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肇慧君: 作品数：34 被引量：70H指数：5; 供职机构：辽宁出入境检验检疫局更多>>; 发文基金：国家质检总局科技计划项目国家质检公益性行业科研专项国家重点基础研究发展计划更多>>; 相关领域：农业科学轻工技术与工程医药卫生生物学更多>>

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数字RT-PCR检测鲤春病毒血症的方法建立与应用被引量：11: 2015年; [目的]通过实时定量RT-PCR和数字RT-PCR两种方法的比对试验,建立快速检测鲤春病毒血症的数字RT-PCR方法。[方法]利用同一对引物和探针,以梯度稀释的方法测定两种方法针对SVCV的灵敏性、特异性及重现性。[结果]两种方法均能够检测出104倍稀释的SVCV,而数字RT-PCR可以检测出单个微滴中的SVCV,其灵敏度性高于实时定量RT-PCR。同时,两种方法的特异性都很强,对其他病毒,如传染性胰腺坏死病毒(IPNV)、传染性造血器官坏死病毒(IHNV)、病毒性出血败血病毒(VHSV)均未有扩增反应。两种方法的重现性也较好。[结论]数字RT-PCR方法比实时定量RT-PCR具有更高的灵敏度,在鲤春病毒血症的早期快速诊断方面具有重要作用。; 吴斌申翠翠张晨曦胡德聪肇慧君张琳; 关键词：实时定量RT-PCR 灵敏性

犬瘟热病毒核衣壳蛋白N基因的真核表达及鉴定被引量：2: 2008年; 根据GenBank发表的犬瘟热病毒N基因全序列,设计合成了1对特异扩增CDVN基因的引物。以山东泰安分离的CDV-FOX-TA株细胞毒中提取病毒RNA来制模板,利用RT-PCR扩增出了1.6kb的N基因,将其克隆到pIREShyg载体上,构建了pIRES-N真核表达载体。然后通过磷酸钙共沉淀法转染CHO-K1细胞,通过潮霉素筛选得到阳性克隆,间接免疫荧光实验(IFA)鉴定N基因在CHO细胞中的表达,并用RT-PCR方法从转录水平证实N基因在CHO-K1细胞中的表达,最终建立了CHO/CDV-N细胞株,为犬瘟热病毒的血清学检测和基因疫苗的研制奠定了基础。; 简中友贾赟王全凯徐立秋吴斌肇慧君李振荣; 关键词：犬瘟热病毒 N基因潮霉素 CHO-K1细胞

狐源犬瘟热病毒CDV-FOX-TA株核蛋白基因的原核表达及鉴定: 2008年; 应用RT-PCR技术扩增出犬瘟热病毒(CDV)核衣壳(N)蛋白基因抗原性好的高保守基因片段,将其TA克隆至pMD18-T载体中,再利用酶切、连接的方法将测序正确的N基因目的片段亚克隆到原核表达载体pET24b中6×HisTag编码基因的上游,并将该重组质粒转化大肠杆菌Rosetta2(DE3)株,经IPTG诱导,N基因融合蛋白获得了高效表达。SDS-PAGE分析和Western blot分析的结果显示,表达产物的分子质量为15kDa,与CDV标准阳性血清呈阳性反应,间接ELISA结果也表明重组表达产物具有良好的抗原性,能够有效区分CDV标准阳性与阴性血清,表明大肠杆菌表达的CDVN蛋白在免疫原性上具有与天然N蛋白同样的特性,可作为检测CDV的间接ELISA包被抗原。; 简中友贾赟王全凯胡传伟肇慧君李叶; 关键词：犬瘟热病毒核蛋白原核表达

贝类及其产品中甲型肝炎病毒RT-PCR检测方法的研究被引量：2: 2011年; 目的建立一种快速、简便、灵敏的检测贝类中甲型肝炎病毒RT-PCR方法,能够有效防止甲肝病毒的传播和对口岸进口贝类产品的监控。方法通过对病毒富集的3种方法(大体系PEG8000、小体系PEG6000和小体系PEG8000富集法)、提取RNA的2种方法(Trizol法和试剂盒法)以及RT-PCR检测的2种方法(一步法和两步法)进行比较,确立一种快速检测贝类中甲肝病毒的RT-PCR方法。结果经比较,采用小体系肠道样本检测比采用全贝检测的富集效果更佳,并比较了小体系PEG8000与PEG6000和大体系PEG8000对病毒富集的效果,回收率分别为13.3%、7.5%、10.0%;对HAV总RNA的2种提取方法进行了比较,结果均获得了纯度较高、完整性较好的总RNA,以此为模板采用一步法和两步法进行反转录和PCR反应,经1%琼脂糖凝胶电泳鉴定,从人工污染的阳性样本中扩增得到一段长度为192bp的特异PCR扩增产物。应用本研究建立的RT-PCR方法对大连地区85份贝类及产品进行HAV检测,结果未显阳性,说明样本中不含HAV。整体用时仅为5h。结论本研究建立的检测HAV的RT-PCR方法灵敏特异、操作时间短,该方法可对贝类及其产品进行确实有效的HAV的检测。; 吴斌肇慧君王玫袁文泽; 关键词：RT-PCR 甲型肝炎病毒贝类

鸡SIgA重链单克隆抗体的制备及新城疫病毒和禽流感病毒特异黏膜SIgA检测方法的建立被引量：1: 2012年; 为建立快速检测禽类黏膜组织中SIgA含量的方法,本研究原核重组表达鸡SIgA重链片段蛋白,纯化后免疫BALB/c鼠。以鸡胆汁中分离纯化的SIgA作为检测抗原,常规单克隆技术筛选出1株能够稳定分泌抗鸡SIgA单克隆抗体(MAb)的IgG2a、κ型MAb。经ELISA和western blot分析,所获得的1株MAb亲和力高、特异性强;采用生物素标记纯化MAb腹水IgG为检测二抗,以禽流感-新城疫重组二联活载体疫苗免疫SPF鸡为模型,初步建立了新城疫病毒和H5亚型禽流感病毒特异的黏膜SIgA间接ELISA检测方法。本研究为开展特异性家禽黏膜免疫机制的研究提供了重要技术手段。; 肇慧君陈伟业葛金英王喜军步志高; 关键词：SIGA 单克隆抗体新城疫病毒 H5亚型禽流感病毒

牦牛绒DNA的提取及验证: 2015年; 提取DNA是利用PCR技术检测纤维的关键技术难点。对牦牛绒DNA的提取方法进行了试验,通过PCR扩增的方法进行验证。结果表明:使用Ta Ka Ra Mini BEST Universal Genomic DNA Extraction Kit Ver.5.0试剂盒,将纤维样品尽量处理成粉末状,并在样品经裂解液处理后先离心除去其中尚未完全溶解的纤维,然后进行PCR扩增是比较有利的,完全能够得到满足PCR扩增要求的DNA样品。; 王玫任亮孔平肇慧君颜怀玉杨春光; 关键词：牦牛绒 DNA

LAMP技术快速诊断布鲁氏菌病的研究被引量：5: 2017年; 旨在应用环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)对布鲁氏菌进行研究。针对布鲁氏菌保守基因16S r DNA设计LAMP引物,通过浊度法对LAMP反应条件进行优化,应用建立好的LAMP反应条件进行特异性及灵敏性试验。结果显示:(1)优化后的反应条件是62℃恒温60 min,内引物1.50μmol/μL、外引物0.20μmol/μL、环引物1.0μmol/μL。(2)该LAMP方法与3株布鲁氏菌均发生了扩增反应,达到阳性浊度值,而与小肠耶尔森(ATCC9510)、大肠杆菌(ATCC25922)、沙门氏菌(ATCC10708)和金黄色葡萄球菌(ACTT33591)等标准菌株没有扩增反应。(3)浊度法和实时荧光法两种方法的检测最低限分别为4.36 fg/μL和436 fg/μL,其灵敏度均高于普通PCR的最低检出值4.36 pg/μL。LAMP检测技术用于布病临床诊断具有快速、高效、便捷等特点,对于基层布病的病原学诊断具有实用价值。; 谢文萍肇慧君张琳姜红旭吴斌孙浩; 关键词：布鲁氏菌 RDNA

进境百合脱毒处理及健康评测技术研究: 百合病毒病分布广，为害大，是百合种球和鲜切花生产中的主要病害之一，受到全世界的重视.近年来，随着我国百合引种数量和种植面积的迅速增加，以及不规范的种球自繁，病毒病开始在我国各百合种植区发生流行，一般发病率在40％～50％...; 吴斌肇慧君刘霞肖敏; 关键词：茎尖培养进境百合

PCR-DHPLC检测方法在病毒性出血性败血病诊断中的应用被引量：1: 2018年; 运用RT-PCR与变性高效液相色谱技术(DHPLC)相结合,建立了对病毒性出血性败血症病毒(VHSV)快速检测方法,根据对VHSV病毒N基因保守序列的分析,设计一对特异性引物,将RT-PCR扩增产物经变性高效液相色谱进行快速检测。同时运用荧光RT-PCR方法进行平行检测。结果表明,该方法与荧光RT-PCR检测结果相同,其特异性强,灵敏度较高,检测限为3 pg的病毒核酸模板,PCR-DHPLC技术具有高通量、自动化程度高等优势,是一种快速有效的检测方法。; 吴斌苏立明肇慧君蔡晓萍关鹏; 关键词：实时荧光PCR

虹鳟鱼传染性胰脏坏死病病毒的分离与鉴定被引量：9: 2012年; 目的探讨传染性胰脏坏死病毒(IPNV)在虹鳟鱼中的存在与传播,为我国北方地区IPNV疫情动态监测和防控提供依据。方法从辽宁省某渔场中患传染性胰脏坏死病的虹鳟鱼中分离出1株优势毒株,对新分离出来的菌株进行培养增殖、感染试验及理化性质的鉴定。结果新分离的IPNV在CHSE细胞上增殖良好,且可引起良好的病变,病毒滴度达10-8.5/0.1mL。分离毒对酸、碱和热均稳定,对乙醚不敏感,病毒的复制不被FUDR抑制。根据IPNV的保守基因N基因序列,设计特异性引物,结果扩增出224bp的片段。对该片段进行测序分析,发现与IPNV的参考序列有较高的相似性,表明该毒株为传染性胰脏坏死病毒。结论 IPNV已在北方虹鳟鱼中存在,可为我国北方IPNV疫情动态监测和防控提供依据。; 胡晓利李伟肇慧君吴斌

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