郭晓夏
- 作品数：11 被引量：70H指数：4
- 供职机构：北京大学人民医院更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金“首都临床特色应用研究”专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 内皮Adora2b活化可减轻脂多糖诱导的肺微血管内皮炎症被引量：4
- 2019年
- 目的探讨内皮低亲和力A2b腺苷受体(Adora2b)对脂多糖(LPS)诱导肺微血管内皮炎症的调控作用及机制.方法原代培养大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC),血清饥饿24 h后,采用Adora2b特异性激动剂BAY60-6583(0.1、1、10μmol/L)或抑制剂PSB1115(1μmol/L)预处理1 h,然后再加入LPS(100μg/L);同时设立空白对照组、LPS组、BAY60-6583单独处理组和PSB1115单独处理组.各组细胞培养24 h后,采用膜联蛋白V/碘化丙啶(Annexin V/PI)双染色法检测早期细胞凋亡率,用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定细胞上清液中炎性因子含量,用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)测定趋化因子和黏附分子的mRNA表达;分离提取大鼠静脉血中性粒细胞(PMN),观察体外PMN黏附迁移情况,用异硫氰酸荧光素-白蛋白(FITC-albumin)法检测PMN黏附迁移后PMVEC单层通透性,用荧光探针DCFH-DA检测细胞内氧化应激水平.结果与空白对照组相比,LPS组早期细胞凋亡率明显升高,上清液中早期炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量明显增加,趋化因子如CXC基序趋化因子配体1(CXCL-1)、CXC基序趋化因子配体3(CXCL-3)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)以及黏附分子如E-选择素、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)的mRNA表达均明显升高,黏附迁移的PMN增多,PMVEC单层通透性升高,细胞内活性氧水平升高.与LPS组比较,BAY60-6583预处理能剂量依赖性地降低早期细胞凋亡率,减少PMN迁移,降低PMVEC单层通透性,0.1μmol/L时差异即有统计学意义〔凋亡率:(21.12±2.12)%比(27.66±3.57)%,PMN迁移细胞数(个/HP):260.60±18.24比290.20±16.48,通透系数(Pd,×10-6 cm/s):28.28±2.04比32.55±2.13,均P<0.05〕,并能剂量依赖性减少早期促炎因子分泌,降低趋化因子和黏附分子的mRNA表达,1μmol/L时差异均有统计学意义〔IL-1β(ng/L):475.75±63.15比755.25±67.42,TNF-α(ng/L):560.25±69.96比818.75±60.92,CXCL-1 mRNA(2-ΔΔCt):3
- 郭晓夏安友仲
- 关键词：急性呼吸窘迫综合征肺微血管内皮炎症
- 急性呼吸窘迫综合征患者机械通气保留自主呼吸的利弊与时机被引量：9
- 2015年
- 机械通气是急性呼吸窘迫综合征（ARDS）患者最重要的支持手段，具有改善气体交换、减少呼吸作功、缓解呼吸肌疲劳之利，但非生理的正压通气同时也具有导致呼吸机相关性肺损伤（VILI）之弊。机械控制通气（CMV）还有增加呼吸机相关性膈肌损伤（VIDD）的风险。如何协调非生理的CMV与患者生理性的自主呼吸（SB），降低其彼此失调而诱发肺损伤的风险，并且减少乃至脱离机械通气支持，使患者平缓地过渡到SB，是近年来ARDS治疗研究的热点之一。
- 郭晓夏安友仲
- 关键词：保留自主呼吸机械通气支持呼吸机相关性肺损伤呼吸肌疲劳生理性
- 腺苷A2B受体活化对TNF-α致人肺微血管内皮细胞炎性损伤的影响被引量：2
- 2018年
- 目的探讨腺苷A2B受体（A2BR）在肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导肺微血管内皮炎性损伤中的作用及机制。方法体外培养人肺微血管内皮细胞（HPMECs），分别进行TNF-α剂量-时效实验和A2BR靶向激动剂／抑制剂干预实验。①剂量一时效实验：先将细胞分为5组，分别加入终浓度为0（空白对照）、20、50、100、150μg/L的TNF-α孵育24h，选最佳刺激浓度；另取细胞分为6组，以终浓度100μg／LTNF—α分别培养HPMECs0、4、8、12、24、36h，确定最佳作用时间。检测各组细胞A2BmRNA和蛋白表达情况。②A2BR的靶向激动剂／抑制剂干预实验：将细胞分为1μmol／LA2BR靶向激动剂BAY60—6583＋100LTNF—α组（B＋T组）、μmol／LA2BR靶向抑制剂PSBlll5＋100删LTNF-α组（P＋T组）和TNF-α、BAY60—6583、PSBlll5单独刺激组以及空白对照组。检测各组细胞活性、细胞周期以及血管内皮细胞黏附分子-1（VCAM-1）、白细胞介素-1p（IL-1p）的蛋白表达水平。结果①剂量一时效实验：将空白对照组的值设为1，随着TNF—α浓度的升高，A2BRmRNA（2^-△△Ct）及蛋白（灰度值）表达水平逐渐增加，以100μg／LTNF—α作用后A2BRmRNA及蛋白表达水平升高最为显著（分别为7．95±0．78和1．84±0．16）；用100μg／LTNF—d作用HPMECs不同时间后，随处理时间延长A2BR的mRNA（2。△act）和蛋白（灰度值）表达水平均逐渐增加，以作用24h升高最显著（分别为7．93±1．39和1．76±0．07）。②A2BR特异性激动剂／抑制剂干预实验：与空白对照组比较，TNF-α组细胞活性明显降低[（89．28±2．21）％比100％]，进入G1期的细胞数明显增多[（62．21±1．11）％比（34．40±0．47）％]，进入S＋G2期的细胞数明显减少[（37．79±1．11）％比（65．60±0．47）％]，VCAM-1和IL-1B蛋白表达明显增加[VCAM-1（灰度值）：12．94±1．18比1；IL-1B（灰度值）：3．03±0．23比1，�
- 王慧霞郭晓夏赵慧颖王梦楠安友仲
- 关键词：急性呼吸窘迫综合征
- RNAi干扰大鼠VSMCs钟基因Per2对Dbp及AT_1受体基因表达的影响
- 2018年
- 目的应用RNAi技术干扰大鼠A7r5血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)Per2基因并检测VSMCs时钟基因Bmal1、输出基因Dbp及AT1受体基因(AGTR1)m RNA表达的变化,初步探讨时钟基因、输出基因及AGTR1间的相关性。方法应用已筛选携带大鼠Per2基因干扰序列的慢病毒载体转染大鼠血管平滑肌A7r5细胞,通过RT-PCR方法检测时钟基因Per2及Bmal1、钟控基因Dbp和AGTR1 m RNA水平及节律变化。结果慢病毒载体转染A7r5细胞后,RT-PCR方法检测钟基因Per2的m RNA峰值时相后移,表达节律异常;钟基因Bmal1的m RNA表达峰值增强,表达节律未受影响;下游输出基因Dbp的m RNA表达明显受抑,表达节律异常;AGTR1的m RNA表达后期明显下降,提示其变化延迟于Per2变化。结论通过RNAi技术沉默大鼠血管平滑肌细胞中时钟基因Per2表达,使钟基因Bmal1反向增强,明显抑制输出基因Dbp的表达,影响其节律,可能造成AGTR1的异常延后表达。
- 王翔凌孙宁玲马丽萍郭晓夏姜娟何湘君
- 关键词：时钟基因
- 在ICU进行肺部超声的培训方法探索和效果评价被引量：3
- 2022年
- 目的评价“1+6”肺部超声培训模式的可行性及效果。方法以肺部超声评分系统为培训内容,选取2017年12月至2019年3月能在北京大学人民医院重症监护病房(ICU)学习至少3个月的学员作为研究对象,其中本科室医师7名,轮转研究生3名,进修医师5名,1名因个人原因中途退出培训,最终14名完成教学计划纳入本研究。所有学员均进行1次深度理论讲解+6次(实践+阶段性评估)的循环评估培训模式。通过比较老师和学员进行肺部超声检查时病变判别的一致性、操作时间的差异,评估学员对肺部超声检查掌握的准确性和熟练程度,了解肺部超声检查的难点和培训周期等。结果除去评分为2分的病变因病例数太少最终没有达到Kappa值大于0.6的目标(Kappa值为0),其余病变判读在所有参加培训的学员中,到第6次操作时与教师的判读准确性均达到基本一致(Kappa值分别为0.93、0.62、0.93)。所有学员肺部超声评分总分均在最后1次操作时与老师的评分基本一致,Kappa值为0.8。在培训结束时,所有学员检查用时与老师基本接近;所有学员的培训周期均少于3个月。结论通过肺部超声评分系统的设计,以及“1次深度理论讲解+6次(实践+阶段性评估)”的循环评估培训后,可较明显地减少超声检查的主观误差,缩短肺部超声检查培训的周期。
- 吕杰吕姗郭晓夏赵慧颖安友仲
- 大鼠PER2基因RNAi慢病毒载体的构建及干扰效率的测定被引量：2
- 2014年
- 目的构建及筛选有效干扰大鼠血管平滑肌细胞PER2基因的shRNA慢病毒载体,并测定其干扰效率。方法设计大鼠PER2的siRNA靶序列,插入慢病毒载体质粒pGLV-U6-EGFP中,构建pLentivirus-per2-rat表达重组体并转染至A7r5大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞内,利用Real-time PCR方法检测PER2基因的mRNA表达水平,筛选有效沉默钟基因PER2表达的RNAi慢病毒载体。结果经电泳、基因测序证实插入的目的序列正确,有PER2表达,成功构建了pLentivirus-per2-rat表达重组体;转染慢病毒载体pLentivirus-per2-rat至A7r5大鼠胸血管平滑肌细胞,测定转染效率达70%;Real-time PCR检测PER2基因的mRNA相对表达量,筛选出有效干扰大鼠血管平滑肌细胞钟基因Per2表达的siRNA片段,使PER2mRNA表达量下调约84%。结论成功构建了大鼠PER2的RNAi慢病毒载体,为进一步研究时钟基因的功能奠定了基础。
- 王翔凌孙宁玲马丽萍郭晓夏姜娟王鲁雁何湘君
- 关键词：RNA干扰慢病毒载体血管平滑肌细胞时钟基因
- ICU后综合征在镇痛镇静谵妄指南、镇痛镇静集束化措施及eCASH中的干预建议被引量：35
- 2017年
- ICU后综合征(PICS)是指重症患者转出ICU后,在认知、心理和躯体方面新出现或加重的一系列功能障碍,严重影响患者的身体恢复和生存质量,并在出院后仍持续影响患者及其家庭。近年提出的镇痛镇静谵妄(PAD)指南、镇痛镇静集束化措施(ABCDE bundle)和e CASH滴定式镇静策略,均围绕PICS的防治,尤其是疼痛、躁动和谵妄的评估与治疗等方面提出了有效的防治措施。
- 郭晓夏安友仲
- 关键词：镇痛
- A2b腺苷受体活化降低脂多糖诱导的肺微血管内皮通透性被引量：4
- 2018年
- 目的探讨A2b腺苷受体（Adora2b）在脂多糖（LPS）诱导人肺微血管内皮通透性中的作用及机制。
方法原代培养人肺微血管内皮细胞（HPMECs），进行LPS量效-时效实验及Adora2b激动剂/抑制剂干预实验。①量效-时效实验：以1、10、100、1000 μg/L的LPS作用24 h，或以100 μg/L的LPS作用4、8、12、16、24 h后，用细胞毒性实验检测细胞活性，用实时荧光反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测Adora2b表达。② Adora2b激动剂/抑制剂干预实验：将血清饥饿后的HPMECs，用Adora2b激动剂BAY60-6583（0.1、1、10 μmol/L）或Adora2b抑制剂PSB1115（1 μmol/L）预处理1 h，再加入100 μg/L的LPS处理24 h；同时设立空白对照、LPS、BAY60-6583和PSB1115单独处理组。用异硫氰酸荧光素（FITC）-葡聚糖法检测HPMECs单层通透性，用流式细胞仪测定细胞周期，用RT-PCR检测内皮细胞间连接蛋白和促血管生成因子的表达。结果量效-时效实验：LPS可诱导HPMECs细胞活性下降，并呈时间-剂量依赖性。与对照组比较，100 μg/L和1000 μg/L的LPS作用后HPMECs表面Adora2b蛋白表达明显上调；Adora2bmRNA表达呈时间-剂量依赖性增高。Adora2b激动剂/抑制剂干预实验：与对照组比较，LPS可明显增加HPMECs单层通透性，抑制细胞活性和细胞增殖，降低细胞间连接蛋白和促血管生成因子表达。与LPS组比较，0.1、1、10 μmol/L BAY60-6583预处理可呈剂量依赖性降低HPMECs单层通透性通透系数（Pd）：（203.06±15.24）%、（164.15±17.82）%、（125.69±10.38）%比（218.53±12.05）%，提高细胞活性（48.64±5.05）%、（59.58±2.71）%、（94.89±12.17）%比（35.97±5.40）%，促进细胞增殖S＋G2期细胞数：（24.36±1.40）%、（32.27±0.95）%、（40.05±2.99）%比（18.83±0.73）%；10 μmol/L BAY60-6583预处理还可以上调细胞间连接蛋白的mRNA表达钙黏蛋白（VE-cadherin）mRN
- 郭晓夏安友仲
- 关键词：急性肺损伤
- cGAS/STING通过NLRP3炎性小体调控人肺微血管内皮细胞炎症的作用机制被引量：2
- 2021年
- 目的探讨鸟嘌呤核苷酸腺嘌呤核苷酸合成酶(cGAS)/干扰素激活蛋白(STING)通过NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体调控人肺微血管内皮细胞(HPMVECs)炎症的作用机制。方法原代培养HPMVECs,进行脂多糖(LPS)量效实验及cGAS、STING和NLRP3抑制干预实验。(1)量效实验:以50、100、1000 ng/ml的LPS作用24 h后(分别为50 ng/mlLPS组、100 ng/mlLPS组、1000 ng/ml LPS组),用实时荧光反转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)分别检测cGAS、STING和NLRP3表达。(2)cGAS抑制干预实验:使用cGAS(siRNA)转染,再加入100 ng/ml的LPS处理24 h;同时设立空白对照组、LPS刺激组、siRNA单独处理组,采用WesternBlot检测STING、NLRP3,及NLRP3下游因子白介素(IL)-1β和IL-18的表达。(3)STING抑制干预实验:使用STING(siRNA)转染,再加入100 ng/ml的LPS处理24 h;同时设立空白对照组,采用WesternBlot检测cGAS、NLRP3,及NLRP3下游因子IL-1β和IL-18的蛋白表达。(4)NLRP3抑制干预实验:使用NLRP3炎性小体抑制剂MCC950预处理30 min,再加入100 ng/ml的LPS处理24 h;同时设立空白对照组,采用WesternBlot检测cGAS、STING,及NLRP3下游因子IL-1β和IL-18的蛋白表达。结果(1)量效实验:与空白对照组比较,HPMVECs中cGAS、STING、NLRP3的mRNA水平和蛋白表达均显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)cGAS抑制干预实验:与空白对照组比较,LPS刺激HPMVECs,cGAS表达水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);与LPS刺激组比较,抑制cGAS时,siRNA+LPS处理组STING、NLRP3及其下游因子IL-1β、IL-18的表达水平均显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)STING抑制干预实验:与空白对照组比较,LPS刺激HPMVECs,STING表达水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);与LPS刺激组比较,抑制STING时,NLRP3及其下游因子IL-1β、IL-18的表达水平均显著降低,差异有统计学意义(P<0.05),而cGAS的表达水平无显著降低(P>0.05)。(4)NLRP3抑制干预实验:与空�
- 姜硕王梦楠赵慧颖郭晓夏王慧霞安友仲
- 肺部超声指导危重症患者肺部病变诊疗的效果评价被引量：10
- 2021年
- 目的观察应用肺部超声评分(LUS)指导危重症患者肺部病变诊疗的效果.方法选择2017年9月至2019年10月北京大学人民医院重症监护病房(ICU)收治的ICU住院时间>2 d的212例危重症患者作为研究对象,按随机数字表法分为观察组和对照组,每组106例.观察组以LUS评分检查为主指导肺部病变诊疗;对照组常规应用床旁胸部X线或胸部CT指导肺部病变诊疗.观察两组患者的影像学检查应用情况、肺部物理及药物治疗情况,绘制Kaplan-Meier生存曲线,分析患者28 d累积生存情况.结果与对照组相比,观察组患者床旁胸部X线检查次数明显减少〔2(1,3)次比3(2,7)次,P<0.001〕,肺复张及胸腔积液引流更积极主动〔分别为6(2,10)次比5(2,8)次,17.92%(19/106)比7.55%(8/106),均P<0.05〕,根据影像学检查改变治疗策略的次数也增加〔3(2,5)次比2(1,3)次,P<0.001〕.106例行肺部超声检查的患者中,28 d内存活95例、死亡11例.随入组时间延长,死亡患者LUS评分呈逐渐升高趋势,存活患者LUS评分较稳定.观察组患者28 d累积生存率略高于对照组〔89.62%(95/106)比82.08%(87/106)〕,但差异无统计学意义.结论与床旁胸部X线相比,LUS评分对于评估长期住ICU的危重患者有明显优势,可以指导ICU医师及时调整针对肺部病变的诊疗措施,对改善患者预后有一定指导作用.
- 吕杰吕姗郭晓夏赵慧颖安友仲
- 关键词：肺部病变危重症
