黄爱华
- 作品数：9 被引量：7H指数：2
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- 脐血间充质干细胞的培养鉴定和慢病毒载体介导的GDNF在脐血间充质干细胞中的表达(摘要)
- 目的:体外分离和培养人脐血间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells from Umbilical Cord Blood,UCB-MSCs),对其生物学特性进行鉴定。将含有胶质源性神经营养因子(Glial...
- 梁庆成黄爱华
- 文献传递
- 复制性衰老减弱人胚骨髓间充质干细胞静脉移植治疗大鼠脑梗死的疗效
- 2015年
- 目的比较不同代次的人胚胎骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs)移植治疗大鼠脑梗死模型的疗效,包括梗死体积和行为学改变以及疗效产生机制,包括对梗死区激活的小胶质细胞的抑制、产生营养性细胞因子上的差别。方法体外培养人胚胎骨髓来源间充质干细胞,并通过连续传代制作复制性衰老模型。分别收集传第4代和第10代的MSC用于移植。制作大鼠大脑中动脉远端阻塞(distal middle cerebral artery occlusion,d MCAO)脑梗死模型。实验分假手术组(无脑梗死)、缺血对照组〔脑梗死模型给予0.9%(质量分数)氯化钠注射液〕和MSC细胞治疗组。移植组在造模后1 h经尾静脉移植1×106不同代次的BM-MSC,移植后2、4 d进行行为学评价;移植后2 d部分动物进行梗死体积测定;部分动物灌注取脑,免疫组织化学法计数并对比皮质梗死区激活的小胶质细胞CD68染色的数量;另一部分动物于移植4 d用ELISA法检测梗死灶区域大鼠来源的脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)、胰岛素样生长因子(insulin like growth factor-1,IGF-1)的浓度。结果只有第4代人BM-MSC能够有效减少梗死体积,并在移植后第2天改善脑梗死模型动物的神经功能。移植后第4天,仅第4代BM-MSC移植组脑内BDNF、IGF-1蛋白浓度明显高于缺血对照组,小胶质细胞激活明显低于对照组;第10代MSC对营养性细胞因子和小胶质细胞的影响和缺血对照组相比,差异无统计学意义。结论脑梗死后1 h移植早代次的BM-MSCs会产生减小梗死体积、改善动物行为的作用,但晚代次细胞的作用不明显,原因可能和晚代次细胞促进脑内神经营养因子表达,抑制脑内小胶质细胞激活的能力下降有关。
- 黄爱华张萍萍张斌马步青关云谦周逸丹
- 关键词：脑梗死间充质干细胞小胶质细胞
- 2型糖尿病并发牙周感染与解偶联蛋白3基因的关系研究
- 2011年
- 目的探讨2型糖尿病并发牙周感染与解偶联蛋白3(UCP3)基因的关系。方法将80例2型糖尿病患者根据是否并发牙周感染分为两组,用聚合酶链反应(PCR)法对两组UCP3基因多态性进行分析并比较。结果并发感染组Ⅲ、D、DD的基因频率分别为39.0%、51.2%、9.8%,与非并发感染组比较,差异无统计学意义;等位基因频率两组间亦差异无统计学意义。结论 2型糖尿病并发牙周感染与解偶联蛋白3基因之间未见明显的关系。
- 周逸丹张萍萍黄爱华
- 关键词：2型糖尿病牙周感染解偶联蛋白基因
- Bmi-1基因对人胚胎纹状体来源神经干细胞的自我更新和增殖的作用
- 2010年
- 目的探讨人类纹状体来源的神经干细胞(NSCs)中,Bmi-1基因是否参与自我更新和增殖的维持。方法用human-Bmi-1干扰病毒和绿色荧光蛋白(GFP)对照病毒分别转染NSC,镜下观察转染效率。于转染后0h、48h、72h和168h4个时间点收集细胞,用实时定量聚合酶链反应检测Bmi-1干扰组与同时间点GFP对照病毒转染组细胞中的Bmi-1基因的相对转录水平,1周后比较human-Bmi-1干扰病毒和GFP对照病毒转染后细胞的克隆形成数和新生神经球直径。结果经Bmi-1干扰病毒和GFP对照病毒转染后48h,显微镜下观察见细胞均带有绿色荧光,转染效率超过90%。与转染后0h的Bmi-1基因的相对转录水平(107.3±8.0618)%相比,48h、72h和168h的Bmi-1基因的相对转录水平下降,分别为(32.7±9.74)%、(24.4±12.15)%和(32.7±10.39)%,差异有统计学意义(P<0.05)。经Bmi-1干扰后,细胞的克隆形成数和新生神经球直径都显著下降。结论 Bmi-1基因正向调控人类纹状体来源的NSC的自我更新和增殖,当细胞内的Bmi-1转录水平下降时,细胞的克隆形成数和新生神经球直径也显著下降。
- 黄爱华梁庆成吉慧军王旸关云谦
- 关键词：神经干细胞增殖实时定量聚合酶链反应
- 慢病毒载体介导的NEP1-40在人脐血间充质干细胞中的表达被引量：1
- 2013年
- 背景:近年来研究证明间充质干细胞具有高度增殖和多向分化潜能,是一种理想的组织工程种子细胞,能高效转染表达外源性目的基因,在基因治疗领域具有广阔的应用前景。目的:将含有NEP1-40基因的慢病毒载体转染脐血间充质干细胞,评价基因转染后脐血间充质干细胞生物学功能变化,观察NEP1-40在脐血间充质干细胞中的表达。方法:体外分离和培养人脐血间充质干细胞,流式细胞仪检测细胞表面标记,并对其生物学特性进行鉴定。同时将NEP1-40基因克隆入慢病毒载体,包装出病毒上清,以不同拷贝数转染脐血间充质干细胞。结果与结论:实验通过密度梯度离心法成功在体外分离和培养脐血间充质干细胞,诱导其向脂肪细胞分化,流式细胞仪检测结果显示脐血间充质干细胞中CD90、CD73及CD105蛋白阳性,不表达CD14、CD34、CD45、CD19、HLA-DR、Stro-1及CD106蛋白;real-timePCR检测发现其NEP1-40mRNA表达水平与转染拷贝数有关,转染拷贝数越高,NEP1-40的表达量越高,此外转染NEP1-40后的脐血间充质干细胞中可检测到NEP1-40蛋白,提示NEP1-40基因转染后脐血间充质干细胞原有的生物学功能无明显影响。
- 黄爱华周逸丹张萍萍王赛英林媛媛葛婷爱陈赞
- 关键词：干细胞间充质干细胞慢病毒载体NEP1-40
- miR-27b-3p对脓毒症肺内皮细胞YAP信号表达的调控机制研究被引量：1
- 2021年
- 目的探讨微小RNA 27b-3p(miR-27b-3p)对脓毒症模型小鼠肺内皮细胞Yes相关蛋白(YAP)信号的调控机制。方法将40只C57BL/6雄性小鼠按照随机数字表法分为四组,对照组、盲肠结扎穿孔(CLP)组、miRNA类似物(mimic NC)组、miR-27b-3p类似物(miR-27b-3p mimic)组。利用CLP法构建脓毒症模型小鼠,miR-27b-3p组小鼠通过尾静脉注射miR-27b-3p mimic,mimic NC组小鼠尾静脉注射mimic NC阴性对照物。分离小鼠原代肺内皮细胞,荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞YAP、细胞间粘附分子(ICAM)、选择素(E-selectin)miR-27b-3p mRNA表达水平;数据库PITA预测调控YAP的miRNA;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测细胞YAP、ICAM、E-selectin表达及p65活化水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清液肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)水平。结果与对照组比较,CLP组小鼠原代肺内皮细胞YAP、ICAM、E-selectin mRNA表达明显升高[YAP:(3.21±0.25)比(1.00±0.12);ICAM:(2.36±0.31)比(1.00±0.12);E-selectin:(1.98±0.11)比(1.00±0.12),P<0.05];miR-27b-3p表达明显下调[(0.31±0.15)比(1.00±0.11),P<0.05];数据库PITA预测miR-27b-3p与YAP mRNA 3'UTR序列存在6个完全互补配对碱基UGUGAA;Western blot结果显示,与对照组比较,CLP组YAP、ICAM、E-selectin等蛋白水平明显升高,同时p-p65磷酸化活化水平明显升高;与mimic NC组比较,miR-27b-3p mimic组YAP表达量明显下调,ICAM、E-selectin表达水平明显升高,同时p65磷酸化水平升高;ELISA结果显示,与对照组比较,CLP组小鼠内皮上清液TNF-α、IL-6水平升高[TNF-α:(4.23±0.35)pg/mL比(1.00±0.52)pg/mL;IL-6:(7.43±0.83)pg/mL比(1.00±0.52)pg/mL,P<0.05];与mimic NC组比较,miR-27b-3p mimic组小鼠内皮上清液TNF-α、IL-6的含量明显升高[TNF-α:(8.52±0.46)pg/mL比(4.15±0.24)pg/mL;IL-6:(10.16±0.62)pg/mL比(7.85±0.57)pg/mL,P<0.05]。结论脓毒症诱导内皮低表达miR-27b-3p,促进YAP在脓毒症内皮细胞进一步高表达,从而抑制负向反馈调控内皮炎症信号�
- 黄爱华王旸
- 关键词：小鼠脓毒症炎症
- PDE4D、ALOX5AP与缺血性脑卒中的相关性研究被引量：1
- 2011年
- 目的探讨磷酸二酯酶4D(PD E4D)单核苷酸多态性(SN P45)、5-脂氧合酶激活蛋白(ALO X 5AP)单核苷酸多态性(SG13S114)基因突变与缺血性脑卒中的关系。方法选取50例急性脑梗死患者为病例组,52例正常对照组,采用聚合酶链反应(PC R)、琼脂糖凝胶电泳技术、限制性内切酶进行酶切以及直接测序分析两组单核苷酸多态性PD E4D基因的SN P45和ALO X 5AP SG 13S114基因,比较两组数据并进行分析。结果 SN P45采用M aeIII GTN AC-限制性内切酶进行酶切后,结果显示对照组中42例能够被切成分子量不同的条带,病例组中38例,病例组和对照组中的大部分人是能被酶切开的,经统计学分析,脑卒中患者SN P45位点的突变率为24%,正常对照组为19%,两组的突变率并没有统计学意义。病例组出现ALOX 5AP基因SG 13S114杂合型(A/T)的(13例,占26%)频率高于正常对照组(11例,占21%),但是两组的差异没有统计学意义(P>0.05)。结论急性脑梗死患者PD E4D基因SN P45基因多态性与缺血性脑卒中的发生无关。急性脑梗死患者ALO X 5AP基因SG 13S114基因多态性与缺血性脑卒中的发生无明显相关性。
- 韩晶梁庆成吴云杨春晓黄爱华刘寅
- 关键词：缺血性脑卒中单核苷酸多态性
- 人脐血间充质干细胞培养鉴定和慢病毒载体介导胶质源性神经营养因子在脐血间充质干细胞中的表达被引量：2
- 2010年
- 目的体外分离和培养人脐血间充质干细胞(UCB-MSCs),对其生物学特性进行鉴定。用含有胶质源性神经营养因子(GDNF)的慢病毒载体转染UCB-MSCs,初步评价基因转染后UCB-MSCs生物学功能变化,探讨GDNF在UCB-MSCs中的表达水平。方法采用密度梯度离心法从脐血中分离单核细胞,通过贴壁培养和控制消化时间得到形态较均一的长梭形细胞,流式细胞仪(FACS)检测其细胞表面标记,诱导其向脂肪方向分化,对UCB-MSCs的生物学特性进行鉴定。将GDNF基因克隆入慢病毒载体,包装出病毒上清,以不同拷贝数转染UCB-MSCs,通过检测细胞表面抗原,观察细胞形态学和增殖分化能力的差异,初步评价基因转染对细胞生物学功能的影响。采用酶联免疫吸附实验(ELISA)和实时定量多聚合酶链反应(real-time PCR)技术分别测定不同转染组GDNF的蛋白及mRNA表达水平。结果采用密度梯度离心法成功在体外分离和培养出UCB-MSCs,并诱导其向脂肪细胞分化。FACS检测结果显示,UCBMSCs中CD90、CD73及CD105蛋白表达阳性,CD14、CD34、CD45、CD19、HLA-DR、Stro-1及CD106蛋白表达阴性。ELISA和real-time PCR检测结果显示,用含GDNF基因的慢病毒载体转染UCB-MSCs后,其GDNF蛋白分泌量和mRNA表达水平与转染拷贝数有关,转染拷贝数越高,GDNF表达量越高。GDNF基因转染后UCB-MSCs的原有生物学功能无明显改变。结论成功在体外分离和培养出UCB-MSCs。用含有GDNF基因的慢病毒载体转染UCB-MSCs可通过转染拷贝数在一定水平上控制GDNF蛋白分泌量和mRNA表达水平,使其持续高表达GDNF。
- 黄爱华王淑艳梁庆成吴云关云谦张愚陈赞
- 关键词：脐血间充质干细胞胶质源性神经营养因子慢病毒载体
- 人胚胎骨髓间充质干细胞和单个核细胞静脉移植治疗大鼠脑梗死疗效的比较被引量：2
- 2016年
- 目的比较人胚胎骨髓间充质干细胞(MSC)和单个核细胞(MNC)经静脉移植后对脑梗死的疗效。方法采用大脑中动脉远端凝断法制造大鼠脑梗死模型。将大鼠分为假手术组、缺血对照组(造模后经尾静脉给予生理盐水)、MSC组(造模后经尾静脉给予MSC)和MNC组(造模后经尾静脉给予MNC)。移植后2 d,取脑进行梗死体积测定;移植后1、3、5、7 d,采用肢体放置测验和平衡木实验进行行为学评价;移植后7 d,采用免疫荧光法测量梗死周边纹状体区激活的小胶质细胞Iba-1的染色丰度;移植后3、7 d,采用ELISA检测移植后梗死灶周边纹状体区胶质源性神经营养因子(GDNF)和脑源性神经营养因子(BDNF)的蛋白水平。结果缺血对照组、MSC组和MNC组的相对梗死体积分别为(37.85±4.40)%、(33.41±3.82)%和(30.23±3.63)%,其中,MSC组(t=2.100,P=0.034)和MNC组(t=2.109,P=0.0009)显著低于缺血对照组,MNC组显著低于MSC组(t=1.743,P=0.043)。移植后1 d,缺血对照组的肢体放置成功率为(4.32±0.71)%,明显低于假手术组的(9.73±0.36)%(t=2.178,P=8.61×10-11);MSC组和MNC组分别为(5.09±0.62)%(t=2.1009,P=0.024)和(5.90±0.68)%(t=2.1008,P=0.0001),明显高于缺血对照组;MNC组又明显高于MSC组(t=2.1009,P=0.0165)。MSC组和MNC组损伤对侧前肢错步数占总步数的百分比分别为(5.56±0.86)%(t=2.120,P=0.020)和(5.13±0.95)%(t=2.131,P=0.003),明显低于缺血对照组的(6.47±0.61)%。移植后3 d,MNC组的肢体放置成功率为(6.91±1.10)%,明显高于缺血对照组的(5.80±0.82)%(t=2.110,P=0.027);MSC组为(6.30±0.77)%,与缺血对照组差异无统计学意义(t=2.101,P=0.199)。MNC组损伤对侧前肢错步数占总步数的百分比为(4.34±0.58)%,明显低于缺血对照组的(5.31±0.65)%(t=2.100,P=0.006)和MSC组的(4.92±0.53)%(t=2.100,P=0.041),MSC组与缺血对照组差异无统计学意义(t=2.109,P=0.139)。假手术组、缺血对照组、MSC组和MNC组的Iba-1相对丰度分别为1.00+0.00、1.72±0.21、1.
- 黄爱华张萍萍张斌马步青关云谦周逸丹
- 关键词：脑梗死间充质干细胞单个核细胞炎症小胶质细胞
