郭善一
- 作品数：35 被引量：206H指数：8
- 供职机构：天津医科大学天津市内分泌研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金天津市自然科学基金天津市高等学校科技发展基金计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 人血浆载脂蛋白E的分离提纯
- 1992年
- 利用仅2.5h的不连续密度梯度超速离心,可自人血浆分离获得纯净的极低密度脂蛋白(VLDL)。VLDL脱脂后,其可溶成分经Heparin-Sepharose CL-6B亲和层析柱,可分为低盐洗脱峰Ⅰ和高盐洗脱峰Ⅱ。峰Ⅱ经SDS-PAGE鉴定为单一染色带,测定其分子量为33900。此即为纯净的人血浆载脂蛋白E,载脂蛋白E的分离提纯为制备其羊克隆抗体和进行血浆浓度及表型测定提供了有利条件。
- 解用虹徐秀双郭刚郭善一王维兆
- 关键词：载脂蛋白E
- 106例天津老年人载脂蛋白E基因型的测定被引量：3
- 1999年
- 载脂蛋白Ｅ的遗传多态性不仅可以明显地影响机体的血脂水平，还和一些疾病的发生和发展密切相关。晚近不少学者报告早老性痴呆的发病与 ε_４等位基因密切相关。利用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ方法对１０６例天津市老年人的载脂蛋白Ｅ基因型进行了测定。该方法用血量少，操作简便，结果可靠，可用于早老性痴呆易患人群的筛选。测定结果显示，老年人群 ε_４ 等位基因频率仅为５．７％，不仅明显低于西方人群，也低于非老年国人，提示中国老年人可能有较低的早老性痴呆遗传易患危险倾向。
- 郭刚郭善一杨洁陈涛牛文彦解用虹
- 关键词：载脂蛋白E类痴呆等位基因老年性痴呆
- 淫羊藿对去卵巢大鼠骨组织白细胞介素6mRNA表达的影响被引量：44
- 2000年
- 目的 了解淫羊藿对去卵巢大鼠白细胞介素 6 (IL 6 )mRNA表达水平的影响 ,探讨淫羊藿对绝经后骨质疏松的治疗机理。方法 将 40只雌性Wistar大鼠随机分成假手术组、去卵巢 (OVX)组、尼尔雌醇组和淫羊藿组 ,每组 10只。假手术组进行假手术 ,其余各组通过切除卵巢制备绝经后骨质疏松模型 ,对尼尔雌醇组和淫羊藿组分别给予尼尔雌醇 (0 1mg/kg体重 )和淫羊藿 (0 5g/kg体重 )治疗 3个月。 3个月后测量腰椎骨密度 (BMD) ,然后处死各组动物 ,直接从骨组织中提取总RNA ,采用相对半定量逆转录 聚合酶链反应技术检测IL 6mRNA表达。结果 淫羊藿组BMD[(0 10 3± 0 0 0 8)g/cm3]比OVX组 [(0 0 89± 0 0 19)g/cm3]显著增加 (P <0 0 5 ) ,而与尼尔雌醇组 [(0 110± 0 0 13)g/cm3]和假手术组 [(0 115± 0 0 16 )g/cm3]比较 ,差异无显著性 (P >0 0 5 )。尼尔雌醇组IL 6mRNA水平显著低于OVX组 (P <0 0 1) ,与假手术组比较 ,差异无显著性 (P >0 0 5 )。淫羊藿组IL 6mRNA水平虽高于尼尔雌醇组和假手术组 (P <0 0 1) ,但显著低于OVX组 (P <0 0 1)。结论 IL 6参与了雌激素减退所致的骨吸收 ,淫羊藿可以抑制IL 6mRNA表达 ,减少骨吸收和骨量丢失。
- 王宝利权金星郭善一贾红蔚邱明才
- 关键词：淫羊藿卵巢切除术
- 人胰岛细胞瘤cDNA文库的构建被引量：1
- 1995年
- 采用一种简单高效的互补脱氧核糖核酸（ｃＤＮＡ）克隆技术制备人胰岛细胞瘤的ｃＤＮＡ文库。方法的主要过程如下：以人胰岛细胞瘤的Ｐｏｌｙ（Ａ）＋－ＲＮＡ为模板，以含ＮｏｔＩ切点的ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）１５为引物，在反转录酶作用下合成第一股单链ｃＤＮＡ；用Ｅ．ｃｏｌｉＲＮａｓｅＨ除去Ｐｏｌｙ（Ａ）＋－ＲＮＡ，并以Ｅ．Ｃｏｌｉ ＤＮＡ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｉ Ｅ．Ｃｏｌｉ ＤＮＡ Ｌｉｇａｓｅ和Ｔ_４ ＤＮＡ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ催化合成第二股即成为双链ｃＤＮＡ；加接ＳａｌＩ接头并经ＮｏｔＩ酶切后，将ｃＤＮＡ通过ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－５００ＨＲ柱使大小不同的片段分离，再以质粒ｐＳＰＯＲＴ１为载体与ｃＤＮＡ退火连接并转化至Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５ａ，得到人胰岛细胞瘤的ｃＤＮＡ文库。克隆效率为１×１０６转化子／μｇｃＤＮＡ，有ｃＤＮＡ插入片段的转化子占９２％。
- 宋学文郭善一周仁赵崇张镜宇
- 关键词：胰岛细胞瘤胰岛肿瘤CDNA文库
- 大鼠谷氨酸脱羧酶(GAD)毕赤酵母表达重组子的构建被引量：2
- 2004年
- 目的 :构建大鼠谷氨酸脱羧酶(glutamicaciddecarboxylase,GAD)巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)表达重组子 ,探索一条真核细胞高效表达rGAD的新途径。方法 :以 pUC18_GAD质粒为模板PCR扩增出大鼠GAD65基因 ,将其克隆入PGEM_Teasy载体 ,继而将其克隆到毕赤酵母分泌型质粒表达载体 pPIC9K中 ,重组质粒线性化后PEG法转染入毕赤酵母菌株GS115,PCR筛选转化子。结果 :DNA序列分析和PCR鉴定表明成功构建了大鼠谷氨酸脱羧酶 (GAD)毕赤酵母表达重组子。结论
- 张颖郭善一梁东春王宝利
- 关键词：毕赤酵母
- 正常和去卵巢大鼠骨组织白细胞介素6 mRNA表达水平的研究被引量：1
- 2001年
- 权金星李茂欣王宝利邱明才郭善一高林
- 关键词：绝经后PMO白细胞介素6
- 碘过量对NOD和Balb／c鼠甲状腺TRAIL和TRAIL—sR1表达的影响被引量：1
- 2009年
- 目的观察碘过量对自身免疫性疾病敏感品系NOD鼠和非敏感品系Balb／c鼠甲状腺细胞凋亡相关基因肿瘤坏死因子的相关凋亡诱导配体（tumor neerosis faetor—related apoptosis—indueing ligand，TRAIL）和其受体TRAIL刺激性受体1（TRAIL—sR1）表达的影响，了解碘过量诱导实验性自身免疫性甲状腺炎（EAT）发病过程中TRAIL和TRAIL-sR1的作用机制。方法6～7周龄雌性NOD鼠和Balb／c鼠各16只，按体质量各随机分为对照组和碘过量（HI）组，每组8只。对照组饮高压灭菌水，HT组饮0．05％NaI添加水，饲养8周后处死。测量甲状腺相对质量，进行甲状腺组织形态学观察，测量血清甲状腺素（仉）和甲状腺刺激激素（TSH），检测甲状腺滤泡上皮细胞凋亡情况，应用实时定量PCR（realtimePCR）方法检测TRAIL和TRAIL—sR1mRNA表达情况。结果NOD鼠HI组甲状腺相对质量[（104．8±14．5）mg／kg]高于对照组[（71．8±20．4）mg／kg]，血清矾水平[（30．77±3．59）mmol／L]低于对照组[（36．43±2．66）mmol／L]，TSH水平[（6．98±0．66）μg／L]高于对照组[（5．55±0．56）μg／L]，组间比较差异均有统计学意义（f值分别为7．773、-9．526、-4．458，P均〈0．05）。HI组甲状腺出现滤泡扩张、胶质潴留及明显的淋巴细胞浸润伴灶性纤维化。Balb／c鼠HI组甲状腺相对质量[（155．8±20．8）mg／kg]高于对照组[（105．1±22．0）mg／kg]，血清TT4水平[（19．75±3．32）mmol／L]低于对照组[（23．46±6．21）mmol／L]，TSH水平[（4．14±1．71）μg／L]高于对照组[（3．55±1．41）μg／L]，组间比较差异均有统计学意义（￡值分别为7．554、-7．239、3．140，P均〈0．05）；HI组甲状腺仅有甲状腺滤泡扩张，胶质潴留，而未见明显的淋巴细胞浸润。HI组NOD鼠和Balb／c鼠甲状腺滤泡上皮细胞的凋亡指数（3．97±0．91、1．05±0．45）分别高于对照组（0．21�
- 刘凤华臧晓怡刘泽兵李庆欣于秀杰郭善一邓彤李兰英陈祖培
- 关键词：TNF相关凋亡诱导配体
- 大鼠脑cDNA文库的构建被引量：4
- 1996年
- 采用简单高效的ｃＤＮＡ合成技术制备Ｗｉｓｔａｒ大鼠脑ｃＤＮＡ基因文库，以纯化的ｐｏｌｙ（Ａ）＋－ＲＮＡ为模板，含ＮｏｔＩ切点的ｏｌｉｇｏ－（ｄＴ）１５为引物，在反转录酶的作用下，合成第一股单链ｃＤＮＡ；用Ｅ。ｃｏｌｉＲＮａｓｅＨ除去模板ＲＮＡ，并以Ｅ．ｃｏｌｉＤＮＡ聚合酶Ｉ，Ｅ．ｃｏｌｉＤＮＡ连接酶和Ｔ４ＤＮＡ聚合酶催化合成ｃＤＮＡ第二条链，即成为双链ｃＤＮＡ；此双股ｃＤＮＡ除０．５μｇ用于插入ｐＳＰＯＲＴＩ载体，转入Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５α，建成ｃＤＮＡ文库外，其余保存在－２０℃，以此ｃＤＮＡ为模板，应用ＰＣＲ方法，先后克隆了谷氨酸脱羧酶（ＧＡＤ，１８００ｂＰ）、神经元特异性烯醇化酶（ＮＳＥ，１３４０ｂＰ），甲状腺激素受体（Ｔ３－ｒｅｃｅｐｔｏｒ，１２３０ｂｐ）、胆囊收缩素（ＣＣＫ，３４５ｂｐ）的全编码基因．
- 宋学文赵崇周仁郭善一张镜宇
- 关键词：CDNA文库分子克隆
- 竞争性RT-PCR测定法及BMP-2mRNA的定量检测被引量：14
- 2000年
- 建立竞争性 PCR方法 ,以期用于转录水平基因表达的定量研究 .以检测大鼠颅骨骨细胞总RNA中骨形态发生蛋白 - 2 ( BMP- 2 ,bone morphogenetic protein- 2 ) m RNA含量为例 ,构建大鼠BMP- 2基因的竞争模板 ,以之为内对照进行竞争性 PCR.PCR反应结束后 ,电泳、拍照 ,扫描所扩增条带密度 ,作回归方程 .根据回归方程 ,计算出正常 7d Wistar大鼠颅骨总 RNA中 BMP- 2 m RNA含量为 1 .1 2 5amol/μg RNA.结果显示 ,成功构建了大鼠 BMP- 2基因的竞争模板 ,建立了可以测定大鼠颅骨骨细胞总 RNA中 BMP- 2 m RNA含量的竞争性 PCR方法 .
- 郭若霖郭善一鲍秋野张镜宇
- 关键词：基因表达调控MRNABMP-2
- 人肿瘤坏死因子受体的配体胞外段的原核表达及分析
- 2009年
- 新近报道糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体的配体(GITRL)具有抑制前体破骨细胞的作用,故命名为Osteostat,为深入研究其功能和机制,本研究原核表达人GITRL胞外段并进行活性分析。利用限制性内切酶Eco31I获得大肠杆菌偏嗜性GITRL的胞外段cDNA序列,构建了基于pQE-30Xa的原核表达载体,并在M15[pREP4]菌株中经IPTG诱导表达带有His融合标签的GITRL重组蛋白,主要以包涵体形式存在。经体外包涵体变性、复性及纯化后,采用SDS-PAGE和Western blotting进行分析和鉴定。同时建立了报告基因技术检测GITRL重组蛋白生物活性的方法,简单便捷、灵敏而且周期短,利用此方法分析了重组GITRL胞外段表达蛋白的生物活性。
- 焦艳丽郑纺李晓霞王宝利郭善一
- 关键词：原核表达报道基因
