祝晓春
- 作品数：6 被引量：4H指数：1
- 供职机构：中国药品生物制品检定所更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 活疫苗及其生产基质中Sendai病毒RT-PCR检测方法的研究
- 2001年
- 目的 建立检测Sendai病毒的RT PCR方法并应用于活疫苗及其生产基质中Sendai病毒的检测。方法 将Sendai病毒E17株接种 9日龄鸡胚尿囊腔 ,72h后收集尿囊液 ,用于提取病毒RNA ,并逆转录成cDNA ,用两对针对Sendai病毒NP基因设计的外引物和内引物分别进行扩增。扩增产物克隆于T 载体 ,并测序。尿囊液按 10倍倍比稀释 ,进行敏感性实验。将该方法用于检测乙脑减毒活疫苗和用于生产疫苗用的普通级乳地鼠肾中的Sen dai病毒。结果 外引物和内引物的PCR分别扩增出 6 84bp和 2 48bp的片段 ,外引物PCR产物的测序结果与Gen bank报告的序列完全一致。敏感性实验结果表明 ,第一次PCR可检测到 10 - 4 病毒滴度 ,巢式PCR可检测到 10 - 7病毒滴度。乙脑减毒活疫苗和乳地鼠肾的检测结果为阴性。结论 建立检测Sendai病毒的RT
- 姚智慧祝晓春贺争鸣董关木卫礼巩薇吴惠英邢瑞昌
- 关键词：病毒滴度减毒活疫苗乙脑地鼠RT-PCR方法RT-PCR检测
- 我国肾综合征出血热疫苗生产株LR1株的全基因组序列分析被引量：1
- 2001年
- 为测定我国肾综合征出血热疫苗生产株LR1株的全基因组序列 ,了解该株分子基础 ,从提取的细胞总RNA逆转录PCR扩增 ,产物纯化后克隆T载体纯化后测序 ,结果证明 ,LR1株全基因组序列由L6 5 33、M36 16、S片段的16 92个核苷酸组成 ,依各自读码框架分别编码 2 15 1、1135、42 9个氨基酸。序列同源比较分析表明 ,LR1毒株与国外HTN型毒株高度同源 ,属同一亚型 ,尤其与HTN代表株 76 - 1183个片段同源率高达 99 3%～ 99 8% ,而与国内的HTN型病毒差异较大 ,同源率仅为 79 4%～ 84 6 %。氨基酸比较也显示了同样的结果。
- 姚智慧王维新董关木俞永新杨世龙祝晓春刘文雪马小奇李萍孙小慧
- 关键词：肾综合征出血热疫苗系统发生树
- 汉坦病毒G2基因的克隆及其在Pichia pastoris酵母表达系统中的表达
- 目的 获得汉坦病毒囊膜蛋白G2体外表达产物.方法 应用RT-PCR方法扩增汉坦病毒76-118株M片段编码的G2蛋白基因,并将扩增产物分别插入pPIC9K和pHIL-S1载体,分别与酵母的α因子信号肽和PHO1信号肽3'...
- 姚智慧祝晓春董关木贺争鸣俞永新
- 关键词：汉坦病毒基因表达肾综合征出血热
- 文献传递
- 汉坦病毒核蛋白基因截短片段在大肠杆菌中表达及其产物的初步应用被引量：1
- 2003年
- 目的 获得汉坦病毒重组核蛋白 ,并将其应用于血清学诊断。方法 采用PCR方法 ,从带有HTN型Z10株病毒全长核蛋白基因的质粒上扩增读码框的前 35 4bp的核蛋白基因片段。将截短的核蛋白基因片段插入表达载体pGEX 2 0T ,得到重组质粒pGEX2 0 Z10trNP ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,经IPTG诱导表达 ,表达产物经Glu tathioneSepharose 4B柱纯化 ,并进行抗原性及抗原特异性检测。结果 pGEX2 0 Z10trBP表达产物是相对分子质量约为 4 0 0 0 0的谷光甘肽转移酶 (GST)融合蛋白GST Z10trNP。经Westernblot分析 ,GST Z10trNP具有良好的抗原性。用纯化GST Z10trNP为抗原 ,用ELISA间接法检测出血热病人血清、出血热疫苗免疫的家兔及小鼠血清 ,均能很好地区分阴性和阳性血清。结论 GST Z10trNP表达量高 ,易于纯化 ,并且具有良好的抗原性及抗原特异性 ,是一种安全、廉价的诊断抗原。
- 祝晓春姚智慧贺争鸣胡经畬董关木俞永新
- 关键词：汉坦病毒核蛋白基因大肠杆菌免疫印迹试验间接酶联免疫吸附试验
- 汉坦病毒76-118株G2基因的克隆及其在甲基营养型酵母中的表达被引量：2
- 2003年
- 目的 获得汉坦病毒囊膜蛋白G2体外表达产物。方法 应用RT -PCR方法扩增汉坦病毒 76 -118株M片段编码的G2蛋白基因 ,并将扩增产物分别插入pPIC9K和pHIL -S1载体 ,命名为pPIC9K -G2和pHIL -S1-G2 ,分别与酵母的α因子信号肽和PH0 1信号肽 3’端融合 ,处于醇氧化物酶 (AOX1)启动子下游。这 2个载体经线性化后分别转化甲基营养型酵母菌株GS115和SMD116 8,筛选后分别得到His+ Muts 转化子和His+ Mut+ 转化子 ,诱导表达后 ,用Dot ELISA检测。结果 Dot-ELISA检测为阳性。结论 成功地表达了汉坦病毒G2囊膜蛋白 ,为进一步研究其结构功能以及生物学特性奠定了良好基础。
- 姚智慧祝晓春董关木贺争鸣俞永新
- 关键词：G2基因克隆甲基营养型酵母
- 建立活疫苗及其生产基质中Sendai病毒RT-PCR检测方法的研究初报
- 用sendai病毒E17株接种9日龄鸡胚尿囊腔,72h后收集尿囊液,用于提取病毒RNA,并逆转录成cDNA,用两对针对sendai病毒NP基因设计的外引物和内引物分别进行扩增.扩增产物克隆于T-载体,并测序.测序结果与G...
- 姚智慧祝晓春贺争鸣董关木卫礼巩薇吴惠英
- 关键词：RT-PCR活疫苗
- 文献传递
