陈泽志
- 作品数：8 被引量：9H指数：2
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- FOXP3基因3’-UTR段双荧光素酶报告载体的构建及其活性鉴定
- 2014年
- 目的:构建FOXP3基因3’-UTR双荧光素酶基因报告载体,并通过检测荧光素酶活性,初步分析可能调控FOXP3基因表达的miRNAs。方法:利用PCR方法,根据FOXP3基因3’-UTR序列信息设计其扩增引物,以293T细胞基因组DNA为模板PCR扩增FOXP3基因的3’-UTR序列,将其克隆到pmiRB-REPORT双荧光素酶报告载体中;运用Targetscan软件预测可能与FOXP3基因3’-UTR相互作用的miRNAs;利用LipofectaminTM2000试剂将miRNAs mimics与构建好的FOXP3基因3’-UTR段双荧光素酶报告载体共转染于常规培养的293T细胞中,然后使用双荧光素酶试剂盒检测荧光素酶活性,并与空白对照相比较。结果:经酶切及基因测序验证,成功构建含有FOXP3基因3’-UTR段双荧光素酶基因报告载体;Targetscan软件预测显示,FOXP3基因3’-UTR可能是miR-608的作用靶位点;双荧光报告显示,miR-608mimics组比空白对照组[(0.700 0±0.016 41)比(1.000±0.055 75)(P<0.001)]FOXP3基因3’-UTR双荧光素酶基因报告载体的荧光素酶活性下降30%。结论:FOXP3基因3’-UTR段双荧光素酶基因报告载体构建成功,初步证实miR-608对FOXP3有调控作用。
- 陈泽志李劲频杜伟伟刘竞丽莫雪安
- 重症肌无力伴胸腺增生患者胸腺组织内miRNA-548k调控CXCL13的研究
- <正>目的探讨重症肌无力伴胸腺增生(MGH)患者胸腺内CXCL13表达的miRNA调控机制。方法收集26例胸腺标本,依据胸腺病理分为MGH组13例和正常胸腺对照(NC)组13例,用miRNA基因芯片筛选MGH组与NC组之...
- 陈泽志
- 文献传递
- 重症肌无力伴胸腺增生患者胸腺组织内微小RNA-548k调控CXCL13的研究
- 目的:通过采用微小RNA基因芯片技术、生物信息学方法、实时荧光定量PCR(QRT-PCR)和双荧光报告等方法，探讨重症肌无力伴胸腺增生(Myasthenia Gravis with thymic Hyperplasia,...
- 陈泽志
- 关键词：胸腺组织
- 文献传递
- 全身型重症肌无力患者异常胸腺microRNA表达谱的初步研究被引量：4
- 2015年
- 目的比较全身型重症肌无力(generalized myasthenia gravis,GMG)患者异常胸腺(胸腺瘤、胸腺增生)与正常胸腺microRNA(miRNA)表达谱的差异,以探讨胸腺miRNA在重症肌无力发病机制中的作用。方法应用RiboArrayTMmiRNA芯片检测技术分别比较GMG伴胸腺瘤(4例)、胸腺增生(4例)患者胸腺与正常对照(4例)胸腺miRNA表达谱的差异,并利用生物信息学预测可能受其调控的靶基因。结果 GMG胸腺瘤组、GMG胸腺增生组与正常对照组之间胸腺miRNA聚类分析树状图差异明显;GMG胸腺瘤组较正常对照组显著差异表达的胸腺miRNA共有16个,其中14个下调,下调最显著的为hsa-miR-362-3p,2个上调,上调最显著的为hsa-miR-125a-5p;GMG胸腺增生组较正常对照组显著差异表达的miRNA共有38个,其中下调者37个,下调最显著的为hsa-miR-548av-3p,上调者1个,为hsa-miR-4442。结论异常表达的胸腺miRNA可能在重症肌无力发病中起作用。
- 邱笛李劲频莫雪安陈泽志杜伟伟刘竞丽
- 关键词：重症肌无力胸腺增生微RNAS芯片分析技术
- 重症肌无力伴胸腺增生患者胸腺内miR-548k调控CXCL13表达的研究被引量：2
- 2014年
- 目的 探讨重症肌无力伴胸腺增生（MGH）患者胸腺内B细胞趋化因子13（CXCL13）表达的微小RNA（miRNAs）调控机制。方法 收集26例胸腺标本，分别来源于自2012年3月至2013年8月在广西医科大学第一附属医院心胸外科住院确诊为重症肌无力并行胸腺完整切除术的13例患者（MGH组），以及同期因先天性心脏病行开胸治疗并在手术过程中切除胸腺的13例患者（对照组）。应用miRNAs基因芯片筛选MGH组与对照组之间表达有差异的miRNA；应用生物信息学预测方法并结合miRNAs芯片检测结果寻找靶向B细胞趋化因子13（CXCL13）的miRNA；对CXCL13mRNA和预测的miRNAs在MGH组与对照组胸腺内的表达进行实时荧光定量PCR（qRT-PCR）分析，然后进行双荧光报告分析微小RNA-548k（miR-548k）模拟物组与空白对照组的CXCL13-3’非翻译区（UTR）双荧光载体荧光素酶活性。结果 （1）miRNAs芯片筛选结果显示，在MGH患者胸腺内呈显著差异表达的miRNAs有33个，其中miR-548k是下调最显著的一个（1．98倍）。（2）生物信息学预测显示，miR-548k与CXCL13的3’UTR有明显的相互作用。（3）qRT-PCR定量分析发现，MGH组胸腺内miR-548k的表达量较对照组明显下调（0．55±0．20vs1．33±0．36）．差异有统计学意义（P〈0．05）；MGH组胸腺内CXCL13的表达量较对照组明显上调（4．93±1．95vs1．04±0．20），差异有统计学意义（P〈0．05）；MGH组胸腺内miR-548k与CXCL13表达呈明显负相关（r=-0．93，P=0．003）。（4）双荧光报告分析显示，miR-548k模拟物组的CXCL13-3’UTR双荧光载体荧光素酶活性较空白对照组下降约61．5％（0．385±0．016vs1．000±0．0501，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论 MGH患者胸腺内miR-548k的低表达很可能通过转录后基因沉默机制使其靶基因CXCL13过表达，从而参与重症肌无力的发生发展。
- 李劲频陈泽志邱笛杜伟伟刘竞丽莫雪安
- 自身免疫调节因子对EAMG模型小鼠发病的影响被引量：3
- 2014年
- 目的探讨自身免疫调节因子(autoimmune regulator,AIRE)在实验性自身免疫性重症肌无力(experimental autoimmune myasthenia gravis,EAMG)模型小鼠发病中的作用。方法采用亲和层析法从电鳐电器官中提取和纯化乙酰胆碱受体(acetylcholine receptor,AChR),并用其免疫C57BL/6小鼠,根据临床症状及重复电刺激试验结果将造模小鼠分为成模组及未成模组,检测各组小鼠胸腺内AIRE mRNA、AChRα1mRNA表达水平以及CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)比例和胸腺细胞增殖能力,并与未成模组、福氏佐剂对照组及健康对照组进行比较。结果与未成模组、福氏佐剂对照组及健康对照组相比,成模组小鼠胸腺内AChRα1亚基基因表达水平减少(P<0.01),胸腺内AIRE mRNA表达水平明显下降(P<0.01),胸腺内CD4+T细胞水平无统计学变化(P>0.05),而胸腺内Treg与CD4+T细胞水平的比例却明显下降(P<0.01),胸腺细胞对刀豆球蛋白A(ConA)刺激的增殖能力增强(P<0.01)。结论 EAMG小鼠模型存在中枢耐受缺陷,AIRE基因通过调节胸腺异位基因的表达和Treg细胞比例而在EAMG的发病中起作用。
- 杜伟伟李劲频陈泽志刘竞丽莫雪安孙圣刚
- 关键词：CD4阳性T淋巴细胞CD4+CD25+调节性T细胞
- 微小RNA在全身型重症肌无力患者胸腺中的变化及其免疫调节作用
- 李劲频刘竞丽陈莉陈泽志杜伟伟黄立
- 一、课题来源与背景：重症肌无力是神经肌肉接头处传递障碍的获得性自身免疫性疾病，其发病机制与胸腺免疫功能异常有密切关系，然而其具体途径尚未阐明。miRNA是新近发现的小RNA分子，其主要作用涉及基因的转录后调节，据研究人类...
- 关键词：
- 关键词：重症肌无力
- 重症肌无力伴胸腺瘤患者胸腺内microRNA-125a-5p对FOXP3基因表达调控的初步研究
- <正>目的研究重症肌无力伴胸腺瘤(myasthenia gravis with thymoma,MGT)患者瘤旁胸腺与正常对照者胸腺microRNA的差异表达,预测筛选与MG相关的microRNAs,并探讨miR-125...
- 李劲频杜伟伟陈泽志刘竞丽莫雪安
- 文献传递
