韩红辉
- 作品数：14 被引量：24H指数：2
- 供职机构：华东师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：上海市科学技术发展基金国家自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 利用CRISPR/Cas9技术构建基因编辑大鼠模型
- 2023年
- RNA介导的CRISPR/Cas9基因编辑系统由单链引导RNA(sgRNA)与核酸酶Cas9构成。在细胞内,sgRNA能够按照碱基互补配对的原则引导Cas9与靶点结合,由Cas9切割目标DNA,造成双链DNA断裂(double stranded break,DSB)。在随后的DNA修复过程中,细胞主要进行非同源末端连接(non-homologous end joining,NHEJ)或在有修复模板存在的情况下进行重组修复(homology directed repair,HDR)。如果将CRISPR/Cas9系统以及修复模板通过显微注射的方式导入大鼠的胚胎内,就能借助细胞的修复机制实现大鼠胚胎的基因编辑,由此构建各种基因修饰大鼠模型。本文详细介绍了利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建大鼠模型的具体操作步骤,以期为相关领域的科研人员提供一种大鼠基因修饰模型的构建方法。
- 刘梅珍王立人李咏梅马雪云韩红辉李大力
- 关键词：基因敲除
- 噬菌体抗体库中筛选抗GST单链抗体及其活性鉴定被引量：2
- 2010年
- 从Tomlinson(I+J)噬菌体抗体库中筛选获得了特异性抗GST蛋白的单链抗体(scFv),并在E.coliHB2151进行表达,经SDS-PAGE和Western blot分析表明,scFv可在细菌周质腔中进行可溶性表达,其分子量约为30 kD,与理论预期值相符;ELISA鉴定结果显示,周质腔中的scFv具有抗原结合功能,而且这种结合可以被GST纯蛋白所抑制,其IC50值约为3.07 ng/ml,证明该scFv具有特异性结合GST蛋白的活性。本研究表明,利用噬菌体抗体库技术可以不经过免疫就能获得高特异性的人源化抗GST蛋白的scFv。
- 唐喆伟韩红辉杜冰王群钱旻李恺
- 关键词：噬菌体抗体库单链抗体GST
- G蛋白偶联受体56胞外端融合蛋白的表达、纯化及其多克隆抗体的制备
- 2011年
- 目的：制备G蛋白偶联受体56（G protien-coupled recepter 56,GPR56）的高效抗体,为其功能及分子机制的深入研究提供灵敏、高效的免疫学检测工具。方法：以肝癌细胞株MHCC-97H的cDNA为模板,利用PCR技术扩增GPR56 N端序列（661~1 073 bp）,并构建重组表达载体pGEX4T-1-GPR56N。阳性克隆经酶切、测序鉴定正确后,转化大肠杆菌BL21进行诱导表达。表达产物经Western blot初步鉴定后,用GST磁珠分离纯化,纯化后蛋白与免疫佐剂混合直接免疫家兔制备抗血清。阳性血清用ELISA、Western blot、免疫组织化学等技术对细胞或组织中的GPR56进行鉴定和分析。结果：成功构建重组表达载体pGEX4T-1-GPR56N,GPR56N与GST的融合蛋白（GST-GPR56）在原核系统中进行了高效的可溶性表达,制备的兔抗人GPR56抗体经Western blot和免疫组织化学分析结果表明,该抗体可同时对人源性和鼠源性的GPR56进行特异性检测。结论：成功对GPR56蛋白N端序列进行了原核表达和纯化,制备的抗GPR56多克隆抗体具有较高的特异性,为GPR56功能及分子机制的深入研究奠定了坚实的基础。
- 赵去非韩红辉刘俊晨潘新华汪磊钱旻杜冰
- 关键词：GST原核表达多克隆抗体
- G蛋白偶联受体P2Y_6及其配体UDP对乳腺癌转移的调控及机制研究
- 背景:P2Y6是G蛋白偶联受体家族的重要成员,通过识别胞外UDP激活下游的信号通路,从而对机体的生理和病理功能进行调控。然而到目前为止,关于P2Y6及其配体UDP在肿瘤转移中的功能和机制研究尚未见报道。目的:探讨P2Y6...
- 杜冰潘新华杨林立李瑞梅韩红辉任华钱旻
- 关键词：UDP乳腺癌SHRNA
- 文献传递
- 抗苏丹红单链Fab抗体的构建、表达及功能鉴定被引量：2
- 2009年
- 从分泌抗苏丹红Ⅰ单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株SU211中克隆抗体轻链Lc基因和重链Fd基因,将Lc、Fd基因以及Linker克隆到载体pET24a(+)中,构建scFab表达载体并在E.coli BL21(DE3)获得表达,SDSPAGE和Westernblot分析表明其表达形式为包涵体,相对分子质量约为57 kD,与理论预期值相符。经复性后,ELISA鉴定结果表明复性抗体对苏丹红Ⅰ具有很高的结合特异性。本研究为新型基因工程抗体的构建以及苏丹红新型免疫检测技术的建立奠定基础。
- 石凌超韩红辉唐喆伟杜冰李恺王群钱旻
- 关键词：苏丹红I包涵体复性酶联免疫吸附测定
- 一种新型肝癌免疫毒素的表达、纯化及初步鉴定被引量：11
- 2008年
- 从噬菌体随机肽库中筛选获得了与肝癌细胞特异性结合的12-肽A54,将其与蜂毒肽(melittin,Mel)编码基因连接后,插入质粒载体pET-32a(+)中,构建成A54-Mel与硫氧还蛋白(thioredoxin,Trx)及六聚组氨酸(6×His)的融合表达载体pET32-A54-Mel。将重组质粒转化E.coliBL21(DE3)表达后,获得可溶性表达产物,经Western blot鉴定,表达产物能与蜂毒肽特异性抗体反应。表达菌经超声裂解后,上清液用Ni+离子亲和层析法纯化得到了融合蛋白(Trx-A54-Mel),经肠激酶裂解、再次Ni+离子亲和层析后得到纯度大于95%的肝癌特异性免疫毒素A54-Mel。经细胞ELISA和四氮唑盐(MTT)法检测,发现A54-Mel在体外具有一定的肿瘤细胞特异性靶向及杀伤活性,为新型免疫毒素在肝癌靶向治疗中的研究奠定了基础。
- 王媛媛韩红辉杜冰钱旻
- 关键词：蜂毒肽免疫毒素纯化
- 谷氨酰胺在小鼠精子冷冻保存中的作用研究
- 2021年
- 本实验旨在探讨在小鼠精子冻存液(CPA)中添加不同浓度的谷氨酰胺(Gln)对C57BL/6小鼠冷冻精子体外受精(IVF)能力的影响。选取14周龄野生型SPF级C57BL/6雄鼠10只,4周龄野生型SPF级C57BL/6雌鼠40只。以未添加Gln的CPA为对照组,实验组分别在CPA中添加50、100、150 mmol/L的Gln,分别将C57BL/6小鼠精子进行冷冻,1个月后复苏精子,测定精子的体外受精能力。结果显示:与对照组相比,50 mmol/L和100 mmol/L Gln组精子复苏后精子动力学参数平均曲线速度(VCL)、直线速度(VSL)、平均路径速度(VAP)和侧摆幅度(ALH)的指标均有提升(P<0.01),且添加100 mmol/L的Gln效果最佳,而添加150 mmol/L的Gln精子复苏后各参数数值反而下降(P<0.01);50 mmol/L和100 mmol/L Gln组的体外受精率均有提升(P<0.01),且100 mmol/L Gln组体外受精率最高,而实验组受精卵的体外囊胚发育率与对照组无显著性差异。本实验条件下,在CPA中添加100 mmol/L的Gln能够有效提高冷冻复苏后C57BL/6小鼠精子的体外受精能力。
- 刘腾飞章延嘉李大力齐亚磊韩红辉马雪云
- 关键词：小鼠谷氨酰胺体外受精
- 抗肿瘤转移和抗炎症小分子化合物的筛选及其机理研究
- 恶性肿瘤是目前威胁人类健康和导致死亡的主要原因之一。据世界卫生组织统计,每年新增癌症患者1270万例,死亡约790万,且随着人们生活方式的改变和社会结构老龄化韵加剧,癌症的发病率将呈现持续增长的态势。胃癌是发生在胃粘膜上...
- 韩红辉
- 关键词：肿瘤转移肿瘤浸润AP-1促炎症因子
- 一种微生物谷胺酰转氨酶的分离纯化方法
- 本发明公开一种微生物谷氨酰胺转胺酶的分离纯化方法，是在链霉菌发酵液中加入50-200mg/L的分散酶处理，经乙醇沉淀、阴离子交换层析、阳离子交换层析，再经脱盐、浓缩、过滤、冻干后得到所述微生物谷氨酰胺转胺酶；其中，所述微...
- 韩红辉刘明耀陈益华易正芳金明飞常忠义
- 文献传递
- 新型肝癌免疫毒素A54-PE40KDEL的构建表达与活性鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的:构建新型肝癌免疫毒素A54-PE40KDEL的原核表达载体,诱导表达后检测其生物活性。方法:PCR扩增绿脓杆菌外毒素APE40KDEL基因插入到pET32a(+),然后与合成的含有肠激酶酶切位点和肝癌特异性结合肽A54的核酸序列连接,构建重组表达载体pET32a(+)-A54-PE40KDEL,其经鉴定后转化E.coliBL21表达。超声破菌,上清液经Ni+亲和层析纯化,肠激酶酶切,再次Ni+离子亲和层析后得到免疫毒素A54-PE40KDEL。MTT和间接免疫荧光技术检测其对不同细胞株的细胞毒性及靶向性。结果:重组质粒序列正确,经Westernblot证实表达产物含Mr约58000的目的蛋白。A54-PE40KDEL能够与肝癌细胞特异性结合,且对肝癌细胞的毒性作用与对照相比有极显著性差异(P<0.01)。结论:成功构建了A54-PE40KDEL原核表达载体;获得的新型肝癌免疫毒素A54-PE40KDEL在体外与肝癌细胞具有一定结合特异性及杀伤活性,为肝癌导向治疗提供了一条可行的途径。
- 虞丽平韩红辉石凌超杜冰张小平周忠良钱旻
- 关键词：免疫毒素肝癌绿脓杆菌外毒素A特异性结合肽
