高婷
- 作品数：8 被引量：8H指数：1
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- 脂多糖通过补体途径诱导小鼠产生白三烯B4
- 2011年
- 目的:研究脂多糖(LPS)对人血清中补体系统的激活及在小鼠模型中诱导产生白三烯B4(LTB4)。方法:LPS包被ELISA板,利用血清中补体C4、C3沉积实验检测补体成分被LPS活化的情况,通过尾静脉注射小鼠LPS后不同时间点ELISA定量检测LTB4,评价补体系统的活化和炎症因子的产生。结果与结论:血清系统ELISA检测发现LPS可以激活补体系统,且以凝集素途径为主;动物实验中LTB4被LPS诱导后1～3 h达到峰值,之后回落。C1INH对血清补体活化和动物模型中LTB4的产生均有显著抑制。
- 高婷陈婷张春梅刘萱曹诚
- 关键词：脂多糖补体白三烯B4
- 应用酵母双杂交技术筛选与埃博拉病毒VP24、VP35、VP40蛋白相互作用的宿主蛋白被引量：4
- 2016年
- 目的:用酵母双杂交实验筛选人肝cDNA文库,得到与埃博拉病毒VP24、VP35、VP40蛋白相互作用的蛋白质,用以研究VP24、VP35、VP40蛋白的生物学功能。方法:以埃博拉病毒VP24、VP35、VP40为诱饵蛋白,利用酵母双杂交技术对人肝cDNA文库进行初步筛选,并采用DNA测序技术及生物信息学技术进行分析。结果:筛选到13个可能与VP24、VP35、VP40相互作用的蛋白,包括视黄酸受体应答蛋白2(RARRES2)、PRKA激酶相互作用蛋白1(AKIP1)、白蛋白(ALB)、补体因子1(CF1)、人肿瘤易感基因(TSG101)等。结论:应用酵母双杂交技术初步筛选出与埃博拉病毒VP24、VP35、VP40相互作用的宿主蛋白,并完成了初步功能分析。
- 陈泽良高婷张部昌曹诚
- 关键词：埃博拉病毒致病机制酵母双杂交蛋白质相互作用
- SARS-CoV N蛋白与MASP2的相互作用及生物意义
- SARS即严重急性呼吸综合症,自2002年底我国广东报道首例患者以来,在不到半年时间内已在全球范围内造成8000余人感染,700余人死亡,致死率约10%。临床数据显示,SARS冠状病毒可以引起机体免疫系统过度激活,从而导...
- 高婷
- 关键词：SARS核衣壳蛋白补体LTB4
- 文献传递
- MERS冠状病毒核衣壳蛋白原核表达和纯化被引量：1
- 2015年
- 目的构建带有MERS-Co V N(MERS冠状病毒核衣壳蛋白)基因片段的p ET-22b+原核表达载体,并表达和纯化核衣壳蛋白(NP)。方法通过PCR技术扩增NP蛋白基因片段,插入到原核表达载体p ET-22b+上。使用核酸电泳、测序以及小量诱导表达确认所构建克隆的正确性,然后将重组质粒转化进大肠杆菌BL21a(DE3)中,并在大肠杆菌BL21a(DE3)中大规模诱导表达NP蛋白,使用AKTA纯化系统经强阳离子交换层析纯化出NP蛋白。结果测序和小量诱导结果表明,扩增的NP蛋白片段序列正确,所构建的p ET-22b+-NP克隆可在大肠杆菌BL21a(DE3)的包涵体和细胞质中表达;通过阳离子交换层析和浓缩后,蛋白的纯度和浓度都得到明显提高。结论纯化出高纯度、高浓度的NP蛋白,为NP蛋白功能性研究提供重要基础。
- 付洋波胡勇黄成成白圆圆邱立红曹诚高婷
- 关键词：冠状病毒属原核表达纯化
- 重组人MASP2蛋白在大肠杆菌中的表达和纯化被引量：1
- 2011年
- 目的:获得酶原形式的重组人甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2(MASP2)。方法:在大肠杆菌中诱导表达重组人MASP2全长蛋白,包涵体裂解后,经复性、透析、浓缩、考马斯亮蓝染色、SDS-PAGE及Western印迹,鉴定纯化结果及酶活性。结果:复性后的MASP2蛋白经考马斯亮蓝染色未见杂带。自激活实验表明,当MASP2浓度在1μmool/L以下时,无论在4℃还是37℃,都能较稳定地保持酶原形式;蛋白浓度为3.5μmool/L时只能在4℃保持稳定,37℃发生自激活;蛋白浓度达到12μmool/L后,在4℃时已不能稳定存在。结论:获得了较纯的重组人MASP2蛋白,且具有自激活活性。
- 高婷赵怀龙刘萱曹诚
- 关键词：原核表达包涵体复性自激活
- 真核表达的EF-1α-Flag蛋白对体外蛋白翻译的影响
- 2016年
- 目的:构建EF-1α-Flag到pcDNA3.0表达载体上,在哺乳动物细胞中表达并纯化延伸因子1α(EF-1α),测定其对体外蛋白翻译的影响。方法:通过PCR技术从293T细胞cDNA文库中扩增EF-1α基因片段,连接到pcDNA3.0载体上,经电泳、测序和转入细胞中检测EF-1α-Flag蛋白表达等方式验证所构建的重组质粒是否正确,然后经Flag肽置换法纯化出EF-1α蛋白用于体外蛋白翻译实验,萤光素酶活性检测翻译出的蛋白含量。结果:测序和蛋白表达鉴定结果表明扩增的EF-1α-Flag基因序列正确,所构建的重组载体在哺乳动物细胞中能获得表达;考马斯亮蓝染色发现经Flag肽置换的EF-1α蛋白纯度较高,在体外蛋白翻译实验中EF-1α蛋白能促进蛋白的翻译。结论:从哺乳动物细胞中纯化的EF-1α蛋白能促进蛋白翻译,可能与其作为翻译延伸因子相关,为进一步研究EF-1α的功能奠定了基础。
- 付洋波邱立红颜芳胡勇李平曹诚高婷
- 运用酵母双杂交系统筛选与埃博拉病毒GP、VP30、NP、L蛋白存在相互作用的宿主蛋白
- 2017年
- 目的运用酵母双杂交技术从人肝cDNA文库中筛选出与埃博拉病毒(EBOV)GP、VP30、NP、L蛋白存在相互作用的宿主蛋白,用于研究GP、VP30、NP、L蛋白在EBOV传染病中的生物学功能。方法利用重组PCR技术构建诱饵质粒pGBKT7-GP、pGBKT7-VP30、pGBKT7-NP、pGBKT7-L,将诱饵菌株与人肝cDNA文库菌株进行杂交筛选,对筛选到的阳性克隆进行DNA测序和生物信息学分析,然后再利用酵母回复性实验进一步验证,排除假阳性结果。结果成功构建了诱饵质粒pGBKT7-GP、pGBKT7-VP30、pGBKT7-NP、pGBKT7-L,筛选出6个可能与GP、VP30、NP、L蛋白有相互作用的宿主蛋白,分别是COMMD1、ALB、PSMD8、APOA2、CYP2E1、HP。酵母回复性实验进一步说明了COMMD1和APOA2与NP蛋白可能存在相互作用。结论酵母双杂交筛选出多个可能与EBOV的GP、VP30、NP、L蛋白存在相互作用的捕获蛋白,为研究EBOV的致病机制提供了参考。
- 李成功张部昌高婷曹诚
- 关键词：埃博拉病毒酵母双杂交技术
- 新型人源化抗CD20单克隆抗体的表达和活性检测被引量：1
- 2014年
- 目的制备新型人源化抗CD20单克隆抗体并检测其与CD20抗原的亲和力和抗肿瘤活性。方法通过计算机模建技术,在蛋白质结构数据库中找到与利妥昔单抗(rituximab)空间结构最相近的人Ig G1为骨架,将利妥昔单抗的互补决定区(complementarity determining region,CDR)进行移植和改造,通过重叠PCR方法,扩增出目的基因片段。分别将轻链(L)、重链(H)基因片段克隆到载体pc DNA3.3、p Opti VEC质粒上。瞬时转染至293F细胞,收取细胞上清,用r Protein A亲和层析法纯化目的抗体,并用十二烷基硫酸钠(SDS)-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检验抗体的纯度和表达量,采用Fortebio技术检测抗体与抗原的结合能力,最后通过裸鼠移植瘤生长抑制实验检测抗体的抗肿瘤活性。结果构建了3种抗CD20人源化抗体。抗体在还原SDS-PAGE中表现为两条相对分子质量约为25×103和55×103的条带,与预计条带大小相符;Fortebio实验结果表明,3组抗体与抗原具有良好的亲和活性:利妥昔单抗、L4H7抗体、L5H5抗体和L5H7抗体的Kd值分别为6.48×10-9、1.91×10-9、7.35×10-10和1.91×10-9mol/L。裸鼠移植瘤生长抑制实验表明,L5H7抗体的抗肿瘤活性优于利妥昔单抗。结论成功构建并表达了3种抗CD20人源化抗体,其中L5H7抗体具有良好的抗原结合能力和抗肿瘤活性。
- 贾茹靳彦文李平刘萱高婷刘子敬曹诚
- 关键词：人源化
