陈龙军
- 作品数：37 被引量：57H指数：5
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- 相关领域：生物学农业科学轻工技术与工程环境科学与工程更多>>
- Geobacillus sp.CHB1环糊精葡萄糖基转移酶淀粉结合位点N623饱和突变对催化效率与产物特异性的影响被引量：2
- 2016年
- 为了提高来源于Geobacillus sp.CHB1环糊精葡萄糖基转移酶(CGTase)的催化效率和产物特异性,对其氨基酸序列和模拟结构进行了分析,确定其淀粉结合位点2处第623位氨基酸残基的构象可能影响其催化效率。运用重叠PCR技术,在其淀粉结合位点2处第623位(N623)进行定点饱和突变,构建19种不同氨基酸残基突变体。将突变基因与p ET-28a(+)-omp A载体连接并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。以可溶性淀粉为底物进行酶催化实验,HPLC分析反应产物中的环糊精含量变化。结果表明,相对于野生型CGTase,突变酶N623T的催化效率明显提高,总环化活力提高了58.6%,α-环化活力提高了64%,β-环化活力提高了80.5%,而γ-环化活力降低了35.3%。产物特异性方面,相比野生型CGTase,突变酶N623T的淀粉总转化率从11.3%提高至39.7%,提高了251.3%,其中α-环糊精、γ-环糊精所占比例缩减为32.8%和7.7%,β-环糊精提高至59.5%。分析其可能机制为:与野生型CGTase相比,突变体N623T中苏氨酸残基代替了天冬酰胺,造成淀粉结合位点2处的构象发生了变化,该构象优化底物作用方向有利于反应的进行,从而提高了酶的催化效率。
- 郭永华陈济琛蔡海松陈龙军林新坚
- 关键词：环糊精葡萄糖基转移酶
- 环糊精葡萄糖基转移酶的突变体、编码所述突变体的基因、重组载体及制备方法和应用
- 本发明提供了环糊精葡萄糖基转移酶的突变体、编码所述突变体的基因、重组载体及制备方法和应用，属于基因工程和酶工程技术领域；所述突变体由来源于嗜热脂肪地芽胞杆菌(Geobacillus caldoxylosilyticus)...
- 陈龙军陈济琛贾宪波林陈强方宇张慧
- 文献传递
- 纤维素降解菌的分离筛选及产酶条件优化被引量：1
- 2023年
- 【目的】为获得秸秆降解的应用型菌株,自制秸秆腐熟菌剂。【方法】从林下土壤和堆肥样品中,采用羧甲基纤维素钠和刚果红培养基进行分离筛选,并对菌株纤维素酶活性、滤纸酶活性和木聚糖酶活性进行测定。【结果】获得1株羧甲基纤维素酶活力最高的菌株,经形态学和分子生物学鉴定为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。该菌株对滤纸有崩解效果,滤纸酶活性14.21 U·mL^(−1),木聚糖酶活性24.03 U·mL^(−1),玉米秸秆降解率为21.2%。【结论】菌株TB1滤纸崩解试验效果较好,纤维素酶活性、滤纸酶活性和木聚糖酶活性均较高,具有秸秆降解开发应用价值。
- 张慧赵恪林陈强林戎斌陈龙军陈济琛
- 关键词：纤维素降解菌秸秆酶活
- 一种高温环糊精葡萄糖基转移酶基因及其重组表达
- 本发明涉及一个高温环糊精葡萄糖基转移酶（CGTase）基因，从嗜热脂肪地芽孢杆菌GeobacilluscaldoxylosilyticusCHB1基因组中扩增得到一个编码CGTase基因cgt，其序列如SEQ ID NO...
- 林新坚陈济琛贾宪波林戎斌陈龙军
- 酸性土壤玉米根际土壤细菌群落对秸秆还田和调理剂的响应被引量：2
- 2021年
- 【目的】以福建省黄泥田土壤为研究对象,探讨不施化肥(CK)、单一施化肥(T1)、化肥配施秸秆还田(T2)、化肥配施土壤调理剂(T3)等4组处理玉米根际土壤细菌群落组成、多样性和结构的变化。【方法】利用Illumina Miseq测序平台对4组处理土壤样品进行测序,基于第二代高通量技术分析4种处理(CK、T1、T2、T3)的玉米根际土壤细菌的16S rRNA基因在V3~V4区域的多样性指数、丰富度以及群落组成和结构。【结果】4个处理的玉米根际土壤细菌优势门(相对丰度>10%)为变形菌门(Proteobacteria)、绿弯菌门(Chloroflexi)、放线菌门(Actinobacteria)。T1处理细菌的丰富度指数(ACE指数和Chao1指数)较CK均有所降低,分别降低17.65%和17.88%;T3处理的细菌丰富度指数(ACE指数和Chao1指数)高于CK处理,分别提高14.52%和14.00%。分层聚类图显示细菌属水平上,CK、T1和T2处理的土壤样品细菌群落结构相似性较高,T3与其他3个处理细菌群落结构差异较大。【结论】化肥配施土壤调理剂对土壤细菌群落结构影响大于单一施化肥和化肥配施秸秆还田处理,单一施化肥降低了根际土壤细菌的丰富度,化肥配施土壤调理剂可以显著提高玉米根际土壤细菌群落的丰富度,施用土壤调理剂提高酸性土壤pH对玉米根际细菌群落影响最大。
- 张慧苏光秋林陈强陈龙军陈济琛
- 关键词：秸秆还田土壤调理剂土壤细菌群落
- 一种竹荪孢子有效成分超临界CO<Sub>2</Sub>萃取方法
- 本发明公开了一种竹荪孢子中有效成分的超临界CO<Sub>2</Sub>萃取方法，将竹荪孢子置于萃取釜，通入处于超临界状态的CO<Sub>2</Sub>，控制温度为35℃～50℃，压力为20MPa～50MPa，时间为1～5...
- 林新坚林陈强林戎斌陈济琛陈龙军
- 文献传递
- 纳豆芽胞杆菌固定化载体改性及吸附研究
- 2021年
- 【目的】以麦饭石为载体,制备高效的纳豆芽胞杆菌固体菌剂,为纳豆芽胞杆菌的规模化应用奠定基础。【方法】运用酸、碱、盐等方法探索麦饭石进行改性条件,扩大麦饭石孔隙度及比表面积,提升其吸附能力;并通过添加保护剂(葡萄糖、糊精、淀粉)增加保藏期固体菌剂的有效活菌数残留率,为长期保藏固体粉剂提供技术支持。【结果】(1)确定了纳豆芽胞杆菌最适培养温度为40℃,最适培养pH为7.5。(2)经氯化钠、盐酸、硫酸和氢氧化钠溶液改性后的麦饭石吸附最大有效活菌数分别为13.17、12.6、12.7和11.9(×10^(8) CFU·g^(-1))。其中0.5 mol·L^(-1)氯化钠溶液改性效果最好,吸附有效活菌数达到13.17(×10^(8) CFU·g^(-1))。(3)对照组、添加保护剂组(2%糊精、2%葡萄糖、2%淀粉)保藏至6个月时,有效活菌数分别为2.91、4.1、5.42和4.63(×10^(8) CFU·g^(-1))。活菌数残留率为初始活菌数的22%、31%、41%和35%,其中2%葡萄糖保护剂比对照组有效活菌数残留率提高了1.86倍。【结论】改性麦饭石能极大提升麦饭石的吸附能力,同时保护剂的添加有利于麦饭石固体芽胞杆菌粉剂的长期保藏,本研究为麦饭石在微生物菌剂制备工艺的应用提供了一定的技术支持。
- 陈龙军林程林陈强张慧贾宪波方宇陈济琛
- 关键词：麦饭石改性保护剂
- 不同有机肥施用量对葡萄产量、品质及土壤养分的影响被引量：14
- 2019年
- 以7年生葡萄树为供试材料,研究了不同有机肥施用量对葡萄产量、品质及土壤养分的影响。结果表明,有机肥的施用,有效地提高了葡萄产量、品质及土壤有机质含量。当有机肥施肥量为60t/hm^2,葡萄增产12.8%,可溶性固形物、糖酸比、Vc分别增加9.0%、15.7%和11.7%,土壤有机质含量提高22.7%。
- 王丽希陈龙军江志阳钟勇法冯聪朱鸿光
- 关键词：葡萄有机肥果实品质土壤养分
- 信号肽筛选优化提高耐热α-环糊精酶在枯草芽胞杆菌中的表达被引量：2
- 2022年
- 【目的】探索嗜热α-环糊精葡萄糖基转移酶(α-CGTase)在枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis RIK1285)中的高效胞外表达条件。【方法】以来源于枯草芽胞杆菌的173种信号肽为基础构建信号肽文库,筛选获得9条表达效率更高的信号肽,其中citH信号肽引导分泌效率最高。在此基础上,为进一步优化α-CGTase的分泌表达,对信号肽citH的Gly2、Asn3及Thr4进行饱和突变,并比较不同突变体的引导分泌效率。【结果】突变体G2R-NK-T4LCGT的引导分泌效率最高,重组枯草芽胞杆菌的胞外α-CGTase活力高达(14.2±0.11)U·mL^(−1),相比未突变信号肽[(9.6±0.29)U·mL^(−1)],分泌效率提高了47.9%;是野生菌株嗜热地芽胞杆菌Geobacillus caldoxylosilyticus.CHB1(0.66 U·mL^(−1))的21.5倍。重组α-CGTase的最适反应pH值为6.0,最适反应温度为60℃,在50℃以内稳定;Mg^(2+)、Ca^(2+)对α-环糊精酶活性具有一定的激活作用。【结论】信号肽对环糊精酶在芽胞杆菌中的高效表达具有重要影响,为外源蛋白在芽胞杆菌中的表达提供一定借鉴。
- 陈龙军林陈强贾宪波方宇张慧陈济琛
- 关键词：信号肽Α-环糊精葡萄糖基转移酶枯草芽胞杆菌
- 环糊精酶基因在毕赤酵母中的组成型表达被引量：4
- 2017年
- 为实现环糊精酶在毕赤酵母中的高效表达,以优化合成的环糊精酶基CGT2为基础,构建组成型表达质粒pGAPZαA-CGT2,运用电转化方法将目的基因整合进酵母染色体,构建环糊精酶酵母工程菌X33/pGAPZαA-CGT2,经摇瓶发酵120h后,CGT2活力达0.21 U·mL^(-1);进一步对工程菌进行摇瓶发酵条件优化,确定其最优发酵条件为:pH6.5、28℃、200r·min^(-1)、每24h补加2.5%的甘油,120h后其胞外酶活力达到0.36U·mL^(-1),是优化前的1.7倍,实现了环糊精酶在毕赤酵母中的组成型表达。
- 陈龙军陈济琛林新坚蔡海松
- 关键词：毕赤酵母组成型表达发酵
