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小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的分离纯化及其定向诱导分化为神经元样细胞被引量：2: 2006年; 比较了全骨髓法和密度梯度离心法分离、纯化小鼠骨髓间充质干细胞,并研究了不同培养基和血清对干细胞生长的影响以及小鼠骨髓间充质干细胞的神经分化潜能。结果表明,密度梯度离心法和贴壁法结合使用可以分离纯化小鼠骨髓间充质干细胞;所获得的小鼠骨髓间充质干细胞具有诱导分化为神经元样细胞和脂肪样细胞的潜能,为小鼠骨髓间充质干细胞体外定向诱导分化的研究提供了技术支撑。; 胡亮董雅娟柏学进马保华杨恕玲淡新刚董方圆王雪红李建栋程明; 关键词：小鼠骨髓间充质干细胞神经分化

体细胞克隆牛超排胚胎玻璃化冷冻及移植试验: 2004年; 对体细胞克隆牛进行了超数排卵、胚胎玻璃化冷冻及胚胎移植试验。首先对体外受精卵进行了玻璃化冷冻保存试验,结果表明,体外受精囊胚经过EPS10和EPS20的TCM-199液玻璃化冷冻-解冻后胚胎形态正常率和发育率各组间差异不显著,囊胚孵出率EPS20组为31.3%(35/112)极显著高于EPS10组的12.2%(13/107)(P<0.01),选择玻璃化冷冻液EPS20作为体细胞克隆牛超排采卵获得胚胎的冷冻保存液。本试验对体细胞克隆牛“康康”和“双双”进行了超排试验,分别获得6枚(4枚可用胚)和10枚(9枚可用胚)胚胎,各取2枚1级胚胎应用EPS20玻璃化液进行玻璃化冷冻,解冻后分别移植到4头同期发情处理的中国荷斯坦奶牛的黄体侧子宫角内,结果为1头9908号受体母牛妊娠,并且产下1头健康的体细胞克隆牛“双双”的胚胎移植后代。试验结果表明,①体细胞克隆牛与正常牛一样对外源激素(FSH)具有较好的应答能力和超数排卵的能力;②体细胞克隆牛的胚胎可用于玻璃化冷冻保存。; 董雅娟柏学进李建栋程明; 关键词：体细胞克隆牛玻璃化冷冻超数排卵超排采卵精囊

昆明小鼠胚胎干细胞的体外分离培养被引量：2: 2006年; 利用昆明小鼠13.5dpc的胚胎制备小鼠胚胎成纤维细胞,并以小鼠胚胎成纤维细胞作为饲养层;收集3.5dICR小鼠的囊胚和桑椹胚进行体外培养,筛选纯化ES细胞集落,使其稳定传代后,对其形态学和生物学性状进行初步鉴定,获得阳性细胞集落。; 杨恕玲董雅娟柏学进程明李建栋王雪红董方圆; 关键词：昆明小鼠胚胎干细胞饲养层

小鼠MEF的制备及ES细胞的分离培养试验被引量：4: 2005年; 本试验采用两种方法制备小鼠胎儿成纤维细胞饲养层(mouse embryonic fibroblast, MEF),两种方法的差别在于用丝裂霉素-C(mitomycine-C,MMC)处理后,一种是用PBS-洗净MMC后直接使用;另一种是丝裂霉素-C处理后,用胰酶消化后重新接种,待细胞融合后再使用.将获得的小鼠胚胎直接接种在MEF上,分别在5～6d后取增殖的ICM团块,消化再接种培养,观察胚胎干细胞(embryonic stem cell, ES细胞)样集落的生长情况,并对获得的ES细胞样集落进行碱性磷酸酶(AKP)染色鉴定.结果发现两种处理方法得到的MEF培养体系均具有促进ES细胞增殖以及抑制ES细胞的分化的作用,而且得到的ES细胞样集落符合ES细胞的形态特征,AKP呈强阳性.采用本试验的第一种方法的优点是简化了胎儿成纤维细胞饲养层的制备过程,并且适合做ES细胞的饲养层.; 杨恕玲董雅娟柏学进李建栋程明; 关键词：小鼠 MEF ES细胞

牛ntES细胞核在MetaphaseⅡ去核卵中重排及其核移植融合卵的发育: 本研究以大型荷斯坦奶牛6岁成体耳尖细胞（成体耳尖组）和妊娠60d胎儿成纤维细胞（胎儿成纤维组）为核供体细胞构建核移植重构卵,将所获得的克隆囊胚在体外进行分离抑制培养,以获得的“ntES”细胞进行核移植,并对相同基因型不同...; 黄雅娟柏学进李建栋程明; 关键词：核移植; 文献传递

猪IVM卵母细胞孤雌激活及in vitro发育试验被引量：11: 2004年; 利用不同的电刺激条件对猪体外成熟卵母细胞进行孤雌激活试验 ,并探讨了不同成熟培养时间对孤雌发育的影响。试验结果 ,应用 2 .2 5kv/cm ,5 0 μs,1次电脉冲进行孤雌激活处理组获得了 2 2 % (2 2 / 10 0 )囊胚发育率 ,极显著高于 1.2 5kv/cm、5 0 μs、3次电脉冲处理组的 9.1% (9/ 98)和 2 .0 0kv/cm、5 0 μs、2次电脉冲处理组的 7.2 % (8/111) (P <0 .0 1) ;其囊胚细胞数为 6 7.8± 2 .7极显著 (P <0 .0 1)高于后两组的 5 3± 3.3、5 1.2± 5 .1。采用以上最佳电脉冲组处理成熟培养 4 2h、4 6h和 4 8h的 3组卵母细胞 ,各组间的卵裂率差异不显著 ,桑椹胚率 4 8h组为 5 7.8%(133/ 2 10 )极显著高于 4 2h组的 4 5 .7% (10 5 / 2 0 6 )和 4 6h组的 38.3% (88/ 2 11) (P <0 .0 1) ,4 2h组和 4 6h组间差异不显著 ;囊胚发育率 4 8h组 2 2 .6 % (5 2 / 2 10 )极显著高于 4 2h组的 9.6 % (2 2 / 2 0 6 )和 4 6h组的 6 .9% (16 / 2 15 ) (P<0 .0 1) ,4 2h组和 4 6h组间差异不显著 ;其囊胚细胞数 4 8h组为 6 8.9± 2 .8极显著高于 4 2h组的 5 5 .3± 3.4 (P <0 .0 1) ,显著高于 4 6h组的 5 0 .2± 5 .6 (P <0 .0 5 ) ,4 2h组极显著高于 4 6h组 (P <0 .0 1)。试验结果表明; 董雅娟柏学进李建栋程明张涌; 关键词：卵母细胞孤雌激活发育体外成熟

ES细胞的分离培养及其应用前景展望: ES细胞能在体外连续传代的特点和发育的全能性使其有着广泛的应用前景,近年来发展迅速,并成为生物学领域研究的热点.本文就胚胎干细胞的概念、研究概况、筛选培养、一般生物学特性、检测、影响分离培养的因素、研究中的问题以及应用前...; 程明柏学进董雅娟; 关键词：胚胎干细胞胚胎工程畜禽繁殖; 文献传递

牛体细胞克隆胚胎干细胞核移植融合卵的体外发育: 本研究以大型荷斯坦奶牛6岁成体耳尖细胞(成体耳尖组)和妊娠30d胎儿成纤维细胞(胎儿成纤维组)为核供体细胞构建核移植重构卵,将所获得的克隆囊胚在体外进行分化抑制培养,选出胚胎干细胞集落,将获得的核移植胚胎干细胞即'ntE...; 董雅娟柏学进李建栋程明董方圆王雪红杨恕玲; 关键词：核移植体细胞克隆胚胎干细胞体外发育; 文献传递

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程明