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昆虫总RNA提取及实时荧光定量PCR方法探讨被引量：7: 2013年; 本文以褐飞虱Nilaparvata lugens(Stl)为实例介绍了利用Trizol略法作改进用于提取昆虫总RNA的方法,抽提的总RNA利用甲醛变性凝胶电泳、NanoDrop核酸蛋白仪和Agilent 2100 Bioanalyzer分析表明其质量高和完整性好。同时讨论了应用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)进行昆虫时空表达研究中选择参考基因应注意的问题,为相关研究提供参考。; 董小林; 关键词：昆虫 RNA提取完整性

斜纹夜蛾普通气味结合蛋白ⅠcDNA的克隆及在原核细胞中的表达被引量：2: 2009年; 【目的】克隆、序列分析和原核表达编码斜纹夜蛾(Spodoptera litura)GOBPⅠ(SlGOBPⅠ)的cDNA。【方法】采用同源克隆结合RACE的方法克隆SlGOBPⅠ基因的cDNA序列,并在pET-32a/BL21(DE3)系统中进行原核表达。【结果】从斜纹夜蛾触角中克隆了GOBPⅠ的cDNA序列(GenBank登录号为EU086372),序列分析表明,SlGOBPⅠ开放阅读框序列为495bp,编码164个氨基酸,分子量为19.3kD,等电点为5.54。SlGOBPⅠ具有昆虫气味结合蛋白的典型特征,即氨基酸序列中具有6个半胱氨酸残基,呈酸性。SlGOBPⅠ氨基酸序列与鳞翅目昆虫的气味结合蛋白氨基酸序列具有较高的相似性,表明SlGOBPⅠ属于GOBP家族。将SlGOBPⅠ编码序列,克隆到表达载体pET-32a上,构建原核表达载体pET-SlGOBPⅠ,在表达宿主菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导成功表达了相对分子质量为32.0kD的可溶性融合蛋白,利用Ni2+-NTA亲和柱一步纯化了SlGOBPⅠ融合蛋白,以此融合蛋白免疫新西兰大白兔制备了SlGOBPⅠ的抗血清,ELISA滴度为1﹕5000,Western印迹检测结果显示,SlGOBPⅠ抗血清与表达的融合蛋白质呈阳性反应,表明所表达的融合蛋白保持原有的免疫原性。【结论】克隆、分析和表达了编码斜纹夜蛾气味结合蛋白GOBPⅠcDNA序列,为今后深入研究斜纹夜蛾GOBPⅠ基因的结构和功能奠定了基础。; 金丰良董小林许小霞任顺祥; 关键词：斜纹夜蛾触角气味结合蛋白

南瓜实蝇防治药剂的筛选与田间防治效果被引量：3: 2014年; 为南瓜实蝇[Bactrocera(Zeugodacus)tau(Walker)]提供应急药剂储备,测定了10种农药单剂对南瓜实蝇幼虫、蛹和成虫的活性,在此基础上筛选、评价了5种混配制剂对南瓜实蝇的活性,测定4种混剂对南瓜实蝇的田间防治效果。结果表明,新烟碱类药剂和Bt对南瓜实蝇的活性较低,有机磷类和微生物源杀虫剂活性较高;小区模拟试验15%阿维·毒死蜱EC和32%甲维盐·辛硫磷EC喷雾处理对甜瓜的保护效果略优于0.02%多杀霉素饵剂点喷投饵;大田试验32%甲维盐·辛硫磷EC 20 mg/L喷雾处理对西瓜田实蝇类昆虫有一定的防治作用,对西瓜的总体保护率达到50%。可见,甲维盐和辛硫磷混剂可进行进一步筛选优化研究以作为南瓜实蝇防治应急用药。; 蔡俊杨红霞吴启松董小林; 关键词：防治药剂田间防治

实蝇营养诱剂对苦瓜实蝇类害虫的诱杀效果被引量：1: 2013年; 实蝇可危害多种水果和葫芦科蔬菜,造成重要经济损失,生产实践中诱杀是防治实蝇最安全、有效、常用的方法。实蝇营养诱剂实蝇克(含0.05%阿维菌素)对危害苦瓜的实蝇类害虫的诱杀防治试验结果表明,实蝇克以1-20倍清水拌匀置于敞口诱食器,能有效诱集桔小实蝇、瓜实蝇等常见实蝇,其中以桔小实蝇的诱集量最大、约占70%,其次是瓜实蝇、占15%-25%,其他实蝇占5%-15%,对桔小实蝇雌虫的诱集并无明显的性别选择倾向。在实蝇高峰期,实蝇克以1-20倍清水拌匀诱捕实蝇,每隔7 d换药1次,连续换药3次,苦瓜果实带虫率可控制在5%以内,保护作用可达80%以上,效果优于或相当于商品化生产使用的物理粘杀剂。; 范振仪蔡俊杨红霞董小林; 关键词：苦瓜实蝇诱杀

小菜蛾普通气味结合蛋白Ⅰ基因的克隆及原核表达: 昆虫能够感受空气中的挥发性物质，并依此作为交配、觅食和寻找生殖场所的信息。而昆虫气味结合蛋白与脂溶性的气味物质发生作用，是昆虫专一性识别外界气味物质的第一步生化反应，对于昆虫与外界进行信息交流具有重要意义。对昆虫气味结合...; 董小林; 关键词：基因序列分析基因克隆原核表达小菜蛾; 文献传递

南瓜实蝇触角超微结构观察及其与桔小实蝇触角形态的比较被引量：7: 2014年; 南瓜实蝇Bactrocera(Zeugodacus)tau(Walker)和桔小实蝇Bactrocera dorsalis(Hendel)是重要的检疫性害虫,已被许多国家列为植物检疫监管对象。本文通过扫描电镜观察南瓜实蝇触角的超微结构,并与桔小实蝇触角进行了形态比较。结果发现,南瓜实蝇的触角外观形态和所含的感器类型与桔小实蝇大致相同,均包括经典的毛形感器、柱形感器、锥形感器和刺形感器。; 蔡俊杨红霞吴启松董小林; 关键词：南瓜实蝇桔小实蝇扫描电镜触角感器

溴氰虫酰胺防治豇豆蓟马的效果被引量：12: 2014年; 为筛选高效防治豇豆蓟马的药剂，研究了100 g/L 溴氰虫酰胺可分散油悬浮剂45 g a．i．/hm2、50 g a．i．/hm2、60 g a．i．/hm23种浓度的防治效果。结果表明：45～60 g a．i．/hm2剂量处理，药后1～10 d 的防治效果为34．57％～94．49％。其中，60 g a．i．/hm2剂量处理后1～3 d 的防效为50．60％～80．72％，5～10 d 防效为91．84％～94．49％；与对照药剂10％吡虫啉可湿性粉剂60 g a．i．/hm2处理相比，速效性略差，而持效性相当。试验期间未发现该药剂在供试剂量下对豇豆产生药害，可供生产中推广应用。; 桑松张珂王培丹胡美英董小林; 关键词：豇豆虫害

斜纹夜蛾普通气味结合蛋白ⅡcDNA的克隆及在原核细胞中的表达被引量：5: 2008年; 采用同源克隆结合RACE的方法克隆了斜纹夜蛾的普通气味结合蛋白Ⅱ(SlGOBPⅡ)的cDNA序列(GenBank登录号为EU086371).序列分析表明,SlGOBPⅡ可读框序列为489bp,编码162个氨基酸,分子量为18.2kD,等电点为5.72.SlGOBPⅡ具有昆虫气味结合蛋白的典型特征,即氨基酸序列中具有6个保守的半胱氨酸残基,呈酸性.SlGOBPⅡ氨基酸序列与草地贪夜蛾(S.frugiperda)和甜菜夜蛾(S.exigua)的气味结合蛋白具有较高的同源性.RT-PCR和Northern blot检测表明,SlGOBPⅡ具有触角组织表达特异性.将SlGOBPⅡ,克隆到表达载体pET-32a上,阳性重组子转化表达宿主菌BL21(DE3)中,在IPTG诱导下进行了高效表达.SDS-PAGE检测表明SlGOBPⅡ在大肠杆菌中可表达相对分子质量(Mr)为32.0kD的可溶性融合蛋白,Western blot分析表明表达产物能与Ni-NTA螯合物特异性结合,表明表达的SlGOBPⅡ为N端带有6His标签的融合蛋白.利用Ni2+-NTA亲和柱进一步纯化了SlGOBPⅡ,以该融合蛋白免疫新西兰大白兔制备了抗SlGOBPⅡ的抗血清,ELISA滴度为1∶12800,Western印迹检测结果显示,SlGOBPⅡ抗血清与表达的融合蛋白呈阳性反应,表明所表达的融合蛋白仍保持原有蛋白的免疫原性.; 金丰良董小林许小霞任顺祥; 关键词：斜纹夜蛾触角气味结合蛋白

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董小林

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