维化评分2W升高,4W达高峰并显著高于感染前(P<0.01),至8W明显下降。与C3H/HeN比较,感染后2W、4W、8W、12W C3H/HeJ小鼠肝纤维化程度轻(P<0.01)。感染后7d,C3H/HeN小鼠的HE染色切片上可见嗜酸性粒细胞,4W达高峰,此后明显减少。感染后2W、4W、8W,C3H/HeJ小鼠嗜酸性粒细胞较C3H/HeN小鼠少(P<0.05)。结论 TLR4基因缺失可能在华支睾吸虫感染致肝纤维化过程起一定的阻制作用,从而减缓肝纤维化的进程。
- 张文娟付琳琳刘宜升
- 关键词：华支睾吸虫肝纤维化炎症
