胡文君
- 作品数：8 被引量：33H指数：4
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 线粒体融合素基因-2对乳腺癌细胞RECK基因表达的影响被引量：1
- 2009年
- 目的探讨线粒体融合素基因-2(mfn2)对乳腺癌细胞株MCF-7细胞中RECK表达的影响。方法利用脂质体lipofectamine2000将构建的重组真核表达质粒pEGFP-mfn2转染MCF-7细胞。RT-PCR检测细胞mfn2和RECK基因mRNA的转录水平;Weastern blot法检测mfn2及RECK蛋白的表达。结果转染pEGFP-mfn2质粒的MCF-7细胞可以稳定高表达mfn2,RECK基因在转染空质粒组和未转染组细胞中无表达,转染mfn2基因后RECK基因mRNA转录及蛋白的表达显著升高。结论mfn2基因可激活MCF-7细胞中RECK基因的表达。
- 张勇郑启昌王尧胡文君胡青钢
- 关键词：线粒体融合素基因-2MCF-7RECK
- Cdc42在人乳腺癌细胞MCF-7阿霉素敏感株和耐药株中的表达被引量：6
- 2010年
- 目的探讨细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)在乳腺癌细胞MCF-7阿霉素敏感株和耐药株MCF-7/Adr中表达的变化以及对细胞耐药性的影响。方法将Cdc42 siRNA转染MCF-7/Adr细胞株后,用RT-PCR和Weastern Blot方法检测MCF-7组,MCF-7/Adr组,MCF-7/Adr siRNA干扰组细胞Cdc42的转录以及蛋白的表达水平;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定siRNA处理后阿霉素(ADM)对MCF-7/Adr细胞的杀伤作用;用荧光分光光度计测定细胞内ADM药物浓度。结果 MCF-7/Adr细胞中Cdc42 mRNA及蛋白表达量显著高于MCF-7细胞(P<0.05);siRNA干扰后Cdc42表达受到明显抑制(P<0.05),并显著提高细胞内ADM的浓度(P<0.05)。结论特异性siRNA能明显抑制Cdc42 mR-NA及蛋白表达,并逆转细胞耐药性。
- 张勇江隆昌屈新才胡文君胡青钢郑启昌
- 关键词：多药耐药小RNA干扰
- 稳定表达线粒体融合素基因2肝癌细胞株的建立及其意义被引量：3
- 2008年
- 目的探讨将线粒体融合素基因2(mfn2)转染培养人肝癌细胞株HepG2,建立长期表达mfn2的肝癌细胞模型的可行性。方法基因重组构建mfn2真核表达质粒pEGFPmfn2,用脂质体将质粒转染培养人肝癌细胞株HepG2,经G418筛选阳性细胞克隆,逆转录-聚合酶链反应检测转染后30d细胞mfn2 mRNA的表达水平;Western-blot检测线粒体融合蛋白的表达。结果(1)成功构建表达真核质粒pEGFPmfn2;(2)成功将质粒pEGFPmfn2转染肝癌细胞株HepG2,并获得阳性细胞克隆;(3)经脂质体转染的人肝癌细胞株HepG2可较稳定表达mfn2。结论成功地建立稳定表达mfn2的肝癌细胞株,为进一步研究mfn2在肝癌发生发展中的作用奠定了基础。
- 王尧郑启昌胡青钢胡文君
- 关键词：基因转染线粒体基因
- TNF-α对人肝细胞Mfn2基因表达的调节及对线粒体形态功能的影响被引量：7
- 2010年
- 目的:探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)对肝细胞株LO2细胞线粒体融合蛋白基因2(Mfn2)基因表达的调节作用以及对线粒体形态和细胞三磷酸腺苷(ATP)、活性氧(ROS)生成的影响.方法:利用脂质体Lipofectamine2000将Mfn2基因荧光表达载体(pEGFP-Mfn2)转染肝细胞株LO2细胞,以终浓度为500kU/L的TNF-α作用LO2细胞株和稳定高表达Mfn2的LO2细胞株12h,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测各组细胞Mfn2mRNA转录水平以及蛋白的表达水平,线粒体绿色荧光探针(Mito-Tracker Green)染色观察线粒体形态变化,荧光素酶ADP/ATP发光法检测各组细胞ATP含量,荧光探针DCFH-DA测定细胞ROS生成水平.结果:经TNF-α处理后LO2细胞中Mfn2基因的mRNA及蛋白表达水平显著低于空白对照组(0.279±0.026vs0.742±0.018;0.196±0.024vs0.580±0.011,P<0.05);对照组及转染Mfn2基因组肝细胞线粒体形态主要为丝状网络或长柱状,TNF-α处理后未转染肝细胞线粒体断裂成点状碎片,但转染组线粒体形态则无明显改变;TNF-α处理后LO2细胞内ATP浓度显著下降(2.00μmol/g±0.15μmol/g vs5.81μmol/g±0.31μmol/g,P<0.05),而ROS生成水平较空白对照组显著升高(FI:80.68±4.02vs65.44±3.47,P<0.05),但转染组细胞内ATP下降水平要显著低于未转染组,而未转染组ROS升高程度则显著高于转染组(P<0.05).结论:TNF-α通过抑制肝细胞Mfn2的表达诱导线粒体形态改变及线粒体功能障碍.
- 张勇江隆昌胡文君胡青钢郑启昌
- 关键词：肿瘤坏死因子Α三磷酸腺苷活性氧
- mitofusin-2对乳腺癌细胞RECK基因表达及MMPs活性的影响被引量：2
- 2009年
- 目的探讨线粒体融合素基因-2(mitofusin-2)对乳腺癌MCF-7细胞株中RECK表达及MMP-9,MMP-2活性的影响。方法利用脂质体lipofectamine2000将构建的重组真核表达质粒pEGFP-mfn2转染MCF-7细胞。RT-PCR检测细胞mfn2和RECK基因mRNA的转录水平;Weastern Blot法检测mfn2及RECK蛋白的表达;明胶酶谱试验检测转染前后MMP-9及MMP-2的活性。结果转染pEGFP-mfn2质粒的MCF-7细胞可以稳定高表达Mfn2;RECK基因在转染空质粒组和未转染组细胞中无表达;转染mfn2基因后RECK基因mRNA转录及蛋白的表达显著升高,且MMP-9及MMP-2的活性显著降低(P<0.05)。结论mfn2基因可激活MCF-7细胞中RECK基因的表达,并显著抑制其MMP-9及MMP-2的活性。该途径可能是mfn2基因抗肿瘤作用的新机制。
- 张勇屈新才王尧胡文君胡青钢郑启昌
- 关键词：线粒体融合素基因-2MCF-7细胞株RECKMMP-2
- mfn2基因转染对非酒精性脂肪肝细胞线粒体功能的影响被引量：10
- 2010年
- 目的:研究线粒体融合蛋白基因2(mfn2)对非酒精性脂肪肝细胞线粒功能的影响。方法:利用脂质体lipofectamine2000将mfn2基因荧光表达载体(pEGFP-mfn2)转染肝细胞株L02,并采用油酸诱导L02建立非酒精性脂肪性肝细胞模型,RT-PCR及Western blotting检测细胞mfn2mRNA和蛋白的表达;荧光素酶ADP/ATP发光法检测各组细胞内ATP水平,荧光探针DCFH-DA测定细胞活性氧(ROS)生成水平;JC-1标记细胞线粒体,流式细胞仪检测线粒体跨膜电位(Δψm)的变化。结果:转染mfn2基因的L02可以稳定高表达mfn2mRNA及蛋白,转染后L02内ATP浓度及线粒体跨膜电位显著升高(P<0.05),而ROS生成水平则显著下降(P<0.05);经油酸诱导肝细胞脂肪变性后,L02mfn2表达受抑制,各组细胞内ATP浓度及线粒体跨膜电位均显著下降(P<0.01),而ROS生成水平较前均显著升高(P<0.01),但转染组细胞内ATP下降水平以及线粒体跨膜电位下降幅度均显著低于未转染组,而未转染组ROS升高程度则显著高于转染组(P<0.01)。结论:外源性mfn2基因转染可以抑制油酸诱导的肝细胞内ATP浓度和线粒体跨膜电位的下降以及ROS生成的增加。
- 张勇胡文君王尧夏耘郑启昌
- 关键词：基因活性氧非酒精性
- 外源性线粒体融合素基因-2转染对肝癌细胞体外生物学行为的影响被引量：3
- 2008年
- 目的:研究外源性线粒体融合素基因-2(mitofusin-2gene,mfn2)对肝癌细胞株HepG2体外生物学行为的影响。方法:基因重组构建并鉴定mfn2真核表达质粒pEGFPmfn2,用脂质体将质粒转染培养人肝癌细胞株HepG2,经G418筛选阳性细胞克隆,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染后细胞mfn2mRNA的表达水平,Western-blot检测线粒体融合蛋白的表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测mfn2对HepG2细胞增殖的影响,Annexin-V/PI双标流式细胞术检测转染细胞凋亡的变化。结果:重组真核表达质粒pEGFPmfn2经限制性内切酶双酶切,电泳后显示约2300bp的mfn2片段和4700bp的pEGFP-N2载体片段。RT-PCR及Western-blot显示转染pEGFPmfn2组有mfn2基因mRNA及其蛋白表达。MTT实验提示转染mfn2基因后,HepG2细胞增殖受到抑制;流式细胞分析显示转染pEGFPmfn2组与转染pEGFP组和空白对照组相比可促进细胞凋亡。结论:成功构建了pEGFPmfn2真核表达质粒,外源性mfn2基因可抑制肝癌细胞的增殖,并可诱导肝癌细胞凋亡。
- 王尧郑启昌胡文君张景辉
- 关键词：线粒体基因基因转染
- 线粒体融合素基因-2对肝癌细胞凋亡的影响及其机制被引量：6
- 2008年
- 目的探讨外源性线粒体融合素基因-2(mfn2)对肝癌细胞株HepG2凋亡的影响及其机制。方法利用脂质体2000将质粒mfn2转染HepG2细胞。RT-PCR检测转染后细胞mfn2 mRNA的表达水平;Weastern Blot法检测mfn2蛋白的表达;MTT检测mfn2对HepG2细胞增殖的影响;Annnexin-V/PI双标记法检测转染前后细胞凋亡的变化;RT-PCR检测凋亡相关基因的表达;电镜观察超微结构的变化。结果转染mfn2基因的HepG2细胞可以稳定表达Mfn2蛋白;MTT实验提示转染mfn2基因后,HepG2细胞增殖受到抑制;转染组与转染空质粒组和空白对照组相比前者可促进细胞凋亡(P<0.05);电镜示mfn2转染后HepG2细胞线粒体嵴断裂、消失、基质疏松;RT-PCR结果示Bcl-2和survivin基因表达下调。结论外源性mfn2基因可抑制HepG2细胞的增殖,诱导其凋亡。凋亡相关基因的表达下调可能是其诱导凋亡的机制。
- 王尧郑启昌胡文君胡青钢夏耘张景辉
- 关键词：肝肿瘤线粒体基因细胞凋亡
