肖志锋
- 作品数：12 被引量：78H指数：5
- 供职机构：上海中医药大学附属普陀医院更多>>
- 发文基金：上海市教育委员会创新基金国家中医药管理局中医药重点学科建设项目上海市卫生局科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 塞来昔布对人滑膜细胞和人软骨细胞共培养体系相关因子的调控作用被引量：4
- 2016年
- 目的观察塞来昔布对Wnt/β-catenin信号通路活化的人滑膜细胞和人软骨细胞共培养体系相关因子的调控作用,初步阐释塞来昔布治疗骨关节炎的分子作用机制。方法通过β-catenin慢病毒载体转染正常人滑膜细胞,激活其Wnt/β-catenin信号通路。Wnt/β-catenin信号通路活化的人滑膜细胞与正常人软骨细胞置于Transwell小室中共培养。倒置显微镜观察Wnt/β-catenin信号通路活化的人滑膜细胞对人软骨细胞形态学变化的影响。塞来昔布混悬液干预共培养体系,采用Western blot方法检测塞来昔布对滑膜细胞β-catenin蛋白表达的影响;采用ELISA方法检测塞来昔布对滑膜细胞、软骨细胞培养上清液基质金属蛋白酶-7(MMP-7)、Ⅱ型胶原羧基端肽(CTX-Ⅱ)、软骨寡聚基质蛋白(COMP)表达的影响。结果β-catenin慢病毒载体转染正常人滑膜细胞后成功激活Wnt信号通路并与软骨细胞共培养。随着培养时间的延长,软骨细胞生长逐渐受到抑制,软骨细胞胞体边缘与板壁接触处发白,折光度增加,细胞贴壁强度降低。塞来昔布干预后,Western blot检测发现滑膜细胞中β-catenin蛋白的表达明显下调(P<0.01);ELISA法检测发现滑膜与软骨细胞上清液中MMP-7、CTX-Ⅱ、COMP的表达与正常对照相比明显升高(P<0.01)。结论滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路的激活可以使软骨细胞生长受到抑制。塞来昔布可以降低滑膜细胞β-catenin表达,且与干预时间长短相关。塞来昔布可以抑制滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路,下调MMP-7、CTX-Ⅱ、COMP的表达。塞来昔布可能通过抑制OA滑膜Wnt/β-catenin信号通路,改善滑膜炎症、调控滑膜-软骨共同体系微环境、达到抑制软骨降解,促进软骨细胞功能恢复而治疗骨关节炎。
- 王德刚许传勇姜玉祥阚卫兵肖志锋姚丽刘婉谢殿洪汤豪张玉婷
- 关键词：细胞共培养MMP-7塞来昔布
- 功能锻炼在膝关节骨性关节炎治疗中的应用被引量：27
- 2015年
- 对于膝关节骨性关节炎,功能锻炼主要是以肌力训练和关节活动训练为主。功能训练的疗效机制是:通过功能训练改善膝关节滑膜、软骨代谢,减轻膝关节的炎症、肿胀、疼痛,并且能促进其再生和修复,增强肌肉力量,增加关节稳定性,保护和恢复关节的形态和功能,提高患者的生活质量。
- 姚丽肖志锋阚卫兵赵婧刘婉姜玉祥谢殿洪于为国
- 关键词：功能锻炼膝关节骨性关节炎炎症肿胀疼痛
- Wnt/β-catenin信号通路活化的人滑膜细胞对软骨细胞的影响被引量：1
- 2017年
- 目的:研究Wnt/β-catenin信号通路活化的人滑膜细胞对软骨细胞的作用探讨骨关节炎(OA)发生及进展的可能途径和分子机制。方法:β-catenin过表达慢病毒载体转染正常人滑膜细胞,荧光显微镜观察病毒转染情况.Western blot方法:检测滑膜细胞核内β-catenin蛋白表达。Transwell小室共培养人滑膜细胞与正常人软骨细胞,倒置显微镜观察滑膜细胞对软骨细胞生长形态变化的影响。酶联免疫吸附(ELISA)法检测不同时间点共培养体系中软骨细胞培养上清液中MMP-7的变化找出MMP-7变化最明显的时间点。同时在最佳时间点ELISA方法:检测软骨细胞培养上清液CTX-Ⅱ、COMP的水平。结果:慢病毒转染滑膜细胞后茨光显微镜下可见多数滑膜细胞表达荧光.Western blot检测发现滑膜细胞胞浆及胞核中β-catenin表达明显上调(P<0.01)。通路活化的人滑膜细胞与软骨细胞共培养后,光镜下观察软骨细胞生长形态变化不明显,但随共培养时间的延长软骨细胞生长受到抑制胞体边缘发白壁强度降低。ELISA结果:显示通路活化的人滑膜细胞与软骨细胞共培养后软骨细胞上清液中MMP-7表达明显升高,与正常组相比有显著差异(P<0.01)软骨细胞上清液MMP-7的变化有一定的时间依赖性在共培养2h、6h、12h时逐渐升高;24h时略有降低且在共培养6h时变化最为明显。而共培养6h时通路激活组软骨细胞培养上清液中COMP、CTX-Ⅱ水平与正常对照组相比均明显升高(P<0.01)。结论:β-catenin过表达慢病毒转染正常人滑膜细胞可成功激活Wnt/β-catenin信号通路,Wnt/β-catenin信号通路活化的滑膜细胞可影响正常软骨细胞的生长,并引起滑膜-软骨体系内环境异常,促使软骨基质的降解这可能是滑膜炎促进OA发生、发展的机制之一。
- 肖志锋王德刚许传勇姜玉祥阚卫兵姚丽刘婉谢殿洪汤豪张玉婷
- 关键词：滑膜细胞软骨细胞细胞共培养MMP-7
- 补肾活血方对Wnt/β-catenin信号通路介导的人滑膜细胞与正常软骨细胞共培养体系的调控作用被引量：11
- 2016年
- 目的:探讨Wnt/β-catenin信号通路在骨关节炎发病中的作用,观察补肾活血方对异常的滑膜-软骨微环境的调控作用,初步阐释补肾活血方治疗骨关节炎的分子作用机制。方法:构建β-catenin过表达慢病毒载体转染正常人滑膜细胞,Transwell小室共培养人滑膜细胞与正常人软骨细胞模拟滑膜软骨关节体系内环境;各时间点不同浓度药物干预共培养体系,Western bolt方法检测补肾活血方对滑膜细胞β-catenin蛋白表达的影响;ELISA方法检测补肾活血方对共培养体系中滑膜细胞、软骨细胞培养上清液基质金属蛋白酶-7(MMP-7),人Ⅱ型胶原交联羧基端肽(CTX-Ⅱ),软骨寡聚基质蛋白(COMP)表达的影响。结果:Western blot检测发现β-catenin过表达慢病毒转染正常人滑膜细胞后滑膜细胞胞浆及胞核中β-catenin表达明显上调(P<0.01),补肾活血方能够明显下调共培养滑膜细胞中β-catenin蛋白的表达(P<0.01);同时,ELISA法检测发现补肾活血方能够明显下调滑膜细胞与软骨细胞培养上清液中MMP-7,CTX-Ⅱ,COMP的表达(P<0.01)。结论:β-catenin过表达慢病毒转染正常人滑膜细胞可成功激活Wnt/β-catenin信号通路,Wnt/β-catenin信号通路激活后共培养体系中MMP-7,CTX-Ⅱ,COMP的水平明显上升;补肾活血方可以抑制滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路,下调共培养体系中MMP-7,CTX-Ⅱ,COMP的表达,减轻异常滑膜细胞对软骨细胞的损害,减缓软骨基质的降解,有利于骨关节炎的缓解和恢复。
- 肖志锋王德刚许传勇姜玉祥阚卫兵姚丽刘婉谢殿洪汤豪张玉婷
- 关键词：补肾活血方细胞共培养
- 细胞共培养体系及其在骨科基础研究中的应用被引量：1
- 2014年
- 随着我国人口逐渐老龄化、环境污染、人们生活习惯改变等因素，骨肿瘤、骨质疏松、骨关节疾病等越来越多的危害到人们的健康，抗骨质流失，骨、软骨再生修复研究，骨肿瘤治疗药物研发等都急需进一步深入。骨关节系统中许多细胞如软骨细胞、骨间充质干细胞、滑膜细胞、成骨、破骨细胞等细胞的生物特性容易受其他细胞或者细胞活性因子影响发生改变。在骨关节系统发育过程中细胞阶段性表征和功能改变是骨关节系统正常发育成熟的基础，骨重建过程中存在成骨细胞与破骨细胞密切的相互作用，包括直接接触、细胞旁分泌。
- 肖志锋阚卫兵赵婧姚丽姜玉祥谢殿洪于为国
- 关键词：细胞共培养骨科应用生物医学
- 补肾活血方对Wnt/β-catenin信号通路介导的人滑膜细胞与正常软骨细胞共培养体系的调控作用
- 目的:探讨Wnt/β-catenin信号通路在骨关节炎发病中的作用,观察补肾活血方对异常的滑膜-软骨微环境的调控作用,初步阐释补肾活血方治疗骨关节炎的分子作用机制.
方法:构建β-catenin过表达慢病毒载体...
- 肖志锋阚卫兵姚丽刘婉王德刚张玉婷汤豪
- 关键词：补肾活血方滑膜细胞共培养体系分子作用机制
- 文献传递
- 黄芪甲苷对Wnt/β-catenin信号通路活化的人滑膜细胞和人软骨细胞共培养体系MMP-7、CTX-Ⅱ、COMP的调控作用被引量：4
- 2016年
- 目的观察黄芪甲苷对Wnt/β-catenin信号通路活化的人滑膜细胞和人软骨细胞共培养体系基质金属蛋白酶-7(MMP-7)、Ⅱ型胶原羧基端肽(CTX-Ⅱ)、软骨寡聚基质蛋白(COMP)的调控作用,初步阐释黄芪甲苷治疗骨关节炎的分子作用机制。方法通过β-catenin慢病毒载体转染正常人滑膜细胞,激活其Wnt/β-catenin信号通路。Wnt/β-catenin信号通路活化的人滑膜细胞与正常人软骨细胞置于Transwell小室中共培养。倒置显微镜观察Wnt/β-catenin信号通路活化的人滑膜细胞对人软骨细胞形态学变化的影响。黄芪甲苷混悬液干预共培养体系,采用Western bolt方法检测黄芪甲苷对滑膜细胞β-catenin蛋白表达的影响;采用ELISA方法检测黄芪甲苷对滑膜细胞、软骨细胞培养上清液MMP-7、CTX-Ⅱ、COMP表达的影响。结果β-catenin慢病毒载体转染正常人滑膜细胞后成功激活Wnt信号通路并与软骨细胞共培养。随培养时间的延长,软骨细胞生长逐渐受到抑制,软骨细胞胞体边缘与板壁接触处发白,折光度增加,细胞贴壁强度降低。黄芪甲苷干预后,Western blot检测发现滑膜细胞中β-catenin蛋白的表达明显下调(P<0.01);ELISA法检测发现滑膜与软骨细胞上清液中MMP-7、CTX-Ⅱ、COMP表达与正常对照相比明显升高(P<0.01)。结论滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路的激活可以使软骨细胞生长受到抑制。黄芪甲苷可以降低滑膜细胞β-catenin表达,且与干预时间长短相关。黄芪甲苷可以抑制滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路,下调MMP-7、CTX-Ⅱ、COMP的表达。黄芪甲苷可能通过抑制OA滑膜Wnt/β-catenin信号通路,改善滑膜炎症、调控滑膜-软骨共同体系微环境、达到抑制软骨降解,促进软骨细胞功能恢复而治疗骨关节炎。
- 王德刚许传勇姜玉祥阚卫兵肖志锋姚丽刘婉谢殿洪汤豪张玉婷
- 关键词：黄芪甲苷MMP-7COMP
- 祛痰化瘀利湿法治疗骨性关节炎的研究进展被引量：2
- 2013年
- 骨性关节炎（OA）是一种以关节软骨的退行性变和继发骨质增生为主要病变的慢性关节疾病，也称为增生性关节炎、肥大性关节炎、老年性关节炎、骨关节病、软骨软化性关节病等。该病可分为原发性和继发性两种。原发性的骨性关节炎多见于老年人；而后者多继发于关节的先天或后天畸形、关节损伤和关节炎症等。
- 赵婧阚卫兵宋朋飞肖志锋
- 关键词：祛痰化瘀利湿骨性关节炎
- 祛痰化瘀利湿方对大鼠膝骨关节炎滑膜组织和血清IL-1β,MMP-1及COMP,CTX-Ⅱ的影响被引量：8
- 2015年
- 目的:观察祛痰化瘀利湿方对大鼠膝骨关节炎(OA)模型关节滑膜组织和血清IL-1β,MMP-1以及血清软骨降解标志物COMP,CTX-Ⅱ的影响。方法:采用Hulth方法建立膝骨关节炎大鼠模型,造模成功后,将造模组随机分为模型组和祛痰化瘀利湿方组。正常组和模型组大鼠予以生理盐水灌胃,祛痰化瘀利湿方组予以祛痰化瘀利湿方中药灌胃,连续灌胃4周,腹主动脉取血方法抽取大鼠血液,离心后获取大鼠血清;外科手术方法打开大鼠膝关节,摘取滑膜组织。免疫印迹法(Western blot)观察大鼠膝关节滑膜组织中IL-1β,MMP-1的表达,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清IL-1β,MMP-1,COMP,CTX-Ⅱ的表达。结果:成功建立大鼠膝骨关节炎模型,免疫印迹法结果显示模型组大鼠滑膜组织中IL-1β,MMP-1的蛋白表达显著高于正常组,两组比较差异有统计学意义(P<0.01);祛痰化瘀利湿方组对OA滑膜组织中IL-1β,MMP-1的蛋白表达有明显下调作用,与模型组相比较差异有统计学意义(P<0.01)。酶联免疫吸附法结果显示模型组大鼠血清中IL-1β,MMP-1,COMP,CTX-Ⅱ的蛋白表达显著高于正常组,两组比较差异有统计学意义(P<0.01);祛痰化瘀利湿方组对血清中IL-1β,MMP-1,COMP,CTX-Ⅱ的蛋白表达有明显下调作用,与模型组相比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:1)大鼠膝骨关节炎模型膝关节滑膜组织和血清中IL-1β,MMP-1的表达升高,提示该变化与滑膜炎症有关,MMP-1表达的升高参与诱导了软骨降解;而血清中COMP,CTX-Ⅱ的升高提示软骨降解,符合骨关节炎的特征。2)祛痰化瘀利湿方对IL-1β,MMP-1,COMP,CTX-Ⅱ的表达均有下调作用,提示祛痰化瘀利湿方能够抑制滑膜炎症,抑制滑膜炎症诱导的软骨降解,促进软骨的修复,这是祛痰化瘀利湿方治疗膝骨关节炎的机制之一。
- 姚丽赵婧周强阚卫兵肖志锋王德刚张玉婷姜玉祥谢殿洪于为国
- 关键词：膝骨关节炎
- 黄芪甲苷对Wnt/β-catenin信号通路活化的人滑膜及软骨细胞共培养体系相关因子的调控作用被引量：13
- 2017年
- 目的观察黄芪甲苷对Wnt/β-catenin信号通路活化的人滑膜细胞和人软骨细胞共培养体系相关因子的调控作用,初步阐释黄芪甲苷治疗骨关节炎的分子作用机制。方法通过β-catenin慢病毒载体转染正常人滑膜细胞,激活其Wnt/β-catenin信号通路。Wnt/β-catenin信号通路活化的人滑膜细胞与正常人软骨细胞置于Transwell小室中共培养。黄芪甲苷混悬液干预共培养体系,采用ELISA方法检测黄芪甲苷对滑膜细胞、软骨细胞培养上清液基质金属蛋白酶-7(MMP-7)、Ⅱ型胶原羧基端肽(CTX-Ⅱ)、软骨寡聚基质蛋白(COMP)表达的影响。结果黄芪甲苷干预后,ELISA法检测发现滑膜与软骨细胞上清液中MMP-7、CTX-Ⅱ、COMP表达与正常对照相比明显升高(P<0.01)。结论黄芪甲苷可以抑制滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路,下调MMP-7、CTX-Ⅱ、COMP的表达。黄芪甲苷可能通过抑制骨关节炎滑膜Wnt/β-catenin信号通路,改善滑膜炎症、调控滑膜-软骨共同体系微环境、达到抑制软骨降解,促进软骨细胞功能恢复而治疗骨关节炎。
- 王德刚许传勇姜玉祥阚卫兵肖志锋姚丽刘婉谢殿洪汤豪张玉婷
- 关键词：细胞共培养黄芪甲苷
