管倩
- 作品数：18 被引量：33H指数：3
- 供职机构：河南农业大学牧医工程学院更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家科技重大专项河南省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 表达H5亚型禽流感病毒HA基因和鸡IL-18基因重组禽痘病毒的构建被引量：8
- 2008年
- 【目的】获得共表达H5亚型AIVHA基因和鸡IL-18基因的重组禽痘病毒。【方法】将含痘病毒启动子LP2EP2的HA基因和鸡IL-18基因插入到禽痘病毒转移载体pSY681中,获得重组转移载体pSYHA/IL-18。用脂质体将其转染已感染亲本禽痘病毒S-FPV-017株的鸡胚成纤维细胞,使其在鸡胚成纤维细胞内与禽痘病毒基因组发生同源重组,产生表达HA和IL-18的重组禽痘病毒(rFPV-HA-IL-18)。在含有X-gal的营养琼脂培养基上进行蓝斑筛选后,对重组禽痘病毒又进行了多次蚀斑克隆。【结果】以重组禽痘病毒DNA为模板,利用HA基因和鸡IL-18基因引物进行PCR,分别扩增出1条约1.7kb带和1条0.6kb左右的带。以间接免疫荧光试验、T细胞转化试验和SPF雏鸡免疫接种证实重组禽痘病毒能表达HA和鸡IL-18,并初步证明鸡IL-18增强HA免疫作用。【结论】重组禽痘病毒能表达具有生物学活性的HA和鸡IL-18。
- 陈红英黄青云崔保安李新生管倩
- 关键词：H5亚型禽流感病毒HA基因鸡IL-18重组禽痘病毒
- 表达传染性支气管炎病毒S1基因与鸡IL-18基因重组禽痘病毒的构建被引量：4
- 2010年
- 将含痘病毒启动子LP2EP2的鸡传染性支气管炎病毒S1糖蛋白基因和鸡IL-18(ChIL-18)基因同时插入到禽痘病毒转移载体pSY681中,获得重组禽痘病毒转移载体pSYS1/ChIL-18。用脂质体将其转染已感染禽痘病毒S-FPV-017株的鸡胚成纤维细胞,使其在鸡胚成纤维细胞内与禽痘病毒基因组发生同源重组,产生表达S1和鸡IL-18的重组禽痘病毒(rFPV-S1-ChIL-18)。在含有X-gal的营养琼脂培养基上进行蓝斑筛选,对重组病毒rFPV-S1-ChIL-18进行多次蚀斑克隆。以重组禽痘病毒DNA为模板,利用S1基因和鸡IL-18基因特异引物进行PCR,分别扩增出1条约1.7 kb和1条约0.6 kb的带。经间接免疫荧光法和T细胞转化试验证实感染rFPV-S1-ChIL-18的CEF中存在表达的S1和鸡IL-18。
- 管倩陈红英崔保安杨明凡高文明李双亮
- 关键词：传染性支气管炎病毒S1基因重组禽痘病毒
- 猪圆环病毒PCR检测方法的建立被引量：1
- 2009年
- 本研究建立了检测猪圆环病毒的PCR方法,并对该方法进行了标准化研究。该方法具有快速、敏感、特异性强等特点,从PCV2感染的细胞中可最低扩增到0.1 ng的DNA,且对其它病原微生物如PRV、PPV不能检出。可对病料、血清提取DNA进行检测,所有程序在5 h内得出结果。该方法可用于PCV2感染猪的快速诊断,引种检疫,分子流行病学调查。
- 王东方魏战勇崔保安陈红英郭小参吕晓丽管倩
- 关键词：PCR猪圆环病毒
- 淮南猪IL-2全基因的克隆与遗传进化分析被引量：4
- 2008年
- 参照GenBank发表的猪IL-2cDNA基因序列,设计1对引物,将河南地方品种淮南猪脾淋巴细胞在伴刀豆球蛋白A(Con A)的刺激下体外培养27 h后,提取激活淋巴细胞总RNA,进行反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,克隆到pGEM-T Easy载体上并测序。测序结果显示,克隆的HuainanPIL-2 cDNA全长为516 bp,开放阅读框(ORF)包含465bp,编码154个氨基酸,分子量为17.4 kDa,等电点为5.27,疏水氨基酸38.3%,亲水氨基酸42.0%,碱性氨基酸11%,酸性氨基酸23%。此cDNA与已报道的猪IL-2同源性为100%,与猫、牛、鸡、狗、鸭、山羊、马、人、家鼠等的IL-2基因进行比较分析,核苷酸同源性分别为83.7%,82.6%,28.2%,80.6%,29.6%,83.4%,81.3%,82.0%,61.5%。
- 郭小参崔保安陈红英杨明凡管倩吕晓丽王东方
- 关键词：白细胞介素-2基因克隆遗传进化分析
- 猪圆环病毒病的PCR诊断与防制被引量：3
- 2008年
- 根据GenBank发表的猪圆环病毒AF027217基因序列,设计、合成一对特异性引物,对疑似感染猪圆环病毒的患病猪的血液及病死仔猪内脏组织进行了PCR扩增,检测结果为阳性。并对猪场采取综合防制措施,取得较好效果。
- 王东方崔保安陈红英魏站勇吕晓丽管倩郭小参赵丽
- 关键词：猪圆环病毒PCR防制
- 固始鸡α干扰素基因克隆与序列分析被引量：1
- 2007年
- 参照GenBank上登陆的鸡α干扰素基因序列设计一对引物,应用PCR技术直接从固始鸡肝组织基因组DNA中扩增鸡α干扰素基因.将特异性片段克隆入pGEM-T Easy载体中,转化JM109感受态细胞,经质粒PCR鉴定及酶切鉴定筛选阳性菌株送往大连宝生物公司测序.测序结果表明,固始鸡α干扰素基因为582 bp.用DNAStar软件对克隆的固始鸡α干扰素基因与GenBank发表的其它品种鸡α干扰素基因序列进行同源性分析,核苷酸同源性在97.9%以上,氨基酸同源性在96.9%以上.
- 宋凌云崔保安陈红英方忠意赵丽管倩吕晓丽
- 关键词：固始鸡IFN-Α基因克隆
- 地方品种固始鸭与樱桃谷鸭α-干扰素基因的克隆与遗传进化分析被引量：2
- 2008年
- 根据GenBank发表的鸭α-干扰素(interferon-alpha,IFN-α)基因序列(AY879230),设计并合成了1对引物,提取固始鸭和樱桃谷鸭基因组DNA,应用PCR技术扩增地方品种固始鸭和樱桃谷鸭IFN-α基因,并克隆、测序.测序结果表明获得了固始鸭和樱桃谷鸭IFN-α基因,大小均为584 bp,包含1个IFN-α基因完整的开放阅读框,编码191个氨基酸的多肽.推导的氨基酸有2个潜在的N-糖基化位点,有7个与二硫键形成有关的半胱氨酸.克隆的固始鸭和樱桃谷鸭IFN-α基因与北京鸭IFN-α基因的氨基酸序列比较,仅固始鸭IFN-α基因发生突变D38N.固始鸭和樱桃谷鸭IFN-α基因与其他IFN-α基因的氨基酸序列遗传进化树分析表明樱桃谷鸭与北京鸭有很近的亲缘关系,固始鸭次之.地方品种固始鸭在非常保守的38位发生了氨基酸突变,推测这可能与该品种鸭具有很强的抗病能力有关.
- 管倩崔保安陈红英杨明凡郭小参吕晓丽王东方
- 关键词：Α-干扰素克隆遗传进化分析
- 鸡传染性支气管炎病毒S1基因与鸡IL-18基因在禽痘病毒载体中的共表达
- 为研究河南IBV的分子流行病学背景，开发有效地新型疫苗。我们从河南省汝州市爆发鸡传染性支管炎(IB)的鸡群中分离出1株病毒。由于我国鸡传染性支气管炎病毒(IBV)不同血清型的出现，对感染异种IBV分离株而发病的鸡群不能提...
- 管倩
- 关键词：传染性支气管炎基因表达
- 文献传递
- 麻鸭IL-18成熟蛋白基因的克隆、表达及其表达产物的生物学活性检测
- 引言与目的：白细胞介素18(Interleukin-18,IL-18)是近年来新发现的一种重要的细胞免疫调节因子,具有多种生物学功能。在禽类,Schneider 等(2000)首次获得 ChIL-18 cDNA,并在大肠...
- 管倩崔保安陈红英杨明凡魏战勇郭小参
- 关键词：IL-18亚克隆生物学活性油乳苗
- 文献传递
- H9亚型禽流感病毒血凝素基因重组禽痘病毒的构建
- 2008年
- 【目的】获得表达H9亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因的重组禽痘病毒。【方法】将含禽痘病毒启动子LP2EP2驱动的HA基因,插入到禽痘病毒转移载体pSY681中,获得重组转移载体pSY681/HA。用脂质体将其转染已感染亲本禽痘病毒S-FPV-017株的鸡胚成纤维细胞,使其在鸡胚成纤维细胞内与禽痘病毒基因组发生同源重组,产生表达HA的重组禽痘病毒rFPV-HA。在含有X-gal的营养琼脂培养基上进行蓝斑筛选后,对重组病毒进行多次蚀斑克隆,并用间接免疫荧光法对感染重组病毒鸡胚成纤维细胞中HA的表达产物进行鉴定。【结果】以重组禽痘病毒DNA为模板,利用HA基因特异引物进行PCR,扩增出1条约1.7 kb左右的带。以间接免疫荧光法证实重组禽痘病毒能表达HA。【结论】成功构建了表达H9亚型禽流感病毒HA基因的重组禽痘病毒,且构建的重组禽痘病毒能表达具有生物学活性的HA。
- 陈红英黄青云崔保安李新生赵丽管倩
- 关键词：H9亚型禽流感病毒HA基因重组禽痘病毒基因工程疫苗
