郑元斌
- 作品数：6 被引量：31H指数：3
- 供职机构：南华大学基础医学院药物药理研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 降钙素基因相关肽对血管平滑肌细胞增殖及小凹蛋白1表达的影响被引量：20
- 2007年
- 目的观察降钙素基因相关肽在抑制血管平滑肌细胞增殖或肥大过程中是否伴有诱导其凋亡的作用,并探讨其作用机制是否涉及到血管平滑肌细胞内小凹蛋白1和caspase-3的变化。方法采用贴块法体外培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,增殖或肥大型血管平滑肌细胞通过血管紧张素Ⅱ刺激静止期血管平滑肌细胞24 h建立。用噻唑蓝比色法和流式细胞仪分析血管平滑肌细胞增殖、凋亡及细胞周期变化,吖啶橙/溴化乙啶染色观察细胞及细胞核形态改变,Western blotting法测定不同状态下血管平滑肌细胞内小凹蛋白1和caspase-3的表达。结果降钙素基因相关肽能降低血管紧张素Ⅱ诱导的增殖型血管平滑肌细胞的代谢活性、细胞周期增殖指数(P<0.05);形态学及流式细胞仪分析表明降钙素基因相关肽对增殖型血管平滑肌细胞无明显的诱导凋亡作用。同时发现降钙素基因相关肽使血管平滑肌细胞内小凹蛋白1的表达增加,而对caspase-3的表达无明显影响。结论降钙素基因相关肽能显著抑制血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖,但诱导血管平滑肌细胞凋亡的作用较小;其抑制增殖的细胞内信号传导途径可能与增强小凹蛋白1表达有关。
- 邓水秀曾泗宇任俊芳郑元斌廖端芳秦旭平
- 关键词：药理学降钙素基因相关肽血管平滑肌细胞细胞增殖小凹蛋白1
- 受体活性修饰蛋白1基因载体构建及其对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响被引量：6
- 2010年
- 目的探讨受体活性修饰蛋白1(RAMP1)表达载体的构建及其高表达RAMP1对血管平滑肌细胞增殖的影响。方法通过构建RAMP1大鼠基因开放阅读框的真核表达载体,利用脂质体将其转入原代培养的大鼠主动脉平滑肌细胞,G418筛选稳定表达细胞集落。逆转录-聚合酶链反应和蛋白印迹法检测RAMP1的表达量;MTT法测定细胞的增殖或生存率,并计算细胞倍增时间。结果成功构建RAMP1基因真核表达载体,脂质体能将RAMP1表达载体稳定转入血管平滑肌细胞,RAMP1高表达能明显增强降钙素基因相关肽抑制血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞生存率及明显延长其倍增时间。结论RAMP1高表达能增强CGRP抑制血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖。
- 郑元斌秦旭平孙飞唐江琼廖端芳
- 关键词：降钙素基因相关肽血管平滑肌细胞增殖
- RAMP1真核表达载体的构建及其对血管平滑肌细胞增殖的影响
- 目的: 1.构建大鼠来源的RAMP1真核表达载体。 2.观察RAMP1转染后对血管平滑肌细胞增殖。 方法: 第一部分:RAMP1真核表达载体的构建 设计大鼠 RAMP1基因开放阅读框(ORF)的PCR引物;提取...
- 郑元斌
- 关键词：血管平滑肌细胞真核表达载体
- 文献传递
- 高表达受体活性修饰蛋白1对血管紧张素Ⅱ和降钙素基因相关肽诱导的A10细胞降钙素受体样受体膜分布的影响被引量：2
- 2013年
- 目的探索受体活性修饰蛋白1(RAMP1)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和(或)降钙素基因相关肽(CGRP)诱导的降钙素受体样受体(CRLR)在血管平滑肌细胞(VSMC)的表达和分布的影响,进一步揭示CGRP抑制VSMC增殖的机制。方法 通过酶切、连接、转化等方法构建pCDNA3.1(+)-RAMP1真核表达载体并稳定转染至鼠源性血管平滑肌细胞株A10中,获得稳定高表达RAMP1的细胞系。无转染细胞、转染空载体〔pCDNA3.1(+)〕细胞和RAMP1高表达组细胞〔pCDNA3.1(+)-RAMP1〕分别用AngⅡ100 nmo.l L-1、CGRP 100 nmo.l L-1和CGRP+AngⅡ处理24 h,用MTT法检测细胞存活;逆转录PCR、Western印迹和免疫荧光法分别检测CRLR mRNA含量、蛋白表达及细胞膜分布。结果 单纯转染空质粒或RAMP1对细胞增殖无明显影响。AngⅡ处理对3种细胞存活的影响无显著差异。pCDNA3.1(+)-RAMP1细胞经CGRP处理24 h后,细胞存活明显高于其他两组细胞(P<0.05);经CGRP+AngⅡ处理,细胞存活明显低于其他两组(P<0.05)。AngⅡ,CGRP和CGRP+AngⅡ处理对3种细胞CRLR mRNA表达无明显影响,但CGRP处理使pCDNA3.1(+)-RAMP1细胞中CRLR蛋白明显高于其他两种细胞(P<0.05),而CGRP+AngⅡ处理使pCDNA3.1(+)-RAMP1细胞中CRLR蛋白明显低于其他两种细胞(P<0.05)。免疫荧光结果显示,经无血清或CGRP处理后,无转染细胞和pCDNA3.1(+)细胞中的RAMP1和CRLR主要分布在胞浆区域;经AngⅡ或CGPR+AngⅡ处理后,pCDNA3.1(+)-RAMP1细胞中RAMP1和CRLR在细胞膜上的分布多于无转染细胞和pCDNA3.1(+)细胞。结论 高表达RAMP1能增强CGRP抑制AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞增殖,其机制可能是通过RAMP1增加CRLR的膜分布,从而增强CGRP受体对CGRP的敏感性有关。
- 孙飞唐江琼郑元斌秦又发陈临溪秦旭平
- 关键词：降钙素基因相关肽
- 降钙素基因相关肽对大鼠血管平滑肌细胞CDK2和Cyclin E的影响被引量：6
- 2011年
- 目的:研究降钙素基因相关肽(CGRP)对大鼠血管平滑肌细胞中细胞周期蛋白依赖性激酶2(cyclin-dependent kinase 2,CDK2)和细胞周期蛋白E(Cyclin E)的影响,为阐明CGRP抑制血管平滑肌细胞增殖的细胞周期机制提供实验依据。方法:培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,分别用CGRP或/和10%FBS处理细胞。噻唑蓝比色法(MTT)观察CGRP对10%FBS诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响;流式细胞术分析细胞周期;Western blot检测CDK2和Cyclin E的表达。结果:CGRP能抑制10%FBS诱导的血管平滑肌细胞增殖,升高G0/G1期细胞百分比,降低S+G2+M期细胞百分比,抑制细胞内CDK2和Cyclin E表达。结论:CGRP能通过阻滞细胞周期由G0/G1期进入S期而抑制血管平滑肌细胞增殖,其作用机制可能与降低CDK2和Cyclin E表达有关。
- 邓水秀曾泗宇任俊芳郑元斌廖端芳秦旭平
- 关键词：降钙素基因相关肽血管平滑肌细胞细胞周期细胞周期蛋白E
- 受体活性修饰蛋白研究进展被引量：1
- 2008年
- 受体活性修饰蛋白(receptor activity-modifying proteins,RAMPs)属于单跨膜蛋白家族,分三个结构域,RAMP的N端和跨膜区决定本身的功能和受体表型,胞内C端对于配体的信号传导和受体循环有重要作用。目前发现有三个成员:RAMP1、RAMP2和RAMP3。RAMPs通过改变G蛋白偶联受体的糖基化,作用于配体结合区域来调节受体表型。RAMP1与降钙素受体样受体(calcitonin receptor like receptor,CRLR)结合表现出降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)受体表型:RAMP2和RAMP3与CRLR结合则对肾上腺髓质素(adrenomedullin,AM)表现高亲和力,与降钙素受体(calcitonin receptor,CTR)结合则作为胰淀粉样酶(amylin,AMY)受体。由此可见,RAMPs不仅调节受体与配体结合,还影响细胞内的蛋白相互作用调节细胞内信号传导来影响细胞的增殖、迁移、分化等生物学特性。RAMPs还对心血管系统的病理生理有重要调节作用。
- 郑元斌秦旭平
- 关键词：受体活性修饰蛋白G蛋白偶联受体信号传导心血管系统
