钱瑾
- 作品数：11 被引量：15H指数：2
- 供职机构：南京医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省高校自然科学研究项目江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 外源性双链RNA在蚊虫细胞中介导的基因沉默(英文)被引量：1
- 2004年
- 目的 近年来 ,双链RNA介导的基因沉默 (RNA干扰 )已在许多动植物中发现 ,并成为研究基因功能的强有力的工具。为确定蚊虫细胞中是否有RNA干扰现象 ,以期为利用RNAi效应消除蚊虫抗药性研究奠定基础。 方法 设计 5′端带T7启动子的绿色荧光蛋白 (GFP)及糜蛋白酶特异性引物 ,PCR扩增目的基因获得 5′端带有T7启动子DNA片段 ,体外转录成单链RNA ,退火后形成双链RNA。转染带有GFP基因的昆虫细胞表达载体 pAct .GFP和双链RNA进入C6/ 3 6蚊虫细胞 ,72h后收集细胞 ,用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测GFP的表达差异 ,用半定量RT PCR检测GFP的mRNA的表达水平。 结果 转染糜蛋白酶基因双链RNA和 pAct .GFP质粒的细胞及仅转染pAct .GFP的细胞的GFP表达水平没有明显差异 ;转染GFP基因的双链RNA和pAct .GFP质粒的细胞的GFP表达水平显著下降 ,达 40 %～ 5 0 % ,GFP的mRNA的表达水平也相应下降了 60 %。 结论在蚊虫细胞内 ,双链RNA能特异性的抑制相应的同源性基因的表达 ,引起基因沉默 。
- 公茂庆顾燕马磊李秀兰胡小邦孙艳孙立新孙静钱瑾朱昌亮
- 关键词：白纹伊蚊RNA干扰基因沉默C6/36细胞
- 胰蛋白酶作为有机杀虫剂降解剂的应用
- 本发明涉及一种胰蛋白酶的新用途，具体是胰蛋白酶作为有机杀虫剂降解剂的应用。由于胰蛋白酶可直接降解有机杀虫剂，且通过基因工程可大量生产，这就为大规模应用于清除农产品表面的残留杀虫剂、治理被杀虫剂污染的土壤和废水、对杀虫剂中...
- 马磊孙立新孙艳钱瑾孙静公茂庆沈波田海生李秀兰朱昌亮
- 文献传递
- 胰蛋白酶作为有机杀虫剂降解剂的应用
- 本发明涉及一种胰蛋白酶的新用途，具体是胰蛋白酶作为有机杀虫剂降解剂的应用。由于胰蛋白酶可直接降解有机杀虫剂，且通过基因工程可大量生产，这就为大规模应用于清除农产品表面的残留杀虫剂、治理被杀虫剂污染的土壤和废水、对杀虫剂中...
- 马磊朱昌亮孙艳孙立新钱瑾沈波张东辉
- 文献传递
- 蚊抗药性相关糜蛋白酶基因的表达、纯化及活性分析
- 2006年
- 目的表达、纯化淡色库蚊溴氰菊酯抗性相关糜蛋白酶（NYD-Ch）基因并进行酶活性分析。方法应用PCR和基因重组技术，构建原核表达载体，表达目的蛋白；用酶促底物法测定表达蛋白NYDCh的酶学活性和最适pH值。结果成功构建重组表达载体pET32a（＋）／NYD-Ch，并转化到感受态菌E．coli BL21（DE3）中。SDS-PAGE和Western blot显示，目的蛋白分子质量与理论值相符。NYD-Ch最大活力通过S（Ala）2ProPhe-pNA获得。NYD-Ch活力随pH的增高而增大，在pH8．01～11．0的范围内较高，pH10．0时达最高。抑制剂PMSF、SBTI、TPCK对NYD-Ch酶活力均有明显的抑制作用。结论成功表达了NYD-Ch蛋白，并分析了其酶学活性。本结果为深入研究NYD-Ch与杀虫剂抗性关系奠定基础。
- 孙艳马磊钱瑾孙静孙立新
- 关键词：糜蛋白酶原核表达纯化酶活性
- 淡色库蚊抗药性相关新基因—NYD-MLC2克隆、序列分析及表达载体构建
- 【目的】 鉴定淡色库蚊溴氰菊酯抗性和敏感品系中肌球蛋白轻链2基因/(NYD-MLC2/)的表达差异，获取NYD-MCL2 cDNA全长序列，并构建NYD-MLC2原核和昆虫表达载体，为进一步研究奠定基础。
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- 钱瑾
- 关键词：淡色库蚊抗药性克隆原核表达载体
- 文献传递
- 淡色库蚊抗药性相关基因——NYD-MLC2基因的克隆与分析被引量：5
- 2006年
- 目的:获取淡色库蚊抗药性相关基因NYD-MLC2的cDNA全长序列并鉴定其在抗性品系和敏感品系中的表达差异。方法:根据抑制性差减杂交(SSH)结合cDNA芯片分离获得的淡色库蚊抗药性相关NYD-MLC2基因片段序列设计引物,采用快速扩增cDNA末端法(rapidamplificationofcDNAends,RACE)扩增NYD-MLC2基因3′、5′端,经对位拼接获得全长序列,并进行生物信息学分析;荧光定量PCR验证此基因在抗性和敏感品系的表达差异。结果:获得淡色库蚊NYD-MLC2cDNA全长序列,开放阅读框为630bp(GenBank/NCBIDQ140391),编码210个氨基酸。蛋白质序列分析显示,NYD-MLC2与冈比亚按蚊(Anophelesgambiae)一个未知功能的蛋白同源性最高,为91%;实时荧光定量PCR结果显示,NYD-MLC2在淡色库蚊溴氰菊酯抗性品系中的表达量是敏感品系的4.08倍。结论:获得淡色库蚊抗药性相关NYD-MLC2基因cDNA全长序列,并证实其在淡色库蚊溴氰菊酯抗性品系中高表达,提示NYD-MLC2与淡色库蚊溴氰菊酯抗药性相关,值得进一步研究。
- 钱瑾孙静孙立新孙艳胡小邦马磊朱昌亮
- 关键词：淡色库蚊抗药性RACE定量PCR
- 淡色库蚊抗性相关基因——NYD-GBE基因的克隆与分析被引量：2
- 2006年
- 目的:获取淡色库蚊抗药性相关NYD-GBE基因cDNA全长序列并验证其在抗性品系和敏感品系中的表达差异。方法:根据抑制性差减杂交(SSH)结合cDNA芯片分离获得的淡色库蚊抗性相关NYD-GBE基因片段设计引物,采用快速扩增cDNA末端法(rapidamplificationofcDNAends,RACE)扩增糖原分支酶基因5′、3′端,经对位拼接获得全长序列,并用相应的软件进行生物信息学分析。结果:获得淡色库蚊NYD-GBEcDNA全长序列,开放阅读框为2070bp(GeneBank/NCBIDQ102393),编码689个氨基酸。蛋白质序列分析显示,NYD-GBE与冈比亚按蚊(Anophelesgambiae)和拟暗果蝇(Drosophilapseudoobscura)一个未知功能的蛋白同源性最高,为82%和72%,与人糖原分支酶的基因同源性次之为60%。荧光定量PCR结果显示,NYD-GBE在淡色库蚊溴氰菊酯抗性品系中的表达量是敏感品系的19.7倍。结论:获得淡色库蚊抗药性相关NYD-GBE基因全长cDNA序列,并证实其在淡色库蚊溴氰菊酯抗性品系中高表达,提示NYD-GBE与淡色库蚊溴氰菊酯抗性相关,值得进一步研究。
- 孙静钱瑾孙立新胡小邦孙艳马磊朱昌亮
- 关键词：淡色库蚊抗药性RACE克隆定量PCR
- 糜蛋白酶作为有机杀虫剂降解剂的应用
- 本发明涉及一种糜蛋白酶的新用途，具体是糜蛋白酶作为有机杀虫剂降解剂的应用。由于糜蛋白酶可直接降解有机杀虫剂，且通过基因工程可大量生产，这就为大规模应用于清除农产品表面的残留杀虫剂、治理被杀虫剂污染的土壤和废水、对杀虫剂中...
- 李秀兰孙立新孙艳钱瑾孙静公茂庆沈波田海生马磊朱昌亮
- 文献传递
- 伴21号染色体核型异常的骨髓增生异常综合征患者的临床特征被引量：2
- 2021年
- 目的:探讨伴21号染色体核型异常的骨髓增生异常综合征(MDS)患者的临床特点。方法:回顾性分析155例MDS患者的临床资料,并对伴21号染色体核型异常患者的临床特征、生存及预后相关因素进行分析。结果:155例MDS患者中,5q-综合征4例,MDS-EB-I 41例,MDS-EB-II 35例,MDS-SLD 27例,MDS-MLD 46例,MDSRS-SLD 1例,MDS-U 1例;中位随访时间为11.0(0.1-120.9)个月。155例MDS患者中,13例(9.0%)为伴21号染色体核型异常;其中单纯+21 5例,del(21q12) 1例,+8、+21 1例,i(21q) 1例,20q-、+21 1例,涉及21号染色体的复杂核型4例;MDS-SLD 2例,MDS-MLD 4例,MDS-EB-I 5例,MDS-EB-II 2例。13例患者的中位生存期为3.1(0.1-6.7)个月。结论:伴21号染色体异常在MDS中少见,且预后较不含21号染色体核型的患者差。
- 钱瑾夏珺谢新王婧毛静珏周新
- 关键词：骨髓增生异常综合征核型分析
- 糜蛋白酶作为有机杀虫剂降解剂的应用
- 本发明涉及一种糜蛋白酶的新用途，具体是糜蛋白酶作为有机杀虫剂降解剂的应用。由于糜蛋白酶可直接降解有机杀虫剂，且通过基因工程可大量生产，这就为大规模应用于清除农产品表面的残留杀虫剂、治理被杀虫剂污染的土壤和废水、对杀虫剂中...
- 朱昌亮孙艳孙立新马磊钱瑾沈波张东辉
- 文献传递
