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付云红: 作品数：11 被引量：21H指数：3; 供职机构：吉林农业大学动物科学技术学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金吉林省科技发展计划基金吉林省科技厅科技发展计划项目更多>>; 相关领域：农业科学生物学更多>>

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鲤春病毒血症病毒核蛋白的原核表达及初步鉴定: 2012年; 为原核表达鲤春病毒血症病毒(SVCV)核(N)蛋白,本研究采用RT-PCR方法扩增SVCV N蛋白基因(SVCV-N),克隆于原核表达载体pET-28a(+)中,并转化到大肠杆菌Rosetta中进行表达。SDS-PAGE分析表明,SVCV-N基因在大肠杆菌中获得高效表达,表达产物约47 ku,与预期相符。Western blot检测表明,该重组蛋白可以被SVCV阳性血清所识别。; 李月红付云红王永志苗富春扈荣良陈萍; 关键词：鲤春病毒血症病毒原核表达

鱼类传染性造血器官坏死病临床诊断及检测被引量：3: 2010年; 鱼传染性造血器官坏死病（Infectious haematopoietic necrosis of fish,IHN）。是一种毒力很强的弹状病毒所引起的的急性、全身性的严重传染病。该病主要侵害虹鳟,包括硬头鳟、大鳞大马哈鱼、红大马哈鱼和大西洋大马哈鱼,银大马哈鱼（银鳟）在自然条件下对IHN病毒有抵抗力。; 姜红李月红吴东明付云红; 关键词：传染性造血器官坏死鱼类大马哈鱼弹状病毒 FISH 传染病

鲤鱼春季病毒出血症病毒G基因在昆虫细胞中的表达与鉴定: 2012年; 采用RT-PCR方法扩增鲤鱼春季病毒出血症病毒(SVCV)的糖蛋白(G)基因,将PCR产物插入到杆状病毒转移载体pFastBac 1中,获得重组转移载体pFastBac 1-G,将其转化入含有Bacmid的DH10Bac感受态细胞中,经3种抗性和蓝白斑筛选,获得含有G基因的重组穿梭质粒rBacmid-G。在脂质体转染试剂的介导下,将rBacmid-G转染sf9细胞,获得重组杆状病毒。提取重组杆状病毒基因组,用M13引物PCR鉴定。对重组杆状病毒感染的sf9细胞,通过电镜观察、SDS-PAGE、Western blotting进行检测,结果表明,重组蛋白在sf9细胞中获得正确表达,相对分子质量约58 000,与鼠抗SVCV阳性血清具有良好的反应原性。本试验为研究鲤鱼春季病毒出血症病毒G蛋白的生物学活性和亚单位疫苗的研制奠定了基础。; 李月红付云红陈奇王永志扈荣良; 关键词：G基因杆状病毒表达

鲤鱼上皮细胞在不同培养条件下的生长状况及与哺乳动物细胞的比较被引量：2: 2010年; [目的]比较鲤鱼上皮细胞在不同培养条件下的生长状况。[方法]对不同培养基、温度、胰蛋白酶浓度、CO2培养条件下鲤鱼上皮细胞(EPC)的生长状况进行观察并进行指标测定。[结果]EPC细胞在培养基M199、温度20～25℃、胰蛋白酶浓度0.05%～0.10%条件下生长较好,对CO2的需求不大。[结论]该研究结果可为鲤鱼上皮细胞最优培养条件的筛选提供依据。; 崔莹莹吴东明李月红付云红

鲤鱼鳍条细胞的原代培养被引量：1: 2011年; 通过对鲤鱼鳍条细胞进行原代培养,摸索出最佳的培养条件。采用组织块培养法,取一小块鳍条组织在不同培养基、温度、pH、CO2等培养条件下进行培养,对其生长状况进行观察。培养48 h可见组织块周围有细胞迁出,并形成生长晕,培养1周可形成单层细胞,主要由上皮样细胞和少量成纤维样细胞组成。本研究初步确立了鲤鱼的鳍条细胞培养条件为：培养基为M199,培养温度为25~27℃,pH为7.2~7.6,CO2浓度为5%,原代培养血清浓度为15%~20%,连续培养12 d后可得到纯化的鳍条细胞。; 吴东明李月红付云红苗富春; 关键词：鲤鱼原代培养

鲤鱼春季病毒血症病毒磷蛋白基因的克隆与原核表达被引量：2: 2012年; 【目的】克隆鲤鱼春季病毒血症病毒(SVCV)的磷蛋白(P蛋白)基因,并对其进行原核表达,为进一步制备SVCV P蛋白单克隆抗体及建立新的SVCV诊断方法奠定基础。【方法】采用RT-PCR方法扩增SVCV P蛋白基因,将其克隆入pET-28a(+)载体中,获得原核重组表达质粒pET28-P,进行原核表达。将该重组原核表达质粒转化至大肠杆菌Rosetta感受态细胞中,用0.4mmol/L IPTG进行诱导表达,用镍亲和层析试剂盒对表达产物进行纯化,分别用SDS-PAGE和Western Blotting方法对表达产物进行鉴定。【结果】成功克隆了SVCV P蛋白基因,该基因长度为933bp。成功构建了原核重组表达质粒pET28-P,其诱导表达产物分子质量约为37ku;表达的重组P蛋白可被SVCV阳性血清所识别。【结论】成功克隆了SVCV P蛋白基因,获得了分子质量约为37ku的重组P蛋白。; 李月红付云红Julia Pridgeon宋琳张东鸣; 关键词：鲤春病毒血症病毒原核表达

狂犬病病毒糖蛋白的杆状病毒表达及其免疫原性研究被引量：5: 2012年; 构建表达狂犬病病毒SRV9株糖蛋白(GP)的重组杆状病毒,评价其表达出的SRV9株糖蛋白对小鼠免疫效果。将狂犬病病毒SRV9株GP基因的完整开放阅读框克隆入穿梭质粒Bacmid中,构建重组穿梭质粒Bacmid-G,以此转染Sf9细胞。对病变细胞培养物进行电镜观察,获得正确重组杆状病毒后,通过Western-blot、IFA及小鼠免疫实验鉴定表达产物的免疫反应性及免疫原性。正确构建重组穿梭质粒Bacmid-G;获得表达SRV9株糖蛋白的重组杆状病毒,其表达产物具有良好免疫原性;表达产物接种小鼠可诱导其产生抗狂犬病病毒中和抗体,中和抗体达到保护水平的比例为100%。本实验所获得的重组杆状病毒表达出的SRV9株糖蛋白具有较好的免疫原性,可诱导小鼠产生保护性中和抗体,该实验为进一步开发狂犬病亚单位疫苗奠定了基础。; 陈奇张守峰刘晔付云红孙程龙杨洋宫婷宋菲菲扈荣良; 关键词：狂犬病病毒糖蛋白杆状病毒免疫

致病性嗜水气单胞菌气溶素基因PCR检测方法的建立被引量：3: 2010年; [目的]建立一种基于PCR的致病性嗜水气单胞菌的检测方法。[方法]采用平板划线法从患病鲫鱼病灶部位分离、纯化获得嗜水气单胞菌,采用CTAB法提取DNA,根据GenBank已经登录的致病性嗜水气单胞菌气溶素基因保守序列设计引物P1和P2,并以P1、P2为引物对其进行PCR扩增,将测序结果在Blast上进行比对分析。[结果]PCR扩增得到一条约540 bp的条带,Blast分析表明该基因与GenBank登录的气溶素基因的同源性达95.67%。[结论]试验建立的致病性嗜水气单胞菌气溶素基因PCR检测方法简单、可行。; 葛晨霞李月红张培军吴东明付云红; 关键词：嗜水气单胞菌 PCR

5种外来病病毒多重RT-PCR检测方法的建立: 2014年; 通过GenBank中对小反刍兽疫病毒N蛋白基因、亨德拉病毒及尼帕病毒H蛋白基因、西尼罗河热病毒PrM蛋白基因和非洲猪瘟病毒P72基因这5种外来病病毒的主要基因的分析比较,选择相应基因的保守序列进行人工合成,并对每段基因设计2对引物,扩增片段大小均在350-550bp之间。通过对条件的反复优化,建立了1种能够同时检测到这5种病原的并联PCR/RT-PCR方法。结果显示,该方法最低可检测到10-5 mg/L的病毒的DNA/cDNA,而且特异性强、重复性好。在45份猪样品及56份蝙蝠样品的检测中,只有阳性对照出现了目的条带,而其他均未出现目的条带。这说明本研究建立的5种主要外来病病毒并联PCR/RT-PCR的检测方法具有灵敏度高、特异性好的特点,可用于ASFV、PPRV、HeV、NiV和WNV的预防、检测及扑灭。; 苗富春付云红张守锋刘晔扈荣良李月红; 关键词：ASFV PPRV NIV WNV

山羊痘病毒p32基因的克隆、表达及单克隆抗体制备被引量：4: 2011年; 本研究旨在表达山羊痘病毒p32蛋白、制备p32蛋白单克隆抗体。通过PCR克隆p32基因,连接到pMD18-T并测序;酶切、连接后将p32基因克隆到pET28a(+)中,将重组质粒转化大肠杆菌Rosseta,在IPTG诱导下成功表达p32蛋白;利用亲和层析法纯化p32蛋白,用纯化蛋白免疫BALB/c小鼠后制备p32蛋白单克隆抗体,获得22株识别重组蛋白的单抗,通过间接免疫荧光鉴定,其中3株能识别病毒的p32蛋白。山羊痘病毒p32蛋白的表达和单克隆抗体的制备为山羊痘病毒抗原、抗体检测提供了生物材料。; 王永志苏颖米丽娟付云红范志强扈荣良赵玉民; 关键词：山羊痘病毒 P32基因单克隆抗体

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