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鲑鱼甲病毒阳性核酸物质制备及RT-PCR检测方法的建立被引量：1: 2016年; 为建立快速检测鲑鱼甲病毒(Salmonid alphavirus,SAV)RT-PCR方法,根据Gen Bank公布的E2基因序列(1 375 bp)设计引物,扩增S AV E2全长基因,利用假病毒制备技术获得包裹E2核酸物质(RNA)的SAV假病毒溶液。以SAV假病毒作为阳性核酸物质质控品,以E2F:5'CCG-TTG-CGG-CCA-CAC-TGG-ATG 3',E2R:5'CCT-CAT-AGG-TGA-TCG-ACG-GCA-G 3'为引物,优化反应条件,建立SAV的RT-PCR检测方法。结果表明,该方法可扩增SAV E2特异性516 bp的DNA片段,引物最适反应浓度为1.0μmol·L-1,最佳退火温度为57.5℃,对SAV的三种亚型SAV1(V4640)、SAV2(V4619)、SAV5(V4638)检测结果均为阳性,对SVCV、IHNV和IPNV的PCR扩增结果均为阴性;并确定对SAV的核酸最低检出量达1.59 pg;以RT-PCR方法在不同时间对每份样品作3次重复检测,检测结果一致。表明此方法特异性强,敏感性高,稳定性和重复性较好,可用于SAV临床诊断和检测。; 刘敏杜航宋傲臣高帅唐丽杰蒋烨李一经; 关键词：SAV E2 RT-PCR

虹鳟肠道植物乳杆菌的分离及特性研究被引量：4: 2014年; 为筛选一株乳杆菌用于鱼类口服疫苗的活载体,研究从健康养殖的虹鳟肠道分离出58株形态特征不同的菌株,通过革兰氏染色、氧化酶、触酶反应筛选出18株革兰氏阳性杆菌,再通过生化反应筛选出5株表型不同的菌株。经16S r RNA序列同源性分析,5株均为植物乳杆菌。在8%Na Cl,0.5%胆盐,p H 3.0,7 g·L-1胰蛋白酶,10 g·L-1胃蛋白酶,60℃处理10 min时,几乎不影响菌体存活。5株菌对多种抗生素敏感,对革兰氏阳性及阴性细菌均有抑菌活性。通过荧光分子探针c FDA-SE标记细菌,分离株L1212在15 d的检测期内能在虹鳟肠粘膜定植,并有继续繁殖倾向。因此,植物乳杆菌L1212可作为益生菌应用于虹鳟口服疫苗载体及鱼类饲料添加剂开发。; 刘敏张英张琳琳蒋烨崔文姜艳萍乔薪瑗唐丽杰李一经; 关键词：植物乳杆菌药物敏感性抑菌活性虹鳟

鲑鱼甲病毒E1基因高保守区融合表达及免疫特性的分析: 鲑鱼甲病毒(salmonid alphavirus,SAV)隶属于披膜病毒科(Togaviridae),甲病毒属(Alphavirus),主要感染大西洋鲑(salmo salar)和虹鳟(Oncorhynchus myk...; 刘敏蒋烨李一经唐立杰杜航姜艳平; 关键词：原核表达免疫特性

鲑甲病毒的传入风险评估被引量：2: 2016年; 目前我国尚未有发现鲑甲病毒(SAV)感染的相关报道。如果SAV随进口贸易的鱼类进入我国,会给我国的水产养殖业造成很大的损失。为了保障我国水产养殖业的健康发展,针对进境水生动物种类开展了SAV跨境传播的风险评估,并提出了科学的风险管理措施。综合风险分析认为,我国传入SAV的主要威胁是来自疫区的活的大西洋鲑、褐鳟鱼和虹鳟,其次是冰冻和冰鲜的大西洋鲑、褐鳟鱼和虹鳟。建议对活的、冰冻和冰鲜的易感鱼类以及用做鲜活饵料的鱼类,禁止从疫区进口;鱼肉、加工后的制品以及其它非易感鱼类是低风险的,可以自由贸易;对运输活鱼的水、包装等要进行强制常规消毒,无需检测。; 任彤高帅宋傲臣谈艳苗马树宝蒋烨杜航刘敏; 关键词：风险分析风险管理

传染性造血器官坏死病毒微型基因组表达干扰素对病毒的抑制效应被引量：3: 2016年; 为构建传染性造血器官坏死病毒(IHNV HLJ-09)微型基因组并表达虹鳟IFN,采用RT-PCR扩增IHNV HLJ-09株的N、P、L、G和NV蛋白基因并亚克隆入真核表达载体pCI中,构建辅助质粒pCI-N、pCI-P、pCI-L、pCI-G和pCI-NV;将扩增获得的IHNV基因组两末端序列、增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因、虹鳟I型干扰素(IFN)基因克隆到真核表达载体pCI中构建出表达EGFP的IHNV微型基因组pCI-LFGT和表达IFN的IHNV微型基因组pCI-LFIT;将pCI-LFIT质粒转染已接种IHNV HLJ-09毒株的EPC细胞,实时荧光定量PCR法测定细胞中IHNV G基因RNA。结果显示:构建的微型基因组不论与辅助病毒还是与5个辅助质粒共转染,外源基因均能正确表达;pCI-LFIT质粒转染已接种病毒的EPC细胞组与对照组相比其中的病毒核酸显著减少。; 王会英蒋烨赵丽丽唐丽杰乔薪瑗姜艳平崔文李一经刘敏

抗鲑鱼甲病毒E1基因高保守区蛋白的单克隆抗体及其应用: 本发明公开了一种抗鲑鱼甲病毒(SAV)E1基因高保守区蛋白的单克隆抗体及其应用，属于生物技术领域。本发明所提供的抗鲑鱼甲病毒E1基因高保守区蛋白单克隆抗体，是由保藏编号为CGMCC No.12289的小鼠杂交瘤细胞株分泌...; 刘敏李一经唐丽杰徐义刚乔薪瑗蒋烨高帅; 文献传递

鲑鱼甲病毒E1基因高保守区融合表达及免疫特性的分析: 2016年; 根据Gen Bank中公布的鲑鱼甲病毒(salmonid alphavirus,SAV)SAV 1、SAV 2和SAV3三个基因型中E1基因,选择高保守序列702 bp(436-1137)合成基因,命名为SAV E1,将其克隆到原核表达载体p Cold TF中构建重组质粒。然后将重组质粒转化到大肠杆菌感受态细胞BL21中,经终浓度为1.0 mmol/L的IPTG诱导表达,SDSPAGE和Western blot鉴定,重组蛋白均获得了表达,表达E1重组蛋白约95 k D。用镍离子亲和层析柱纯化重组蛋白,制备抗血清。间接ELISA结果显示,鼠抗重组蛋白E1血清效价为1∶25 600;间接免疫荧光结果显示,鼠抗重组E1蛋白血清可与SAV发生特异反应,由此表明表达的E1重组蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性,为SAV检测方法的建立提供理论依据。; 蒋烨杜航唐丽杰乔薪瑗王丽管雪婷姜艳平崔文李一经刘敏; 关键词：免疫特性

传染性胰坏死病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立被引量：4: 2014年; 以纯化的兔抗传染性胰坏死病病毒(IPNV)VP2重组蛋白多克隆抗体为包被抗体,抗IPNV VP2单克隆抗体为检测抗体建立了IPNV双抗体夹心ELISA方法。优化反应条件为:兔抗IPNV VP2重组蛋白多克隆抗体包被浓度为1.28μg/mL,抗IPNV VP2单克隆抗体的工作浓度为1.34μg/mL,酶标二抗稀释比例为1∶2 000,以P/N>2,且OD490 nm>0.101 494作为阳性判定标准。该方法的重复性变异系数均小于10%,与传染性造血器官坏死病毒(IHNV)、病毒性出血败血症病毒(VHSV)、鲤春病毒血症病毒(SVCV)、轮状病毒(HRV)无交叉反应。对41份虹鳟肝脏样品分别进行双抗体夹心ELISA和RT-PCR检测,结果双抗体夹心法与RT-PCR法检测符合率为97%,表明本实验建立的双抗体夹心ELISA检测方法检测IPNV具有较高的敏感性和特异性,可用于IPNV的病原学检测。; 张琳琳连科迅张英蒋烨姜艳萍崔文乔薪瑗唐丽杰李一经刘敏; 关键词：单克隆抗体

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蒋烨