魏静
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 供职机构：安徽医科大学附属省立医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金安徽省卫生厅医学科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Toll样受体信号通路在调控树突状细胞成熟中的作用研究被引量：2
- 2014年
- 目的探讨TLR信号通路在调控树突状细胞(DC)熟过程中的作用。方法用密度梯度离心法从人外周富集血中分离单个核细胞(PBMC),以GM-CSF和IL-4体外诱导成未成熟DC(imDC),用电穿孔法把A549的总RNA转染入imDC,分别用传统细胞因子鸡尾酒(IL-1β、IL-6、TNF-α、PGE2)和改良细胞因子鸡尾酒(IL-1β、IL-6、TNF-α、PGE2、polyⅠ∶C、CpG ODN)刺激DC的成熟。实验分为4组,对照组:GM-CSF、IL-4;传统组:传统细胞因子鸡尾酒;改良1组:IL-1β、IL-6、TNF-α、polyⅠ∶C、CpG ODN);改良2组:IL-1β、IL-6、TNF-α、PGE2、polyⅠ∶C、CpG ODN。用RTPCR法检测RNA的转染效率,流式细胞术检测DC和DC致敏T细胞的表面标志,ELISA法检测IL-12的分泌水平,MTT法检测T细胞的增殖。结果 1)RT-PCR检测:电穿孔法能使A549的总RNA成功转入DC,并使DC表达组织多肽特异性抗原(TPS)、癌胚抗原(CEA)和细胞角蛋白19片段(Cyfra21-1)等肿瘤抗原。2)流式检测:CD83各组表达率分别为(15.17±1.61)%、(64.33±7.58)%、(60.26±4.18)%和(82.89±3.06)%,CD1a表达率分别为(25.74±6.06)%、(69.37±8.16)%、(61.66±5.82)%和(86.07±5.63)%(P<0.05),各组CD8+T细胞比例分别为(36.43±3.15)%、(61.91±2.33)%、(54.81±2.55)%和(66.78±2.74)%(P<0.05)。3)各组IL-12的分泌水平分别为(55.86±14.07)、(1 243.49±57.57)、(744±49.51)和(2 385±128.98)pg/mL(P<0.05)。4)各组刺激指数分别为11.85±2.61、54.14±3.81、47.57±3.14和64.43±5.88,阳性对照组为135.29±5.06(P<0.05)。结论TLR配体polyⅠ∶C和CpG ODN可以促进DC的分化成熟。
- 周志风王保龙魏静蔡秋妍潘健陈家萍应美爱沈佐君李庆黄琼罗朋
- 关键词：电转染CPGODN
- 肺腺癌细胞总RNA转染树突状细胞诱导特异性CTLs的体内抗肿瘤效应研究
- 2012年
- 目的探讨人肺腺癌细胞总RNA转染的树突状细胞(DCs)诱导抗原特异性的细胞毒T细胞(CTLs)对移植瘤裸鼠的抗肿瘤作用。方法 1)从外周血单个核细胞(PBMCs)中诱导DCs,提取人肺癌细胞A549总RNA,用于电转染DCs,转染后的DCs与自体T细胞混合培养,诱导抗原特异性的CTLs;2)实验分为转染RNA的DCs组、转染PBS的DCs组和未转染DCs组,流式细胞术(FCM)鉴定T细胞表型,3H-TdR掺入检测T细胞增殖能力;3)建立肺癌细胞株A549荷瘤裸鼠模型,过继回输CTLs,比较肿瘤体积,计算抑瘤率,免疫组化法检测移植瘤组织中Bax、Bcl-2、COX-2和VEGF的表达,并用全自动图像分析系统分析其平均光密度值(MOD)。结果 1)转染RNA的DCs和自体T细胞共育诱导的CTLs的CD8+T细胞大幅度上调,表达率(79.29±2.18)%明显高于转染PBS的DCs组CD8+T细胞(26.10±1.76)%和未转染DCs组CD8+T细胞(25.58±2.73)%(P<0.05);2)转染RNA的DCs显著刺激了自体T细胞增殖,3H-TdR渗入所得的cpm值:阳性对照组为17 105±130,转染RNA的DCs组为7 759±493,转染PBS的DCs组为2 611±161,未转染DCs组为2 248±332(P<0.05);3)成功建立肺癌裸鼠移植瘤模型,实验结束时,转染RNA组裸鼠荷瘤体积(540±99)mm3明显小于转染PBS组(1 572±147)mm3和未转染组(2 043±395)mm3(P<0.05);4)转染RNA组和转染PBS组的抑瘤率分别为68.53%和8.62%;5)转染RNA的DCs诱导的CTLs能显著上调Bax的表达(转染RNA组MOD值为335±105),显著下调Bcl-2、COX-2和VEGF的表达(转染RNA组MOD值分别为146±47、122±33和128±58)。结论人肺腺癌细胞总RNA转染DCs诱导的抗原特异性CTLs对肺腺癌裸鼠移植瘤的生长产生抑制作用。
- 蔡秋妍王保龙金娟陈家萍叶书来应美爱完晓菊魏静
- 关键词：树突状细胞细胞毒T淋巴细胞转染抗肿瘤效应
- 人γhG—CSF动员的外周血采集物来源的树突状细胞成熟诱导的研究被引量：1
- 2013年
- 目的探讨优化人γhG-CSF动员的外周血采集物来源的树突状细胞（DC）成熟诱导条件。方法利用密度梯度离心法从重组人粒细胞集落刺激因子（吖hG-CSF）动员的外周血采集物分离出单个核细胞，以重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM—CSF）和重组人白细胞介素-4（IL4）体外诱导成不成熟树突状细胞（imDC），分别采用传统细胞因子鸡尾酒（IL-1β、IL-6、TNF—α、PGE2）和改良细胞因子鸡尾酒（IL-1β、IL-6、TNF-α、polyI：C、CpGODN）刺激成熟。3d后收获成熟DC，观察细胞形态、流式细胞仪检测DC的内吞能力通过异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖（FITC—Dextran）、检测DC表面CD83、CD1a、CD80、HLA—DR、CD86和CCR-7，酶联免疫吸附法（ELISA）检测其IL一12的分泌，M1Tr法检测其刺激淋巴细胞增殖活性。结果两种方法均能诱导DC成熟，以改良细胞因子鸡尾酒效果更佳，FITC—Dextran的内吞能力明显下降；CD83、CD1a的表达率分别是84．44％、87．94％（P〈0．05）；IL-12分泌量明显增高，成熟DC能有效的刺激T淋巴细胞增殖。结论改良细胞因子鸡尾酒法可能是诱导DC成熟的最佳方法。
- 魏静蔡秋妍陈家萍潘健应美爱完晓菊周志风王保龙
- 关键词：树突状细胞
