粟林
- 作品数：5 被引量：13H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：重庆市卫生局医学科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 沉默三联基序蛋白25基因对A549/DDP细胞株顺铂耐药性及凋亡的影响被引量：1
- 2014年
- 目的:三联基序蛋白25(tripartite motif containing 25,TRIM25)为泛素化E3连接酶,通过抑制TRIM25表达,研究其对肺癌顺铂(cis-dichlorodiamine platinum,DDP)耐药细胞株A549/DDP耐药性及凋亡的影响。方法:针对TRIM25基因设计4条不同序列sh RNA,分别构建重组质粒载体pt1、pt2、pt3、pt4。利用脂质体将质粒转染至A549/DDP细胞,采用real-time PCR、Western blot检测抑制效果,MTT实验和流式细胞仪(flow cytometry,FCM)实验分别检测在DDP作用下细胞耐药性改变和凋亡情况。结果:干扰质粒pt1在m RNA和蛋白质水平上均能特异性地抑制TRIM25的表达;MTT法结果显示,抑制TRIM25表达后,干扰组pt1细胞IC50值低于p NC组(P=0.001)及对照组(P=0.000);FCM结果显示,干扰组pt1的细胞凋亡率明显低于p NC组(P=0.005)、对照组(P=0.004)。结论:抑制TRIM25表达后,能有效地降低A549/DDP细胞株的DDP耐药性并促进其凋亡。
- 粟林秦霞敬怀志屈灿邱峰
- 关键词：SIRNAA549/DDP细胞肿瘤耐药
- 非小细胞肺癌中TRIM25和PKM2蛋白表达被引量：9
- 2015年
- 目的检测临床非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)病人组织中TRIM25、PKM2蛋白的表达情况,探讨它们的关联性及意义。方法应用组织免疫荧光法,检测TRIM25、PKM2蛋白在60例NSCLC组织和20例癌旁边正常肺组织(>5 cm)表达情况,同时运用Western blotting方法检测TRIM25、PKM2在10例新鲜NSCLC组织中表达情况,并结合标本的临床病理特征进行分析。结果 TRIM25在60例非小细胞肺癌组织中的阳性表达率45%,而20例癌旁正常肺组织中仅为10%(P=0.005)。TRIM25在腺癌中阳性表达率为28.6%,而在鳞癌中为59.4%(P=0.017)。TRIM25被发现与TNM分期、淋巴结转移之间呈正相关性(P<0.05)。PKM2在60例非小细胞肺癌组织中表达率为73.3%,而在20例癌旁正常肺组织中为30%(P=0.001)。PKM2在腺癌的表达为57.1%,而在鳞癌中为87.5%(P=0.008)。通过关联性分析TRIM25和PKM2存在相关性(P=0.026)。Western blot结果表明当TRIM25表达升高时PKM2表达增长放缓。结论 TRIM25、PKM2蛋白可能同时参与到NSCLC发生发展过程中,存在负相关性。
- 敬怀志邱峰陈世知粟林屈灿
- 关键词：癌细胞增殖免疫荧光组织化学WESTERNBLOT
- 人肺腺癌耐药细胞株A549/CDDP中相关泛素化蛋白质研究被引量：3
- 2012年
- 目的研究肺腺癌中与耐药相关的泛素化或类泛素化蛋白质及其与耐药的关系。方法从经顺铂处理和未处理的A549细胞及其耐顺铂细胞株中分离泛素化、类泛素化蛋白质,通过1D SDS-PAGE和Chip HPLC-MS/MS分析鉴别蛋白,Western blot法验证质谱结果;MTT法检测细胞对顺铂的耐药性。结果鉴定出发生类泛素化修饰蛋白质-PKM2,并发现其在耐药细胞株中低表达;以蛋白酶体抑制剂MG132干预细胞后,PKM2表达上调;CDDP和MG132联合作用细胞后,细胞耐药性下降。结论细胞中PKM2表达水平与肿瘤细胞耐药程度呈负相关,PKM2受蛋白质类泛素化修饰-SUMO化修饰调节,提示PKM2可能与肿瘤耐药的发生密切相关。
- 秦霞邱宗荫邱峰粟林屈灿
- 关键词：A549细胞肿瘤耐药泛素化
- 三基序蛋白25过表达对肺癌细胞H1299顺铂敏感性的影响
- 2014年
- 目的:初步探讨三基序蛋白25(tripartite motif containing 25,TRIM25)过表达对人肺癌细胞株H1299顺铂敏感性的影响及其分子作用机制。方法:应用基因克隆技术构建TRIM25高表达质粒载体,瞬时转染人肺癌细胞株H1299,荧光显微镜下观察转染效率,Western blot法检测TRIM25蛋白表达水平及其过表达时丙酮酸激酶M2(pyruvate kinase isozyme type M2,PKM2)蛋白水平的变化。用顺铂分别处理转染前后的H1299细胞24 h,MTT法检测细胞耐药性,Annexin V/PI双染法流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测细胞凋亡。结果 :同H1299空白组和转染pGCMV/neo空载体组比较,pGCMV-trim25转染组细胞中TRIM25蛋白的表达水平明显增加(P=0.003,P=0.005);且TRIM25过表达时,细胞中PKM2蛋白的表达水平降低(P=0.001,P=0.003)。用顺铂处理后,pGCMV-trim25转染组细胞的药物敏感性显著下降(P<0.001),转染组细胞凋亡率亦明显降低(P<0.001)。结论:TRIM25在肺癌细胞H1299中高表达时,可能通过下调PKM2而降低对顺铂的敏感性。
- 屈灿邱峰陈世知粟林敬怀志
- 关键词：药物敏感性
- siRNA沉默TRIM25基因对A549/DDP细胞顺铂耐药性及PKM2蛋白表达的影响
- 目的：通过沉默非小细胞肺癌耐顺铂细胞株A549/DDP细胞中的TRIM25基因，抑制E3泛素蛋白连结酶TRIM25表达，探讨TRIM25对A549/DDP细胞株药物敏感性、早期凋亡率，以及对肿瘤代谢中的关键酶---PKM...
- 粟林
- 关键词：肿瘤耐药性A549/DDP细胞
