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邓涛
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张秋萍
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邓涛
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湖北医科大学...
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1997
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PCR结合核酸分子杂交放射自显影检测HPV16,18实验条件的研究
1997年
为建立一种快速、简便、高敏感性和特异性的检测消化道肿瘤组织中HPV16,18DNA序列的方法,用PCR扩增HPV16早期区E6的120bp片段和扩增HPV18E6、E7区267bp片段,扩增产物与相应的5′-末端P32标记的特异性寡核苷酸探针进行斑点杂交放射性自显影。探讨了影响PCR和杂交的关键因素,从中选出较佳的反应条件:即PCR退火温度及杂交温度均为55℃,反应缓冲液镁离子浓度为1.5mmol/L,引物浓度各为50pmol/100μl,探针浓度各为1.0pmol/ml,杂交时间3h,放射性自显影时间24h。在上述条件下,该方法可检出低至0.01fg的HPV16或HPV18质粒DNA,HPV16与HPV18之间无交叉反应,为进一步探讨HPV与消化道肿瘤的关系奠定了基础。
邓涛
张秋萍
于皆平
罗和生
沈志祥
屈雪菊
关键词:
乳头状瘤病毒
消化道肿瘤
PCR
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