韩聪
- 作品数：8 被引量：2H指数：1
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- 发文基金：黑龙江省科技攻关计划哈尔滨市科技攻关计划项目黑龙江省卫生厅科研项目更多>>
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- 重组人乳头瘤病毒16型E6蛋白的表达、纯化和动物免疫效果分析被引量：2
- 2008年
- 目的诱导表达人乳头瘤病毒16型（HPVl6）E6蛋白，制备可溶性蛋白，并通过动物免疫进行免疫效果评估。方法采用IPTG诱导pQE30-HPVl6E6／BL21（DE3）重组菌株，表达产物经SDS-PAGE和Westernblot分析鉴定。提取包涵体进行变性处理，变性蛋白经Ni^2＋金属螯合层析纯化，将纯化产物用复性透析方法处理以获取可溶性蛋白。免疫BalB／c小鼠，检测血清抗体、CD4^＋／CD8^＋和IFN-γ。结果诱导后重组菌有相对分子量18000蛋白质表达，以不溶性包涵体为主要表达方式。目的蛋白可与HPV16E6多克隆抗体识别，纯化和透析处理后得到可溶性的蛋白。小鼠免疫后血清抗体滴度升高，淋巴细胞CD4^＋／CD8^＋升高，IFN-γ未见升高。结论成功表达了HPV16E6蛋白，同时处理包涵体并制备了可溶性目的蛋白。目的蛋白可刺激小鼠体内产生有效的免疫反应，该蛋白的成功制备为患者血清抗体的检测和肿瘤细胞杀伤的免疫研究奠定了坚实基础。
- 商庆龙王燕陈思佳李承刚韩聪邵迪李茉谷鸿喜
- 关键词：人乳头瘤病毒16型E6蛋白纯化免疫
- 5’-RACE法扩增抗人乳头瘤病毒16型L1蛋白单克隆抗体轻链可变区基因及序列分析
- 2008年
- 目的获得抗人乳头瘤病毒16型（HPV16）L1蛋白单克隆抗体的轻链可变区（VL）基因并分析序列。方法从分泌抗HPVl6L1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞中提取总RNA，逆转录形成CD-NA，用5’-RACE策略扩增抗体轻链可变区基因，经琼脂糖凝胶电泳鉴定，并测序及进行序列分析。结果VL基因全长336bp，编码112个氨基酸，基因测序结果符合小鼠抗体轻链可变区特征。结论5’-RACE法成功获得了抗HPV16L1蛋白的单克隆抗体轻链可变区基因的真实序列，为基因工程抗体研究奠定了良好基础。
- 王燕商庆龙陈思佳邵迪韩聪李茉谷鸿喜
- 关键词：人乳头瘤病毒16型轻链可变区单克隆抗体
- 悬浮培养昆虫细胞表达重组HPV16 L1蛋白
- 2007年
- 目的用悬浮培养昆虫细胞方式表达人乳头瘤病毒16型（HPV16）L1蛋白，为获得病毒样颗粒（VLPs）及进一步深入研究疫苗和诊断试剂盒打基础。方法优化昆虫细胞Si9的悬浮培养条件；优化扩增病毒和蛋白的条件；空斑试验测定病毒滴度；SDS—PAGE和Western Blot分析目的蛋白的表达情况；透射电镜观察细胞内HPV16 L1蛋白形成的VLPs。结果优化后，悬浮培养昆虫细胞初始接种密度为5×10^5 cell／ml，以MOI（Multiplicity of Infection）=10接种重组病毒rBacV／HPVl6L1，72～84h收获细胞沉淀为最佳。经透射电镜观察，在重组病毒感染的昆虫细胞内，存在HPV16L1蛋白形成的VLPs。结论优化了细胞悬浮培养、病毒扩增和蛋白表达的条件；电镜观察在重组病毒rBacV／HPV16L1感染的昆虫细胞中，HPV16L1蛋白可形成VLPs。
- 韩聪王燕商庆龙魏兰兰陈思佳
- 关键词：乳头状瘤病毒细胞病毒样颗粒
- 中国9个人群MSY2位点的多态性分析
- Y染色体多态对于研究男性传递的基因流是非常有意义的。由于Y染色体的非重组性、单体性、父系遗传等特性,使Y-DNA多态性成为研究人类起源、进化和各个群体分化、迁移的较理想标记,也是对线粒体DNA研究的很好补充。在众多遗传标...
- 孟祥宁薛雅丽孙冬琳刘艳韩聪傅松滨
- 关键词：遗传多态性Y染色体
- 文献传递
- HPV6b L1重组蛋白在大肠埃希菌中的表达与鉴定
- 2007年
- 目的研究人乳头瘤病毒6b型主要衣壳蛋白L1(HPV6b L1)在原核系统中的表达及鉴定。方法酶切pBluescript M13-HPV6b重组质粒,构建原核表达质粒pBAD-HPV6b L1,并转入大肠埃希菌Top10菌株,经L-Arabinose诱导,表达融合蛋白6×His-L1,用SDS-PAGE和蛋白印迹方法进行检测。结果HPV6b L1蛋白在Top10菌中高效表达,其相对分子量60kD,并保有HPV6b L1特异性。结论HPV6b L1蛋白在原核表达系统中获高效表达,为该蛋白质的功能及HPV的基因工程疫苗的研究提供了物质基础。
- 韩聪王燕商庆龙魏兰兰刘希君谷鸿喜
- 关键词：L1蛋白尖锐湿疣
- HPV16地方分离株E6基因的克隆与原核表达研究
- 2007年
- 目的克隆人乳头瘤病毒（HPV16E6）基因并在大肠埃希菌中表达，对表达产物进行鉴定。方法用PCR方法从克隆质粒pUC19-HPV16E6E7中扩增HPV16E6基因，采用定向克隆构建pQE30-HPV16E6原核表达质粒．利用酶切和序列测定鉴定重组质粒。将pQE30-HPV16E6转化大肠埃希菌BL21（DE3），建立重组工程菌pQE30-HPV16E6／BL21（DE3）。经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导，SDS—PAGE分析蛋白表达情况，利用Western blot鉴定抗原特异性。结果PCR产物470bp，重组质粒经酶切和序列测定证实构建正确。SDS—PAGE分析在18×10^3处有蛋白条带出现，与预期一致。Western blot分析证实目的条带与HPV16E6抗体有特异性反应。结论成功构建了HPV16E6基因的基因工程菌株，能高效表达E6蛋白，表达蛋白具有良好的免疫反应性。
- 商庆龙刘雪梅王燕李承刚邵迪陈思佳韩聪谷鸿喜
- 关键词：大肠杆菌
- HPV16L1VLP纯化、鉴定及血凝抑制实验方法的建立
- 2007年
- 摘要通过昆虫细胞-杆状病毒表达系统表达HPV16L1 VLP,纯化鉴定后利用其建立血凝抑制实验,检测HPV16L1单克隆抗体的血凝抑制活性。利用重组杆状病毒感染悬浮培养的昆虫细胞表达HPV16L1蛋白,大量获得VLP;优化扩增蛋白的条件并用SDS-PAGE分析鉴定;经氯化铯密度梯度离心法纯化VLP;利用所得VLP建立血凝抑制试验,鉴定制备的HPV16L1单克隆抗体的血凝抑制活性。优化蛋白表达条件结果显示,当重组杆状病毒感染细胞的MOI=10时目的蛋白表达量最大;按此滴度感染悬浮培养的昆虫细胞,收获、纯化VLP并鉴定其特异性;利用所得VLP建立了血凝抑制实验,鉴定HPV16L1单克隆抗体的血凝抑制效价为1∶16。建立的血凝实验,可用于鉴定和检测HPV16L1相关抗体,为HPV诊断试剂的开发提供实验基础。
- 邵迪王燕谷鸿喜韩聪李茉商庆龙李承刚
- 关键词：人乳头瘤病毒16型病毒样颗粒血凝抑制
- 人乳头瘤病毒16型L1蛋白表达及其单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立
- 2007年
- 目的表达并纯化重组人乳头瘤病毒16型（HPV16）L1蛋白，建立分泌抗HPV16 L1单克隆抗体（mAb）的杂交瘤细胞株。方法以基因工程表达HPV16L1蛋白。用Ni—NTA技术进行纯化后免疫BALB／c小鼠，取脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞融合，经含次黄嘌呤、氨基蝶呤、胸腺嘧啶（HAT）的选择培养基及有限稀释法进行克隆化，用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞，对获得的杂交瘤细胞株染色体进行计数．同时测定细胞培养上清mAb的效价。结果筛选出2株可分泌抗HPV16 L1 mAb的杂交瘤细胞，命名为AE3和AG7，染色体数分别为130条和98条。2株杂交瘤细胞AE3和AG7培养上清的效价分别为1：5120和1：80。结论成功建立了2株可分泌抗HPV 16 L1 mAb的杂交瘤细胞，为进一步研制HPV感染检测试剂盒提供实验基础。
- 王燕商庆龙谷鸿喜韩聪邵迪李茉李承刚
- 关键词：宫颈肿瘤L1蛋白
