于蕊
- 作品数：35 被引量：29H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家杰出青年科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 人破伤风基因工程中和抗体的研究进展被引量：1
- 2013年
- 破伤风是一种既古老又年轻的疾病。2300年前，希腊医生希波克拉底首次描述了外伤引起破伤风感染病例。我国医书《五十二病方》、《黄帝内经》等均对破伤风有过描述。破伤风疫苗及抗毒素等的成功研制虽然大大降低了破伤风感染病死率，但作为世界上已知最毒的毒素之一，自然灾害、生物恐怖战剂以及治疗困难等使破伤风仍然在一些国家和地区威胁着人们的健康。目前破伤风的致病机制、重组疫苗及抗体的研究是破伤风研究的主要领域，尤其是人破伤风基因工程中和抗体的研制将为破伤风感染提供更加安全、廉价的治疗手段。目前还没有一种人破伤风中和抗体药物获得FDA认证。本文从破伤风感染的威胁、致病机制、中和抗体治疗、抗原表位研究和抗体水平检测等方面，对破伤风中和抗体的研究进行概述。
- 王晗于蕊于长明陈薇
- 关键词：破伤风感染中和抗体基因工程《五十二病方》抗体水平检测希波克拉底
- 一种抗人B细胞淋巴瘤的单链双特异性抗体
- 本发明公开了一种抗人B细胞淋巴瘤的单链双特异性抗体。用3个链间连接肽(Gly<Sub>4</Sub>Ser)<Sub>3</Sub>将抗人B细胞淋巴瘤CD20抗体的轻链可变区(VL<Sub>CD20</Sub>)和重链可...
- 陈昭烈于蕊李世崇吴本传刘红叶玲玲刘兴茂王启伟
- 文献传递
- 破伤风毒素受体结合区Hc在大肠杆菌中的高效表达及应用
- 本发明涉及一种通过核苷酸序列优化使破伤风毒素受体结合区Hc在大肠杆菌中获得高效可溶性表达的方法。根据国内破伤风梭菌C.Tetani强毒株CMCC64008株的测序结果，对破伤风毒素受体结合区Hc序列进行分析优化，优化后的...
- 陈薇于蕊侯利华于长明刘树玲任军房婷
- 抗A型肉毒毒素的人源性中和抗体及其应用
- 本发明公开了两种抗A型肉毒毒素的人源性中和抗体，其中一种抗体的轻链可变区基因如SEQ ID No.1所示，重链可变区基因如SEQ ID No.2所示；另一种抗体轻链可变区基因如SEQ ID No.3所示，重链可变区基因如...
- 于蕊俞炜源孙志伟王双余云舟林建波
- 文献传递
- 外源表达破伤风毒素受体结合区Hc的高密度发酵方法
- 本发明公开了一种外源高表达破伤风毒素受体结合区Hc的发酵方法，步骤如下：(1)取含有破伤风毒素受体结合区Hc核苷酸序列的工程菌，培养至OD<Sub>600</Sub>值为3.0‑5.0，得种子液；(2)取种子液，加入发酵...
- 魏琪于蕊张骞徐俊杰陈薇
- 文献传递
- 抗CD3/抗CD20双特异性单链抗体介导的B淋巴瘤细胞体外裂解作用
- 2006年
- 在构建并成功表达抗CD3/抗CD20双特异性单链抗体(bscCD3×CD20)的基础上,对其在体外介导T淋巴细胞杀伤Ramous B淋巴瘤细胞的生物活性进行了分析。Annexin V/PI(AV/PI)染色和形态学观察及扫描电镜分析表明bscCD3×CD20介导的B淋巴瘤细胞体外裂解作用是通过先诱导靶细胞凋亡而继发坏死、裂解的方式实现的。非放射性细胞毒性分析表明bscCD3×CD20介导的T淋巴细胞杀伤活性随抗体浓度、反应时间和效靶比的升高而增加。在抗体浓度为5μg/mL、作用时间为24h、效靶比为10∶1时,杀伤活性最高可达87·3%。采用美国SuperArray人细胞凋亡芯片检测细胞杀伤起始阶段细胞凋亡相关基因的表达水平变化,许多凋亡相关基因的表达均发生了不同程度的上调或下调,其中ATM基因表达升高了187倍,p53基因升高了15倍,提示ATM-p53途径可能是bscCD3×CD20介导T细胞诱导B淋巴瘤细胞凋亡的主要途径。
- 于蕊李世崇吴本传刘红叶玲玲刘兴茂王启伟陈昭烈
- 肉毒毒素中和抗体的研究进展被引量：3
- 2008年
- 肉毒毒素是目前已知毒性最强的细菌蛋白质,极少量便可以致人死亡,我国每年都有散发病例出现,并且它极有可能被用于恐怖行动或被一些国家用作生物战剂。肉毒毒素中和抗体是肉毒毒素中毒后惟一有效的药物。与马源的抗毒素血清相比,重组基因工程中和抗体具有很多优势,是目前肉毒毒素预防和治疗研究的主要方向。简要综述了肉毒毒素基因工程中和抗体研究现状、保护性抗原选择、体内外中和活性检测方法及研发难点、解决方法等。
- 于蕊孙志伟俞炜源
- 关键词：肉毒毒素中和抗体
- 人破伤风免疫噬菌体单链抗体库的构建及体外亲和筛选被引量：3
- 2013年
- 目的构建人破伤风免疫噬菌体单链抗体库,筛选抗破伤风毒素重链C端(TeNT-Hc)的特异性单链抗体(scFv)。方法利用RT-PCR从5名破伤风抗体滴度较高的健康献浆员外周血淋巴细胞中获得全套人破伤风抗体VH和VL基因,经过重叠PCR将VH和VL基因连接获得scFv片段。将scFv片段克隆至pCANTAB5E载体,电转化大肠TG1感受态菌,获得抗体库。以TeNT-Hc为抗原对抗体库进行3轮筛选,获得特异性人源性抗TeNT-Hc单链抗体。scFv由pET32a(+)表达载体表达,产物包涵体采用HisTrap FF预装柱纯化并透析复性。采用非竞争酶免疫实验法测定scFv亲和常数(affinity constant,KD值)。检测scFv抑制TeNT-Hc与神经节苷脂GT1b结合的体外中和活性,计算抑制率。结果构建库容量为1×108的人破伤风免疫噬菌体单链抗体库,经过筛选获得3株特异性较好的人源性抗TeNT-Hc单链抗体。原核表达结果显示,3株scFv均以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的40%～45%。包涵体经洗涤、纯化和复性后,scFv均保持了与TeNT-Hc的特异结合活性,1 L培养物经纯化后可获得4～6 mg scFv蛋白。亲和力测定结果,27G、22D和S-4-7H-scFv的KD值分别为(1.25×10-7),(2.31×10-7)和(1.97×10-7)mol/L。3株抗体对TeNT-Hc与神经节苷脂GT1b结合的抑制率分别为64.5%,58.6%和51.5%。结论人破伤风免疫噬菌体单链抗体库的构建及具有体外中和活性的特异性抗TeNT-Hc单链抗体的获得,为人破伤风基因工程中和抗体的制备奠定了良好基础。
- 王晗于蕊张晓鹏任军谢娜樊红艳张金龙房婷于长明陈薇
- 关键词：破伤风破伤风毒素单链抗体逆转录聚合酶链反应细菌噬菌体
- B型肉毒毒素保护性抗原Hc在大肠杆菌中的可溶性高表达被引量：8
- 2008年
- 目的:通过序列优化及表达条件改进,在大肠杆菌中高效可溶性表达B型肉毒毒素保护性抗原Hc(Bont/B-Hc)。方法:对Bont/B-Hc基因片段优化,用大肠杆菌常用密码子替换稀有密码子,并将(G+C)含量由76.2%降至56.3%;人工合成多条具有重叠互补序列的寡核苷酸片段,采用重叠延伸PCR方法获得了Bont/B-Hc的全长基因,并构建了原核可溶性表达载体;将经酶切和测序鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG诱导Bont/B-Hc的表达并进行纯化及Western印迹鉴定。结果和结论:目的蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了可溶性高表达,占菌体裂解液上清总蛋白的26.7%,表达量达到30mg/L,是目前国内外已知表达的最高水平;经Ni柱一步纯化后,目的蛋白纯度可达到80.3%,为肉毒毒素中和抗体的制备及亚单位疫苗的研究奠定了基础。
- 于蕊王双余云舟俞炜源孙志伟
- 关键词：B型肉毒毒素
- 抗CD3/抗CD20双特异性单链抗体的表达、鉴定及活性分析被引量：3
- 2005年
- 设计并合成多个 6 0bp左右的DNA小片段 ,经重叠延伸PCR扩增获得 16 4 0bp的抗CD3 抗CD2 0双特异性单链抗体完整基因片段 ,将其克隆入真核定点表达载体pcDNA5 FRT中 ,脂质体法转染Flp_InTM CHO细胞 ,获得稳定表达细胞株 ,目的蛋白在上清中的表达量约为 30 0 μg L。采用Ni_NTA柱对其进行了纯化 ,经SDS_PAGE蛋白电泳及Western_blot分析结果表明 ,含组氨酸标签的目的蛋白的分子量约为 70kD ,与预期结果一致。活细胞间接免疫荧光实验和玫瑰花环实验证明抗CD3 抗CD2 0双特异性单链抗体具有与Ramous(CD2 0 +)及Jurkat(CD3+)细胞特异性结合的活性。光学显微镜下可以观察到抗CD3 抗CD2 0双特异性单链抗体可以有效介导人外周血淋巴细胞裂解B淋巴瘤细胞Ramous。以上工作为进一步了解抗CD3 抗CD2 0双特异性单链抗体的体内体外生物学活性奠定了基础。
- 于蕊李世崇吴本传刘红叶玲玲陈昭烈
- 关键词：双特异性单链抗体坚定活性分析
