陶玉成
- 作品数：7 被引量：20H指数：3
- 供职机构：新疆农业大学动物医学学院更多>>
- 发文基金：新疆维吾尔自治区高技术研究发展计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 犬传染性肝炎病毒Hexon基因原核表达条件的优化与表达蛋白的活性被引量：1
- 2011年
- 【目的】为了提高犬传染性肝炎Hexon蛋白基因在大肠杆菌中的表达量,研究Hexon基因蛋白的最佳表达条件和表达蛋白的活性。【方法】在大肠杆菌菌株BL21(DE3)培养过程中,选择诱导剂(IPTG)的最佳加入时间、诱导剂(IPTG)浓度、诱导时间以及不同温度条件观察对Hexon融合蛋白表达的影响,以确定最佳表达条件,并用Western-blot检测重组蛋白的生物活性。【结果】大肠杆菌BL21(DE3)在37℃培养2.25 h后,添加终浓度为2.0 mmol/L的IPTG,27℃培养8 h,Hexon重组蛋白表达量最高(1.67 mg/mL),所表达的重组蛋白能与犬传染性肝炎阳性血清相结合。【结论】在高浓度IPTG诱导和冷培养条件下,Hexon蛋白基因的表达量最高,表达出的重组蛋白具有很好的反应原性,为进一步研究六邻体蛋白的作用机理及亚单位疫苗的研究提供了实验基础。
- 简子健马素贞陶玉成翟少华赵森
- 关键词：原核表达表达条件优化重组蛋白生物活性
- 犬瘟热病毒N蛋白基因的克隆、原核表达及其表达产物抗原性鉴定被引量：8
- 2010年
- 参考GenBank中发表的CDVN蛋白基因序列，用Oligo6．0软件设计一对特异性引物，从患犬瘟热的犬全血样品中提取总RNA，经RT—PCR扩增得到1572bp的基因片段，将其插入pMD18-T克隆载体中构建了pMD18-CDVN重组质粒，将其转入到大肠杆菌DH5a中，进行鉴定、测序。将目的基因与原核表达载体pGEX-4T-2连接构建了pGEX-4T-2-CDVN重组质粒，转化到大肠杆菌BL21（DE3）中，进行鉴定、测序、IPTG诱导表达。序列分析表明克隆的CDVN蛋白基因从起始密码子ATG开始到终止密码子TAA结束全长为1572个核苷酸，与GenBank中发表的CDVN蛋白基因序列相比同源率达到93．9％～99．1％。Western-blotting分析显示表达产物为84kDa的融合蛋白，可被犬瘟热抗血清所识别，具有良好的抗原性。
- 申卫红马素贞陈胜男刘腾飞陶玉成简子健
- 关键词：犬瘟热病毒N蛋白基因克隆原核表达抗原性
- 牛梨形虫病综合防治措施的实验性研究被引量：4
- 2012年
- 【目的】处于干旱、半干旱区的新疆是蜱侵袭较严重的地区。目前已发现牛群中存在这三种梨形虫病,但只有牛泰勒虫病有有效的疫苗防治。探讨新疆牛梨形虫病综合防治措施,制定出该区综合性的预防和治疗方案并予以实施。【方法】选择牛梨形虫病比较严重的疫区作为实验点,根据该区的气候、季节特点,通过流行病学调查、驱蜱、疫苗接种、药物治疗。【结果】该区的牛梨形虫病综合防治措施牛梨形虫病的发病率显著降低,实验期间牛群中没有发现死亡。【结论】通过制定牛梨形虫病综合防治措施使疫区牛群的牛梨形虫得到有效控制,在新疆农区与牧区具有借鉴意义。
- 桑彩霞马素贞简子健袁江玲吕伟陶玉成
- 关键词：梨形虫病发病率
- 犬细小病毒VP2基因的克隆表达与免疫印迹分析被引量：1
- 2010年
- 根据基因库已发表犬细小病毒序列设计合成了VP2基因的1对特异引物,以细小病毒感染的犬粪样品中提取的总DNA为模板,进行PCR扩增。把扩增产物克隆至pMD18-T载体进行测序、鉴定。将克隆的VP2基因片段克隆至原核表达载体pGEX-4T-2,再将构建成功的原核表达质粒载体pGEX-4T-2-VP2转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,进行鉴定、测序、表达。结果表明,克隆的VP2基因片段全长1 755 bp,与13个VP2基因序列的同源性为98.4%～99.8%。系统进化树分析表明,所克隆的VP2 CSN830611序列同日本株(AB054222)、意大利株(AF306445)的进化途径一致。Western-blotting分析显示,表达产物为90 kD的融合蛋白,可被犬细小病毒阳性血清所识别,具有良好的反应原性。
- 陈胜男马素贞陶玉成申卫红刘腾飞简子健
- 关键词：犬细小病毒VP2基因克隆原核表达反应原性
- 犬传染性肝炎病毒Hexon蛋白基因的克隆和原核表达质粒的构建被引量：5
- 2010年
- 通过设计特异性引物,以犬传染性肝炎患犬的全血基因组DNA为模板,经PCR扩增,获得了犬传染性肝炎病毒Hexon蛋白基因,将其插入到pMD18-T载体进行测序、鉴定,构建原核表达质粒载体pGEX-6p-1-Hex-on。结果显示,犬传染性肝炎病毒Hexon基因已被成功地克隆,基因全长2 718 bp,包含从起始密码子ATG到终止密码子TAA的完整序列。与犬传染性肝炎病毒国际标准株Hexon蛋白基因的同源性为99.7%,通过实验鉴定表明pMD18-Hexon克隆载体和原核表达质粒载体pGEX-6p-1-Hexon已成功构建。
- 陶玉成马素贞陈胜男刘腾飞申卫红简子健
- 关键词：犬传染性肝炎克隆原核表达质粒
- 犬副流感病毒NP基因的克隆与原核表达被引量：2
- 2010年
- 以犬副流感病毒RNA为模板,采用RT-PCR方法,连接pMD18-T载体获取NP蛋白编码基因核苷酸序列,并应用定向克隆技术,构建原核表达载体pGEX-6P-1-NP。经测序鉴定证实获取的NP蛋白核苷酸序列与GeneBank中标准序列存在两处碱基变异,导致编码的蛋白质出现一个氨基酸的变异。测序结果表明,克隆出的目的基因序列已定向克隆到pGEX-6P-1载体,成功构建了其原核表达载体,并能在大肠杆菌BL21(DE3)中得到表达。Westen-Blotting分析结果显示,表达的GST-pGEX-6P-1-NP重组融合蛋白为82.1 kDa,可被犬副流感阳性血清所识别,表明NP基因所编码的蛋白具有一定的免疫活性。
- 刘腾飞马素贞申卫红陶玉成陈胜男简子健
- 关键词：犬副流感病毒NP蛋白RT-PCR原核表达免疫活性
- 犬传染性肝炎病毒Hexon蛋白基因的克隆与表达
- 犬传染性肝炎(ICH)是由犬传染性肝炎病毒引起的一种常见的急性败血性传染病。本病主要发生于犬和狐,是当前养犬业和养狐业危害最大的动物疫病之一。本病临床上以马鞍型高热,严重血凝不良,肝脏受损,角膜混浊等为主要特征,多发生于...
- 陶玉成
- 关键词：犬传染性肝炎原核表达表达条件优化
- 文献传递
